设计了一种新的糖尿病相关免疫调节疫苗肽VP，能够有效预防T1DM发病，并无动脉粥样硬化副作用。VP肽不会引起小鼠血清中血脂紊乱，hs‑CRP水平激增，无致动脉粥样硬化副作用。同时，VP肽能够控制NOD小鼠血糖，维持小鼠正常体重，降低T1DM发病率。同时能够保持胰岛形态，维持胰岛β细胞正常分泌功能，发挥其正常的血糖调节功能。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及药学及医学相关领域，特别涉及糖尿病的预防和治疗；更具体地说，本专利技术涉及一类新型肽及其用途，以及含有该新型肽及其衍生物和类似物的药物制剂，能用于预防、治疗人糖尿病。
技术介绍
1型糖尿病(Type1diabetesmellitus，T1DM)通常表现为胰腺炎(胰岛周围单核细胞浸润)、β细胞坏死或减少(与发病时间成正相关)或炎性因子表达。T1DM主要是由自身免疫系统紊乱造成的，自身反应性T细胞和自身抗原活化B细胞扩增，从而激活自身免疫系统对胰腺β细胞进行攻击，造成胰岛素分泌不足所导致的。自身抗原免疫能够干扰MHCclassII复合体与自身反应性CD4T细胞反应，使抗原特异性T细胞对组织中的自身抗原无应答，减少Langerhans胰岛炎性浸润。因此，可以通过诱导自身抗原免疫耐受或抑制免疫反应来保护β细胞，并通过C-肽衡量残余β细胞功能。自身抗原热休克蛋白65(Heatshockprotein，Hsp65)通常位于胰腺β细胞的成熟胰岛素分泌小管。DiaPep277是其上一个主要的T表位片段(原P277片段，VLGGGCALLRCIPALDSLTPANED)修饰后的合成肽，是位于C末端的24个aa(437-460)。P277能够通过Toll样受体2(TLR2)受体激活抗炎效应因子使免疫反应类型偏向调节型。II期临床试验结果表明在早期T1DM中，DiaPep277能够更好的保持β细胞功能，维持C肽水平，减少外源胰岛素需求。但也有文献表明，热休克蛋白60(Heatshockprotein，Hsp60)同时也能够与血管内皮细胞上的TLR4结合，激活NF-κB通路，促进炎性基因和炎性因子表达，对血管内皮细胞造成损伤。动脉粥样硬化(atherosclerosis，AS)病人血清中可以检测到高水平Hsp60抗体。P277肽免疫C57BL/6小鼠时也会引起严重的血管内皮损伤。此外，免疫高脂饲养新西兰大白兔时会诱发严重的动脉粥样硬化副作用，同时在动脉硬化斑块周围检测到大量P277抗体聚集，该现象表明在P277肽中，同时存在调节细胞免疫应答的T表位和引发体液免疫的B表位。通过表位扫描技术确定出精确B表位，在最大程度保证T表位完整性和B表位空间结构的前提下，通过单个或数个氨基酸突变或删除改造B表位。确定B表位所在氨基酸序列后，将其删除后，构建出新型糖尿病疫苗肽VP能有效调节体内免疫水平，有效预防和糖尿病。更重要的是，VP调节肽能够基本上去除P277引起动脉粥样硬化的副作用，对动脉血管内皮不会再有损伤。
技术实现思路
专利技术目的：本专利技术的目的是提供一种新型免疫调节肽，能够在保证致动脉粥样硬化副作用消除的前提下，有效预防糖尿病。技术方案：本免疫调节肽VP是根据P277野生型进行改造，删除443-445位3个氨基酸“ALL”。起到消除P277致动脉粥样硬化副作用，并维持其调节体内免疫反应状态，从而保持预防和治疗糖尿病的作用。VP：VLGGGCRCIPALDSLTPANEDP277：VLGGGCALLRCIPALDSLTPANEDVP肽在预防或治疗1型糖尿病药物中的应用。含有上述氨基酸序列、通过氨基酸置换或者修饰得到的氨基酸序列，及其与药物载体或相关活性物质组合而成的药物制剂在预防或治疗1型糖尿病药物中的应用。有益效果：P277是人热休克蛋白HSP60中的一段功能性多肽，由24个氨基酸组成，序列为437VLGGGCALLRCIPALDSLTPANED460。P277中同时含有与糖尿病相关的T表位和与动脉粥样硬化有关的B表位。本专利技术中，VP肽将测得B表位氨基酸去除，但并未大幅度改变P277肽空间构象和生理功能，起到了略优于P277的降糖作用。本专利技术的优点在于删除P277肽中443-445位的B表位相关氨基酸，构建了一种无动脉粥样硬化副作用的新型1型糖尿病预防肽。实验结果证明，VP肽免疫新西兰大白兔血脂四项指标(总胆固醇TC，总甘油三酯TG，低密度脂蛋白LDL，高密度脂蛋白HDL)降低，hs-CRP水平也明显下调。主动脉中脂类聚集现象降低，致动脉粥样硬化的副作用较P277肽显著减轻，与PBS对照组无异。同时此疫苗肽VP能够有效延迟小鼠T1DM发病，延长NOD小鼠生存时间，维持C肽水平及β细胞正常分泌功能，有效控制NOD小鼠血糖水平，并降低发病小鼠胰岛炎级别。附图说明图1VP肽对低脂或高脂饲养的新西兰大白兔血清内血脂四项指标的影响图2VP肽对低脂或高脂饲养的新西兰大白兔血清内hs-CRP含量的影响图3VP肽对心脏主动脉瓣油脂聚集的影响图4VP肽对NOD小鼠血糖的影响；图5VP肽对NOD小鼠体重的影响图6VP肽对NOD小鼠累计发病率的影响图7VP肽对NOD小鼠C肽水平的影响图8VP肽对NOD小鼠胰岛形态的影响具体实施方式下面结合一些实例对专利技术做进一步详细说明。应理解，这些实施例只是为了举例说明本专利技术，而非以任何方式限制本专利技术的范围。实施例1：VP肽动脉粥样硬化的副作用评价1、新西兰大白兔饲养及免疫将新西兰大白兔根据饲养条件不同分为2大组，分别为低脂组(LCD)24只，高脂组(HCD)24只。低脂组始终喂养普通饲料，高脂组始终饲喂高脂饲料，直至实验结束。高脂饲料配方为在普通家兔饲料的基础上添加1％胆固醇、6％猪油和10％的蛋黄粉。两组同时分为PBS组、P277组、VP组、AP组四组，每组各6只。各组动物从第零周开始第一次免疫，共免疫四次，两次间隔4周。将P277/VP/AP溶于无菌PBS中，浓度为1mg/mL.首次免疫采用CFA作为佐剂，此后三次加强免疫以IFA为佐剂。每只家兔注射1mL(即500μg多肽/只)，皮下6点免疫。PBS对照组仅用无菌PBS溶液代替蛋白溶液，其他步骤相同。2、新西兰大白兔血脂指标及hs-CRP水平每四周耳动脉取血2-4mL，室温凝固20min后，3000rpm离心10min。ELISA法检测血清中TC、TG、LDL、HDL四项血脂指标。结果如图1所示，LCD组内各免疫组血脂四项指标在观测期内均无显著性差异。VP组TC和HDL水平较PBS组明显降低，而TG和LDL则较P277组明显降低。LDL/HDL平衡中P277组明显高于PBS组，存在一定程度的血脂紊乱，而VP组则与PBS组相似，均明显低于P277组，表明基本去除此副作用。同时以双夹心ELISA法测定血清中hs-CRP水平，结果如图2所示。各组实验动物血清中hs-CRP在基础状态时均无显著性差异。16周实验期结束后，HCD+PBS组较LCD+PBS组hs-CRP含量明显升高，LCD其余各组之间差异均无统计学意义。而HCD组内，VP组较P277组hs-CRP含量明显降低。3、新西兰大白兔主动脉瓣油脂聚集评估心脏主动脉瓣制作4μm冷冻切片后，行油红染色，结果如图3所示。LCD组各组油红聚集程度均明显低于HCD组，仅有少量油红油滴沉积。而HCD组切片多有大量大块油红O附着。HCD组中，P277组油滴沉积严重程度明显高于VP组，主动脉瓣膜上染色明显。实施例2：VP肽的糖尿病相关药效学评价1、动物免疫将25只4周龄雌性NOD/LtJ小鼠随机分为4组，AP组、VP组、P277组(阳性对照)和油剂组(空白对照)。从NOD第5周开始每两周颈部皮下给药1本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种新型糖尿病相关免疫调节肽VP，其特征在于其氨基酸序列为：VLGGGCRCIPALDSLTPANED。含有上述氨基酸序列、通过氨基酸置换或者修饰得到的氨基酸序列。
【技术特征摘要】
1.一种新型糖尿病相关免疫调节肽VP，其特征在于其氨基酸序列为：VLGGGCRCIPALDSLTPANED。含有上述氨基酸序列、通过氨基酸置换或者修饰得到的氨基酸序列。2.根据权利要求1所述的一种新型肽在治疗或预防I型糖尿病药物中的应用。3.根据权利要求1所述的新型肽与药物载体或药物活性物质制成组合物在治疗或预防I型糖尿病药物中的应用。4.根...
【专利技术属性】
技术研发人员：金亮，卢世平，高华山，吴洁，张艳峰，
申请(专利权)人：中国药科大学，
类型：发明
国别省市：江苏;32
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