一种稳定的结肠上皮细胞培养方法技术

本发明专利技术涉及生物技术领域，特别是涉及一种稳定的结肠上皮细胞培养方法。本发明专利技术所提供的培养方法包括如下步骤：将结肠组织剪碎，并加入消化液中进行消化，所述消化液中包含IV型胶原酶和透明质酸酶；将上清转移至离心管离心，离心后弃去上清，并使用完全培养基重悬细胞，并将细胞接种培养；培养至瓶底细胞覆盖率≥70%时消化、离心，并重悬于完全培养基中，传代培养后，即得结肠上皮细胞。本发明专利技术的成年大鼠结肠上皮细胞制备与培养方法，采用Ⅳ型胶原酶和透明质酸酶联合消化，并探索了最佳的消化时间，最终得到较纯的大鼠结肠上皮细胞。

A stable method for colon epithelial cell culture

The invention relates to the technical field of biology, in particular to a stable colon epithelial cell culture method. Training method provided by the invention comprises the following steps: the colonic tissue was cut, and adding of digestive juice, including type IV collagenase and hyaluronidase digestion in the supernatant; will transfer to the centrifugal centrifuge tube after centrifugation, discard the supernatant, and the use of complete medium and heavy suspension cells. The cells were cultured; cultured cells at the bottom of the bottle cover is not less than 70% digestion, centrifugation, and suspended in complete medium, subculture, the colonic epithelial cells. Colonic epithelial cells of adult rats for preparation and cultivation method of the invention, the digestion of collagenase and hyaluronidase, and explore the optimal digestion time, finally get the relatively pure colonic epithelial cells in rats.

【技术实现步骤摘要】
一种稳定的结肠上皮细胞培养方法
本专利技术涉及生物
，特别是涉及一种稳定的结肠上皮细胞培养方法。
技术介绍
结肠上皮细胞是结肠黏膜屏障的主要结构基础，不仅能阻止细菌、内毒素进入体循环，还能分泌多种细胞因子，促进结肠黏膜损伤后的修复及促进免疫耐受。结肠上皮细胞受损及功能的缺失会导致多种疾病的产生。目前，对肠上皮细胞的离体实验研究多采用细胞株进行，如：colorectalcancercellline(Caco2)、humancolonadenocarcinoma(HT-29)、intestinalepithelialcells(IEC-6)等，这些细胞株或来源于肿瘤细胞，或经过永生化处理，在形态及功能方面和正常结肠上皮细胞存在差异，不利于机体生理病理反应及药物作用的分析。原代细胞具有直接来源于机体组织，生物性状尚未发生变化的优势，然而分离培养技术是一个难题，限制了其应用。因此，建立可靠稳定的结肠上皮细胞分离、纯化及原代培养方法，对研究结肠上皮的生理病理机制及相关疾病的发病机制和治疗具有重要的意义。国外文献[BatenA,akamotoK,ShamsuddinAM.Long-term本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种稳定的哺乳动物结肠上皮细胞培养方法，包括如下步骤：1)将结肠组织剪碎，并加入消化液中进行消化，所述消化液中包含IV型胶原酶和透明质酸酶；2)将上清转移至离心管离心，离心后弃去上清，并使用完全培养基重悬细胞，并将细胞接种培养；3)培养至瓶底细胞覆盖率≥70％时消化、离心，并重悬于完全培养基中，传代培养后，即得结肠上皮细胞。

【技术特征摘要】
1.一种稳定的哺乳动物结肠上皮细胞培养方法，包括如下步骤：1)将结肠组织剪碎，并加入消化液中进行消化，所述消化液中包含IV型胶原酶和透明质酸酶；2)将上清转移至离心管离心，离心后弃去上清，并使用完全培养基重悬细胞，并将细胞接种培养；3)培养至瓶底细胞覆盖率≥70％时消化、离心，并重悬于完全培养基中，传代培养后，即得结肠上皮细胞。2.如权利要求1所述的结肠上皮细胞培养方法，其特征在于，所述哺乳动物为大鼠。3.如权利要求2所述的结肠上皮细胞培养方法，其特征在于，所述步骤1中，结肠组织通过如下步骤获得：首先，麻醉成年大鼠，消毒后放入超净台内，无菌条件下打开大鼠腹腔，找到自肛门向近端5～10cm的大鼠结肠，将肠系膜组织剥离干净，完全游离出结肠，剪下后浸泡在含抗生素的处理液中，将结肠剪开，用含抗生素的处理液漂洗以去除结肠内容物。4.如权利要求1所述的结肠上皮细胞培养方法，其特征在于，所述步骤1中，所述消化液为中IV型胶原酶和透明质酸酶的水溶液，消化液中IV型胶原酶和透明质酸酶的重量比为4.5～5.5:1，消化时间为1.5～2.5h，消化液中IV型胶原酶和透明质酸酶的总浓度为0.36～0.44wt％。5.如权利要求1所述的结肠上皮细胞培养方法，其特征在于，所述步骤1中的消化的具体条件为：每1mm3结肠组织使用6～9ml消化液，消化过程中对消...

【专利技术属性】
技术研发人员：施茵，商海霞，吴焕淦，孙洁，陈柳，赵继梦，季蓉，包春辉，吴璐一，李雨薇，
申请(专利权)人：上海市针灸经络研究所，
类型：发明
国别省市：上海,31