大别山五针松的树皮提取物及其制备方法和在制药中的用途技术

本发明专利技术属中药领域，涉及大别山五针松的树皮提取物。本发明专利技术从松科（Pinaceae）松属（

Dabie mountain pine bark extract and a preparation method thereof and pharmaceutical application

The invention belongs to the field of traditional Chinese medicine, to extract from the bark of Pinus dabeshanensis. The present invention from (Pinaceae) of Pinus (Pinaceae

【技术实现步骤摘要】
大别山五针松的树皮提取物及其制备方法和在制药中的用途
本专利技术属中药领域，涉及大别山五针松的树皮提取物及其制备方法和在制药中的用途，本专利技术从大别山五针松（Pinusdabeshanensis）的树皮中提取分离得到异海松烷型和松香烷型二萜化合物，经生物活性测试表明该类化合物可显著抑制蛋白酪氨酸磷酸酶1B（PTP1B），可用于制备预防或治疗PTP1B介导的疾病，特别是II型糖尿病、肥胖症及其并发症的药物或该类药物的先导化合物。本专利技术还涉及该类化合物的制备方法。
技术介绍
现有技术公开了蛋白酪氨酸磷酸酶（proteintyrosinephosphatase,PTP）是调节细胞内蛋白酪氨酸残基磷酸化水平的酶家族，与细胞增殖和胞内多种信号转导过程密切相关（Fischeretal,Science1991,253:401-406）。蛋白酪氨酸磷酸酶1B（proteintyrosinephosphatase1B,PTP1B）广泛分布于多种人体组织中，全长约50KDa，是最早被纯化和确定生物学特征的PTP家族成员之一（Charbonneauetal,Proc.Natl.Acad.Sci.USA.1989,86:5252–5256）。PTP1B表达的改变与人类糖尿病、肥胖症和癌症等疾病相关。糖尿病（diabetesmellitus）和肥胖症（obesity）是严重威胁人类身体健康的内分泌紊乱性代谢类疾病，常伴随着外周组织细胞对胰岛素敏感性的降低（即胰岛素抵抗），引起肌肉、肝脏及脂肪组织中的糖脂代谢平衡失调。根据糖尿病的发病机制，目前一般将糖尿病分为I型糖尿病（胰岛素依赖型，IDDM）与II型糖尿病（非胰岛素依赖型，NIDDM）。其中II型糖尿病占90%以上，胰岛素抵抗是II型糖尿病发生、发展过程中的关键因素。研究表明，PTP1B可使激活的胰岛素受体和胰岛素受体底物去磷酸化，在胰岛素和瘦素的信号传导过程中起着重要的负调控作用（Kenndyetal,Science1999,283:1544–1548）。PTP1B的过度表达将会导致胰岛素和瘦素信号的变化，从而导致糖尿病和肥胖症的发生。因此，PTP1B可视为治疗糖尿病和肥胖症等相关疾病的重要的药物靶点（Johnsonetal.,Nat.Rev.Drug.Discov.2002,1:696–709）。寻找PTP1B的特异性抑制剂，通过抑制PTP1B的活性来提高外周组织对胰岛素的敏感性，对糖尿病和肥胖症治疗有着重要的应用前景。另有研究发现PTP1B在包括慢性髓细胞性白血病、乳腺癌、卵巢癌和前列腺癌在内的若干癌细胞中都有过量表达和水平提高现象（Liuetal.,J.Biol.Chem.1996,271,31290–31295;Kennethetal.,Mol.Cell.Biol.1998,18,2965–2975;Weinerteal.,J.Natl.CancerInst.1996,86,372–378），说明PTP1B在这些癌症细胞中起着调控激酶活性的作用。因此，PTP1B的抑制剂可用于治疗或预防癌症或在癌症发展时用于减缓其进展。还有研究表明PTP1B抑制剂可用于治疗或预防神经退行性疾病。PTP1B作为新的药用靶点已成为近年来生物学及创新药物研究的一个热点。随着高通量筛选技术的广泛运用，目前已经发现较多种类的PTP1B抑制剂。然而迄今为止，尚未有任何PTP1B抑制剂得以成功上市成为药物，限制其成药的首要原因是PTP1B与PTP家族中其他的酶具有相同的催化中心，在抑制PTP1B活性的同时提高其针对PTP1B的选择性极其重要。另外，目前发现的活性比较高的抑制剂多带有磷酸、羧酸、磺酸等极性基团，具有较高的负电荷，不利于透过细胞膜，导致生物利用度差。因此寻找高效、高选择性，同时兼具良好药代动力学性质的小分子PTP1B抑制剂具有重要意义，对于糖尿病和肥胖症等疾病的治疗有着广阔的应用前景。天然产物具有结构复杂性和结构多样性的特点，是新药发现的重要来源。天然产物及其衍生物独特的化学结构，使其具有高药效和对特定靶点高选择性的优点以及潜在的独特的作用机制等优点（Newman,etal.,Nat.Prod.Rep.2000,17:215–34;Newmanetal.,J.Nat.Prod.2012,75:311–335）。因此从天然活性成分中寻找开发新型、高效的PTP1B抑制剂具有重要的研究价值。统计表明，濒危植物次生代谢产物的成药性较高，是发现具有新颖结构和独特作用机制的新药物的重要来源，在国际上正引起高度重视（Ibrahimetal.,Proc.Natl.Acad.Sci.USA.2013:110,16832–16837;Zhuetal.,Proc.Natl.Acad.Sci.USA.2011,108:12943–12948）。大别山五针松（Pinusdabeshanensis）隶属松科（Pinaceae）松属（Pinus）植物，是一种常绿乔木，成年后高达30余米，直径可达50cm，是我国特有的面临濒危灭绝的珍稀树种之一，于1992年10月被列为国家珍稀树种第一批二级保护树种（Fuetal.,ChinaPlantRedDataBook,SciencePress:Beijing;NewYork,1992）；其天然分布于大别山地区海拔800-1350米的山脊悬岩陡坡和沟谷两侧。分布范围狭窄，结实母株罕见，授粉率极低，球果种子十粒九空，种子败育率极高，发芽率极低，而且常因球果种子遭松鼠危害，故林下幼树极少，自然更新十分困难，其化学成分尚未有任何报道。本申请的专利技术人基于保护性地采集少许大别山五针松植物样品，积极促进利用这一濒危珍稀资源为人类服务的宗旨，拟提供大别山五针松的树皮提取物及其制备方法和在制药中的用途。
技术实现思路
本专利技术目的是提供大别山五针松的树皮提取物及其制备方法和在制药中的用途，本专利技术从大别山五针松（Pinusdabeshanensis）的树皮中提取分离得到异海松烷型和松香烷型二萜化合物，经生物活性测试表明该类化合物可显著抑制蛋白酪氨酸磷酸酶1B（PTP1B），可用于制备预防或治疗PTP1B介导的疾病，特别是II型糖尿病、肥胖症及其并发症的药物或该类药物的先导化合物。本专利技术的所述的二萜类化合物具有如下化学结构式：其中化合物1和2为异海松烷型二萜，化合物3–5为松香烷型二萜，本专利技术中，所述的二萜类化合物，其中C-18位均氧化成羧基，同时异海松烷型二萜1和2的侧链具有三元氧环；所述的松香烷型二萜化合物3–5结构中C环芳化。本专利技术的另一目的是提供所述的化合物的制备方法。本专利技术所述的化合物由大别山五针松树皮经由本领域所涉常规的提取分离方法制备而得，其包括步骤：晾干粉碎的大别山五针松树皮用甲醇室温浸泡提取，提取液减压回收溶剂，合并后得浸膏。浸膏用水分散后依次用石油醚和乙酸乙酯萃取，得石油醚部分、乙酸乙酯部分和水溶性部分，乙酸乙酯部分经硅胶、SephadexLH-20及半制备HPLC分离，得化合物1–5。本专利技术所述的化合物可通过从植物中分离纯化得到；也可经本领域技术人员熟知的化学方法合成获得。本专利技术对所制得的二萜类化合物进行了蛋白酪氨酸磷酸酶1B（PTP1B）抑制活性实验，结果表明该类化合物均本文档来自技高网...

【技术保护点】
下式化学结构的二萜类化合物，其中，化合物

【技术特征摘要】
1.下式化学结构的二萜类化合物，其中，化合物1和2为异海松烷型二萜，化合物3–5为松香烷型二萜，。2.如权利要求1所述的二萜类化合物，其特征在于，所述的C-18位均氧化成羧基，同时异海松烷型二萜1和2的侧链具有三元氧环；所述的松香烷型二萜化合物3–5结构中C环芳化。3.如权利要求1或2所述的二萜类化合物，其特征在于，所述的异海松烷型和松香烷型二萜类化合物通过下述方法制备：采用大别山五针松Pinus...

【专利技术属性】
技术研发人员：胡金锋，胡长玲，熊娟，杨国勋，
申请(专利权)人：复旦大学，
类型：发明
国别省市：上海,31