间充质干细胞分化为表皮细胞的方法及试剂盒技术

本发明专利技术提供一种间充质干细胞分化为表皮细胞的方法，该方法包括将间充质干细胞加入诱导分化液中，于37℃、5％CO

Method and kit for differentiation of mesenchymal stem cells into epidermal cells

The present invention provides a method for differentiation of mesenchymal stem cells into epidermal cells, which comprises the inclusion of mesenchymal stem cells into an induced differentiation solution at 37 DEG C, 5%CO

【技术实现步骤摘要】
间充质干细胞分化为表皮细胞的方法及试剂盒
本专利技术属于细胞分化
，尤其涉及一种间充质干细胞分化为表皮细胞的方法及试剂盒。
技术介绍
表皮细胞具有多分化潜能，除再生皮肤的多层表皮结构外，还形成汗腺、毛发和毛囊等皮肤附属器官。因此，表皮细胞是构建组织工程化皮肤比较理想的种子细胞。但由于目前获取与纯化表皮细胞较为困难，从而妨碍了表皮细胞作为组织工程化皮肤种子细胞的应用。间充质干细胞亦具有多向分化潜能，在不同的诱导条件下可分化为多种组织细胞，如肌细胞、成骨细胞、脂肪细胞、肝细胞、心肌细胞、肺细胞、神经细胞等，是组织工程较为理想的种子细胞。最近研究表明：间充质干细胞具有分化为表皮细胞的潜能。例如：骨髓间充质干细胞体外诱导分化为表皮干细胞的研究(龙剑虹，等，中南大学学报，2006,06,32-38)公开了将骨髓间充质干细胞诱导分化为表皮干细胞的方法，该方法是将骨髓间充质干细胞加入诱导分化的培养液中，进行培养，其中所述的诱导分化的培养液是含有20％胎牛血清、8μg/LEGF、50％HaCaT细胞上清液的DMEM培养液；此外一般的诱导分化的培养液中还需要加入其他生长因子、青霉素或抗生素等物质，现有技术公开的方法中所使用的诱导分化的培养液对间充质干细胞的诱导分化能力差，不利于表皮细胞的形成，分化专一性不强。
技术实现思路
为了解决上述技术问题，本专利技术提供一种间充质干细胞分化为表皮细胞的方法，该方法利用了新的诱导分化液，有利于提高间充质干细胞分化为表皮细胞的专一性和分化能力。本专利技术具体技术方法如下：本专利技术提供一种间充质干细胞分化为表皮细胞的方法，该方法包括如下步骤：将间充质干细胞加入诱导分化液中，于37℃、5％CO2饱和湿度的培养箱中，进行诱导分化；所述诱导分化液主要由分化组合物和DMEM培养基水溶液配置而成；配置5-10mg所述分化组合物所用的DMEM培养基水溶液的体积为1mL；所述DMEM培养基水溶液的浓度为10-25mg/mL，所述分化组合物主要由如下重量份数的成分制备而成：转铁蛋白1-3份、维生素C0.5-1份、槲皮素5-10份、α-生育酚琥珀酸单酯2-5份、异银杏双黄酮10-15份、氢化卵磷脂1-3份和赖氨酸2-5份。本专利技术采用自体来源的间充质干细胞经过诱导分化表皮细胞，所使用的诱导分化液能够提高间充质干细胞经过诱导分化表皮细胞的分化能力和专一性。进一步的改进，所述分化组合物还包括重量份数为0.5-1份的麦芽糖醇、2-5份的磷酸二氢钾、1-3份的琼脂和2-3份的生物素。在分化组合物中加入麦芽糖醇、磷酸二氢钾、琼脂和生物素不但可以进一步提高诱导分化能力，并且还可以缩短诱导分化的时间，提高诱导分化效率。进一步的改进，所述分化组合物还包括重量份数为1-3份的谷氨酸钠、0.2-0.5份的磷酯酰丝氨酸和2-5份的氯化硒。通过在分化组合物中加入氨酸钠、磷酯酰丝氨酸和氯化硒的混合物可以提高诱导分化液防止细菌感染的能力，有效抑制细菌滋生，保障诱导分化液的使用安全，提高分化方法中诱导分化过程的安全性，进而提高诱导后表皮细胞的存活率。进一步的改进，所述方法还包括：在进行诱导分化之前对间充质干细胞进行扩增培养。进一步的改进，所述扩增培养具体步骤为：将原代间充质干细胞接种于第一培养基中，在37℃、5％CO2、饱和湿度的条件下进行培养，8h后更换一半量的第一培养基，以后每隔4h更换2/3量的第一培养基，培养2天后，弃去未贴壁的细胞，将第一培养基更换成第二培养基，继续培养3-5天，每个一天更换全量第二培养基，培养完毕后，加入细胞消化液消化4min，收集间充质干细胞。进一步的，所述第一培养基主要由第一培养组合物和DMEM培养基水溶液配置而成；配置5-10mg所述第一培养组合物所用的DMEM培养基水溶液的体积为1mL，所述DMEM培养基水溶液的浓度为6.3-7.8mg/mL。优选地，所述第一培养组合物主要由如下重量份数的成分制备而成：成纤维细胞生长因子5-10份、谷氨酰胺2-5份、白藜芦醇2-5份、维生素E1-3份、普鲁兰2-5份和枸橼酸钠0.5-2份。进一步的改进，所述第二培养基主要由第二培养组合物和DMEM培养基水溶液配置而成；配置5-10mg所述第二培养组合物所用的DMEM培养基水溶液的体积为1mL，所述DMEM培养基水溶液的浓度为5-7.5mg/mL。优选地，所述第二培养组合物主要由如下重量份数的成分制备而成：胎牛血清5-10份、甲壳糖1-3份、硝酸铵0.5-1份、钼酸钠0.5-2份、川芎嗪2-5份和L-抗坏血酸-2-磷酸镁2-5份。优选的，所述细胞消化液为含0.25％胰酶的PBS缓冲液。本专利技术通过选择二次培养的方法并选择不同的培养基来对间充质干细胞进行培养，显著提高了间充质干细胞的培养增殖速度和培养扩增数量。本专利技术另一方面还提供一种间充质干细胞分化为表皮细胞的试剂盒，该试剂盒包括盒体和位于盒体内部的若干试剂瓶，若干所述试剂瓶内分别盛装有诱导分化液、第一培养基、第二培养基和细胞消化液，所述所述诱导分化液主要由分化组合物和DMEM培养基水溶液配置而成；配置5-10mg所述分化组合物所用的DMEM培养基水溶液的体积为1mL；所述DMEM培养基水溶液的浓度为10-25mg/mL，所述分化组合物主要由如下重量份数的成分制备而成：转铁蛋白1-3份、维生素C0.5-1份、槲皮素5-10份、α-生育酚琥珀酸单酯2-5份、异银杏双黄酮10-15份、氢化卵磷脂1-3份和赖氨酸2-5份；所述第一培养基主要由第一培养组合物和DMEM培养基水溶液配置而成；配置5-10mg所述第一培养组合物所用的DMEM培养基水溶液的体积为1mL，所述DMEM培养基水溶液的浓度为6.3-7.8mg/mL；所述第二培养基主要由第二培养组合物和DMEM培养基水溶液配置而成；配置5-10mg所述第二培养组合物所用的DMEM培养基水溶液的体积为1mL，所述DMEM培养基水溶液的浓度为5-7.5mg/mL。本专利技术提供的间充质干细胞分化为表皮细胞的方法采用自体来源丰富的间充质干细胞经过诱导分化后，得到数量充足的表皮细胞，该方法采用的诱导分化液能够显著提高见充质干细胞诱导分化为表皮细胞的诱导分化能力及专一性，并且显著降低了诱导分化的时间、提高了诱导分化后表皮细胞的存活率。具体实施方式实施例1一种间充质干细胞分化为表皮细胞的方法，该方法包括如下步骤：将间充质干细胞加入诱导分化液中，于37℃、5％CO2饱和湿度的培养箱中，进行诱导分化；所述诱导分化液主要由分化组合物和DMEM培养基水溶液配置而成；配置5mg所述分化组合物所用的DMEM培养基水溶液的体积为1mL；所述DMEM培养基水溶液的浓度为10mg/mL，所述分化组合物主要由如下重量份数的成分制备而成：转铁蛋白1份、维生素C0.5份、槲皮素5份、α-生育酚琥珀酸单酯2份、异银杏双黄酮10份、氢化卵磷脂1份和赖氨酸2份。实施例2一种间充质干细胞分化为表皮细胞的方法，该方法包括如下步骤：将间充质干细胞加入诱导分化液中，于37℃、5％CO2饱和湿度的培养箱中，进行诱导分化；所述诱导分化液主要由分化组合物和DMEM培养基水溶液配置而成；配置7.5mg所述分化组合物所用的DMEM培养基水溶液的体积为1mL；所述DMEM培养基水溶液的浓度本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种间充质干细胞分化为表皮细胞的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：将间充质干细胞加入诱导分化液中，于37℃、5％CO

【技术特征摘要】
1.一种间充质干细胞分化为表皮细胞的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：将间充质干细胞加入诱导分化液中，于37℃、5％CO2饱和湿度的培养箱中，进行诱导分化；所述诱导分化液主要由分化组合物和DMEM培养基水溶液配置而成；配置5-10mg所述分化组合物所用的DMEM培养基水溶液的体积为1mL；所述DMEM培养基水溶液的浓度为10-25mg/mL，所述分化组合物主要由如下重量份数的成分制备而成：转铁蛋白1-3份、维生素C0.5-1份、槲皮素5-10份、α-生育酚琥珀酸单酯2-5份、异银杏双黄酮10-15份、氢化卵磷脂1-3份和赖氨酸2-5份。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述分化组合物还包括重量份数为0.5-1份的麦芽糖醇、2-5份的磷酸二氢钾、1-3份的琼脂和2-3份的生物素。3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述分化组合物还包括重量份数为1-3份的谷氨酸钠、0.2-0.5份的磷酯酰丝氨酸和2-5份的氯化硒。4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述方法还包括：在进行诱导分化之前对间充质干细胞进行扩增培养。5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述扩增培养具体步骤为：将原代间充质干细胞接种于第一培养基中，在37℃、5％CO2、饱和湿度的条件下进行培养，8h后更换一半量的第一培养基，以后每隔4h更换2/3量的第一培养基，培养2天后，弃去未贴壁的细胞，将第一培养基更换成第二培养基，继续培养3-5天，每个一天更换全量第二培养基，培养完毕后，加入细胞消化液消化4min，收集间充质干细胞。6.如权利要求5所述的方法，其特征在于，所述第一培养基主要由第一培养组合物和DMEM培养基水溶液配置而成；配置5-10mg所述第一培养组合物所用的DMEM培养基水溶液的体积为1mL，所述DMEM培养基水溶液的浓度为6.3-7.8mg/mL。7.如权利要求6所述的方法，其...

【专利技术属性】
技术研发人员：汤苏阳，
申请(专利权)人：徐子雁，
类型：发明
国别省市：北京,11