The invention belongs to the field of tissue cytology, in particular to a new method for digesting and separating keratinocytes in vitro. The present invention provides a method for dynamic repeated digestion. The dynamic way of digestion in a tissue dish is added to 0.25% trypsin solution preheated to 37 DEG C with a pipette tip of clockwise and counter clockwise alternately stir in the dish, the tissue and the trypsin solution full contact, make early digestion of keratinocytes from tissue. Stir for 2 minutes immediately after suction digestion of trypsin solution when trypsin digestion solution containing a certain amount of earlier keratinocytes, adding the prepared suspension digestion solution, namely a digestion. Repeating the process is repeated 5 times over the digestion process. Compared with the traditional methods, dynamic repeated methods significantly improved the number of keratinocytes isolated.
【技术实现步骤摘要】
一种改良的消化提取角质形成细胞的新方法
本专利技术涉及一种体外消化分离角质形成细胞的新方法,属于组织细胞学领域。
技术介绍
角质形成细胞是构成表皮细胞的主要组成部分,是一种可以分泌形成角质蛋白的细胞,根据其不同的分化进程,在皮肤结构中的分布为基底细胞层、棘细胞层、颗粒细胞层、角质层。自1967年Briggaman从皮肤中分离出角质形成细胞,至今50年来,培养方法不停的发展和演变,培养技术在不断进步。体外培养的角质形成细胞具有增殖修复的能力,可以移植于烧伤创面进行修复。烧伤病人在修复创面时往往面临的是供皮区的有限,在最小的供皮面积培养出更多的细胞用于修复创面是尤为重要。在培养细胞过程中,首先需要将角质形成细胞提取分离出来然后才能进行培养,现在广泛应用的方法为两步酶消化法,第一步用中性蛋白酶或胶原蛋白酶等将表皮层组织和真皮层组织分离,第二部再用胰蛋白酶将表皮层组织消化分离为单个细胞。其中消化分离细胞的环节必然存在一部分细胞未从组织上消化下来造成浪费,而常用的胰蛋白酶消化方法若过长时间消化组织,虽然更充分分离细胞,但却由于长时间的消化作用而损伤细胞的功能,如何在最小的皮肤中获取最大化的细胞量同时保持较高活性的细胞功能是提高细胞培养效率的重要因素。
技术实现思路
为了克服现有技术中角质形成细胞在消化分离过程中未彻底消化下来和长时间彻底消化而影响细胞活性的缺陷,本专利技术的目的在于提供一种改良的角质形成细胞消化分离的提取方法,以解决上述问题。本专利技术提供了一种动态多次的重复消化的方法,包括动态的方式和多次的重复。进一步的讲所述的动态方式为在消化过程中用移液器吸头在消化 ...
【技术保护点】
一种通过动态多次酶消化的方法提取角质形成细胞,其特征在于动态方式和多次的重复使用37℃胰蛋白酶溶液进行消化分离表皮细胞。
【技术特征摘要】
1.一种通过动态多次酶消化的方法提取角质形成细胞,其特征在于动态方式和多次的重复使用37℃胰蛋白酶溶液进行消化分离表皮细胞。2.如权利要求1所述的动态方式是指将预热至37℃胰蛋白酶溶液加入表皮层组织后立即持续给予搅拌,通过顺时针、逆时针交替搅拌使组织和胰蛋白酶溶液充...
【专利技术属性】
技术研发人员:申传安,王鑫,李大伟,
申请(专利权)人:申传安,王鑫,李大伟,
类型:发明
国别省市:北京,11
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