一种胰岛细胞体外增殖方法技术

本发明专利技术属于细胞培养技术领域，具体为一种胰岛细胞体外增殖方法。本发明专利技术采用重组碱性成纤维细胞生长因子处理体外培养的胰岛细胞，使其大量增殖，传代可达２０代以上，增殖时间超过两个月，并在一定的时间内保留胰岛内分泌的特征。经碱性成纤维细胞生长因子刺激的胰岛细胞经肝门静脉移植给链脲霉素诱导的糖尿病大鼠肝中，糖尿病症状在一周内完全恢复。在未经任何免疫抑止剂处理的情况下，接受移植的糖尿病大鼠在超过两个月的时间内血糖维持正常水平，体重逐渐上升，同时移植后二十天糖耐量实验证明移植大鼠对葡萄糖的响应得到明显的改善。依本发明专利技术所述方案增殖的胰岛细胞在植入糖尿病模型动物后，一方面在肝脏内表达胰岛素，另一方面具有明显促进胰岛再生的功能，并上述两方面达到治疗糖尿病的目的。

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
一种胰岛细胞体外增殖方法，其特征在于具体步骤如下：采用常规方法获得来源于胰腺的富含胰岛的混合细胞群，用添加１５％胎牛血清的ＲＤＭ１６４０培养基重悬，平铺于培养皿中，置３５－３９℃，含有５％二氧化碳的培养箱中培养；待细胞完全贴壁，以１∶２比例传代于培养皿中，加入ｂＦＧＦ，使ｂＦＧＦ的终浓度为１．５－２．５ｎｇ／ｍｌ，按常规细胞培养方法培养；待细胞覆盖达９０％以上时，以１∶３传代入培养皿；在培养基中保ｂＦＧＦ的上述浓度，１２－１６天后传代至２－４×１０↑［７］的细胞总量，即可进行移植或继续培养。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：李戈，卢大儒，
申请(专利权)人：复旦大学，
类型：发明
国别省市：31[中国|上海]