BTNL9和ERMAP作为用于免疫疗法的新的免疫系统抑制剂技术方案

本申请提供了用结合BTNL9的抗体治疗受试者肿瘤的方法。还提供了用结合ERMAP的抗体治疗受试者肿瘤的方法。还提供了包含BTNL9或ERMAP的融合蛋白和相关组合物以及编码核酸。

BTNL9 and ERMAP are new immunosuppressive agents for immunotherapy

The present invention provides a method of treating a subject's tumor with antibodies in combination with BTNL9. Methods for treating tumor in subjects using ERMAP antibodies are also provided. Fusion proteins and related compositions comprising BTNL9 or ERMAP, and nucleic acids encoding are also provided.

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】BTNL9和ERMAP作为用于免疫疗法的新的免疫系统抑制剂相关申请的交叉引用本申请要求2014年11月25日提交的美国临时专利申请号62/084,124的权益，其内容通过引用并入本文。政府支持的声明本文专利技术是在美国国立卫生研究院授予的资助号DK083076和DK007218提供的政府支持下完成。因此，美国政府在本专利技术中具有一定的权利。专利技术背景本文引用的所有出版物、专利、专利申请出版物和书籍的公开内容通过引用整体并入本申请中，以更全面地描述本专利技术所属的技术。癌症、自身免疫疾病、传染病和移植排斥是美国和其他国家的严重公共卫生问题。免疫系统，特别是T细胞，在这些疾病中起关键作用。B7配体家族和CD28受体家族控制T细胞的活化和功能。CTLA-4和PD-1二者都是CD28家族的成员，并且针对CTLA-4的抗体(来自Bristol-MyersSquibb的Yervoy)和针对PD-1的抗体(Keytruda，Merck)分别在2011年和2014年被FDA批准为黑色素瘤的新药。PD-L1是B7家族的成员，PD-L1的抗体正在与癌症患者进行临床试验。另外，CTLA-4-Ig(Orencia)被FDA批准为成人类风湿性关节炎的新药。现有技术通过阻断B7/CD28家族成员而起作用。嗜乳脂蛋白家族与B7家族有关，但它们在免疫系统中的表达和功能在很大程度上是未知的。本专利技术解决对改进疗法的需要并提供了基于靶向BTNL9或ERMAP的治疗。专利技术概述治疗受试者肿瘤的方法，其包括向受试者施用足以抑制BTNL9并治疗肿瘤的量的结合BTNL9的抗体或其结合BTNL9的片段。治疗受试者肿瘤的方法，其包括向受试者施用足以抑制ERMAP并治疗肿瘤的量的结合ERMAP的抗体或其结合ERMAP的片段。治疗受试者肿瘤的方法，其包括向受试者施用足以抑制BTNL2并治疗肿瘤的量的结合BTNL2的抗体或其结合BTNL2的片段。治疗受试者自身免疫疾病的方法，其包括向受试者施用治疗自身免疫疾病的量的分离的血浆可溶性BTNL9。治疗受试者自身免疫疾病的方法，其包括向受试者施用治疗自身免疫疾病的量的分离的血浆可溶性ERMAP。治疗受试者自身免疫疾病的方法，其包括向受试者施用治疗自身免疫疾病的量的分离的血浆可溶性BTNL2。分离的重组融合多肽，其包含与免疫球蛋白多肽融合的BTNL9。分离的重组融合多肽，其包含与免疫球蛋白多肽融合的ERMAP。分离的重组融合多肽，其包含与免疫球蛋白多肽融合的BTNL2。分离的嵌合核酸，其编码编码如本文所述的分离的重组融合多肽。组合物，其包含如本文所述的分离的重组融合多肽和载体。附图简要说明图1A-1B。小鼠组织和抗原呈递细胞中BTN和BTNL家族成员相对于参考基因OAZ1的mRNA转录物。(A)未接触过实验小鼠组织中的转录物。BTN家族成员的转录物(上图)表明BTN转录物在乳腺组织中最丰富。具有细胞内SPRY结构域(中图)和没有细胞内SPRY结构域(底部图)的BTNL家族成员的转录物在小肠和大肠中最高。转录物在其他组织、特别是初级淋巴器官中通常也是可检测的；MOG转录物在脑组织中最高。SP，脾；LN，汇集腹股沟和肱淋巴结；TH，胸腺；BM，骨髓；MLN，肠系膜淋巴结；BR，脑；LU，肺；HE，心脏；LI，肝；ST，胃；SM，小肠；LG，大肠；PA，胰腺；KI，肾；BL，膀胱；SV，精囊；PR，前列腺；EP，附睾；TE，睾丸；FT，输卵管；VA，阴道；UT，子宫；OV，卵巢；MA，乳腺。(B)静息和活化的抗原呈递细胞(APC)中的转录物。大多数基因的转录物可在所有三种专门的APC中检测到，在大多数情况下，巨噬细胞与树突状细胞和B细胞相比较低，并且在LPS或PMA+离子霉素激活时通常不强烈上调或下调。图2A-2C。大多数重组BTN和BTNL家族成员抑制抗CD3激活的原代小鼠T细胞的功能。通过磁性细胞分离从小鼠脾脏和淋巴结中分离T细胞，并在4μg/mL平板结合的BTN-和BTNL-人Ig重组融合蛋白存在下用2.5μg/mL平板结合的抗CD3活化。(A)所有BTN和BTNL融合蛋白(ERMAP和MOG除外)在激活后3天降低CD4+T细胞的代谢活性。人Ig(hIg)、B7x-hIg和B7.2-hIg融合蛋白分别作为用于激活的基线、阴性和阳性对照。(B)BTN和BTNL融合蛋白减少活化的CD4+和CD8+T细胞的增殖。CD90.2+T细胞在激活前用CFSE脉冲4天后，用针对CD4和CD8的荧光标记抗体进行染色。在BTN、BTN2、BTNL1、BTNL2(全长和部分长度)、BTNL4、BTNL6、BTNL9和ERMAP存在下，CD4+T细胞(上图)显示出减少的增殖，而在BTN、BTN2、BTNL1、BTNL2(全长和部分长度)、BTNL4、BTNL6和BTNL9的存在下，CD8+T细胞(图)显示出减少的增殖。CD4+和CD8+T细胞的分裂指数，即平均分裂数(实心条)和分裂百分数(空心条)显示在直方图的右侧。(C)与基线(hIg)相比，在BTN和BTNL融合蛋白存在下，激活后2天CD4+T细胞分泌细胞因子IFN-γ、IL-2、TNF-α和IL-17A降低。图3A-3B。激活3天的CD4+(A)和CD8+(B)T细胞表达BTN和BTNL蛋白的受体。通过平板结合的2.5μg/mL抗CD3激活总淋巴结细胞，并与生物素化的BTN-、BTNL-hIg或hIg-融合蛋白一起培养，用针对CD4和CD8的荧光标记抗体染色，并评估融合蛋白与荧光标记的链霉抗生物素蛋白结合。两个激活的T细胞亚群表达所有BTN和BTNL家族成员(MOG除外)的受体，其与功能数据一致。图4。人BTNL2的IgV1结构域结合人CD8T细胞、人B细胞和人NK细胞。在FACS测定中显示了BTNL2-IgV1-Ig蛋白(空心直方图)和对照Ig(阴影直方图)。图5。人BTNL9的IgV1结构域结合人CD8T细胞、人B细胞和人NK细胞。在FACS测定中显示了BTNL9-IgV1-Ig蛋白(空心直方图)和对照Ig(阴影直方图)。专利技术详述本专利技术提供了第一个公开内容，即嗜乳脂蛋白样9(BTNL9)和成红细胞膜相关蛋白(ERMAP)(嗜乳脂蛋白家族的两个成员)抑制T细胞功能。短形式的BTNL2也强烈抑制。特别地，提供了BTNL9和ERMAP的重组蛋白抑制T细胞的细胞增殖和细胞因子产生以及活化的T细胞具有BTNL9和ERMAP受体的证据。由于BTNL9和ERMAP由免疫细胞或其他细胞表达，包括靶向这两种分子以增强免疫(例如癌症免疫疗法)或降低免疫力(例如自身免疫疾病的治疗)的应用。此外，包括使用BTNL2、特别是短或“部分”形式的应用。BTNL9是免疫系统的抑制剂。因此，用阻断剂(例如BTNL9的单克隆抗体)阻断BTNL9介导的免疫抑制可用于治疗人类癌症和传染病，而用可溶性蛋白质(例如BTNL9-Ig)增强BTNL9介导的免疫抑制作用可用于治疗自身免疫疾病和移植。ERMAP是免疫系统的抑制剂。因此，用阻断剂(例如ERMAP的单克隆抗体)阻断ERMAP介导的免疫抑制可用于治疗人类癌症和传染病，并且用可溶性蛋白质(例如ERMAP-Ig)增强ERMAP介导的免疫抑制作用可用于治疗自身免疫疾病和移植本文档来自技高网...

【技术保护点】
治疗受试者肿瘤的方法，其包括向受试者施用足以抑制BTNL9并治疗肿瘤的量的结合BTNL9的抗体或其结合BTNL9的片段。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2014.11.25 US 62/084,1241.治疗受试者肿瘤的方法，其包括向受试者施用足以抑制BTNL9并治疗肿瘤的量的结合BTNL9的抗体或其结合BTNL9的片段。2.治疗受试者肿瘤的方法，其包括向受试者施用足以抑制ERMAP并治疗肿瘤的量的结合ERMAP的抗体或其结合ERMAP的片段。3.治疗受试者肿瘤的方法，其包括向受试者施用足以抑制BTNL2并治疗肿瘤的量的结合BTNL2的抗体或其结合BTNL2的片段。4.权利要求1的方法，其中所述BTNL9是人BTNL9。5.权利要求2的方法，其中所述ERMAP是人ERMAP。6.权利要求3的方法，其中所述BTNL2是人BTNL2。7.权利要求1-6中任一项的方法，其中所述肿瘤是乳腺肿瘤、肺肿瘤、甲状腺肿瘤、黑素瘤、胰腺肿瘤、卵巢肿瘤、肝肿瘤、膀胱肿瘤、结肠肿瘤、前列腺肿瘤、肾肿瘤、食道肿瘤，或是血液肿瘤，或其中所述肿瘤是淋巴器官肿瘤。8.权利要求1-7中任一项的方法，其中所述抗体作为肿瘤的另外的抗癌疗法的辅助物施用。9.权利要求1、4、7或8中任一项的方法，其中施用一定量的结合BTNL9的抗体，或权利要求2、4、7或8中任一项的方法，其中施用一定量的结合ERMAP的抗体。10.权利要求3-8中任一项的方法，其中施用一定量的结合BTNL2的抗体。11.权利要求1-8中任一项的方法，其中施用所述抗体的片段。12.权利要求1-11中任一项的方法，其中所述抗体是单克隆...

【专利技术属性】
技术研发人员：臧兴兴，K·高希，
申请(专利权)人：阿尔伯特爱因斯坦医学院公司，
类型：发明
国别省市：美国,US