The invention provides a recovery solution and a recovery method for a pig islet cell. The recovery of liquid medium, containing 1640 and 4 trehalose - PBA. The method comprises the steps of a recovery, the frozen pig islet cells taken from liquid nitrogen, rapidly recovered to the frozen solution, centrifugation, discard the supernatant; step two, pig islet cell recovery liquid into the suspension of porcine islet cells; step three, every 4 6min pig islet cells recovery liquid at least 3 times dilution, centrifugation, discard the supernatant; step four, 1640 serum were cultured with 0.5 1mmol/L 4 PBA with 10% concentration of pig medium. The invention reduces the toxicity of the two methyl sulfoxide (DMSO) in the recovery process to the porcine islet cells in the prior art, reduces the endoplasmic reticulum stress in the process of cell recovery, and improves the recovery rate of frozen porcine pancreatic islet cells.
【技术实现步骤摘要】
一种猪胰岛细胞复苏液及复苏方法
本专利技术涉及猪胰岛细胞的冻存领域,具体涉及一种猪胰岛细胞的复苏液及复苏方法。
技术介绍
糖尿病是一种常见的慢性代谢性疾病,随着人们生活、饮食和工作方式的改变,我国糖尿病的罹患人口急剧增加。糖尿病如果得不到理想的治疗,容易并发心脑血管、肾脏、视网膜及神经系统的慢性病变和各种感染等,严重时可发生酮症酸中毒,甚至导致残废或死亡。尽管现在因酮症酸中毒而死亡的病例逐渐减少,但是糖尿病肾病、视网膜病和末梢神经系统并发症等,仍然是糖尿病诊治过程中重要而艰巨的课题。研究表明通过移植胰岛细胞可以改善糖尿病高血糖状态。胰岛细胞移植的方法逐渐引起人们的重视。而我们面临的问题是人体胰腺供给远远不能满足临床需要。因此异种胰岛细胞来源是一个重要途径。由于猪胰岛素与人胰岛素的氨基酸排列最接近,仅有一个氨基酸不同,已用于治疗I型糖尿病多年;猪的代谢特点,如血糖调定点等与人类相似;组织来源广泛;猪胰腺分离胰岛在技术上可能,并且猪胰岛能够在新鲜人血清组织培养中存活、增生。猪胰岛可能最适合于作为糖尿病患者的供体。而制约猪胰岛细胞的临床移植推广的主要因素之一就是猪胰岛细胞的冻存复苏率。猪胰岛细胞对外界环境的变化十分敏感,复苏过程对细胞造成化学变化、物理变化,对细胞产生损害。尤其是细胞在冻融过程发生坏死或凋亡是其对种种不利条件做出的应激反应。其中内质网应激是导致细胞凋亡和坏死的一条重要途径。内质网是具有重要功能的细胞器,是真核细胞蛋白质合成的主要场所。细胞在低温状态下,会合成多种蛋白质来调节自身抵抗低温的能力。而错误折叠,并与未折叠蛋白在腔内聚集都能导致内质网应激 ...
【技术保护点】
一种猪胰岛细胞复苏液,其特征在于,包含1640培养基、海藻糖和4‑PBA。
【技术特征摘要】
1.一种猪胰岛细胞复苏液,其特征在于,包含1640培养基、海藻糖和4-PBA。2.根据权利要求1所述的猪胰岛细胞复苏液,其特征在于,所述的1640培养基含有0.05-0.5mol/L海藻糖和1-5mmol/L4-PBA。3.根据权利要求2所述的猪胰岛细胞复苏液,其特征在于,所述的1640培养基含有0.05mol/L海藻糖和5mmol/L4-PBA。4.一种猪胰岛细胞复苏方法,其特征在于,包括以下步骤:步骤一,将冻存的猪胰岛细胞从液氮中取出,迅速恢复至冻存液溶解,600-800rpm离心1min,弃去上清;步骤二,加入权利要求1-3任一项所述的猪胰岛细胞复苏液重悬猪胰岛细胞;步骤三,每4-6min用猪胰岛细胞复...
【专利技术属性】
技术研发人员:王维,易受南,范立青,
申请(专利权)人:湖南赛诺生物科技股份有限公司,
类型:发明
国别省市:湖南,43
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