一种人气道上皮细胞的培养方法技术

本发明专利技术公开了一种人气道上皮细胞的培养方法，包括以下步骤：(1)获取原代培养的人气道上皮细胞；(2)获取传代培养的人气道上皮细胞：当原代细胞达到70～90％融合密度后，用磷酸缓冲液溶液清洗，加入0.25％胰蛋白酶溶液，室温消化5～10分钟，当细胞出现回缩、悬浮时，收集细胞悬浮液，加入含有蛋白酶抑制剂的等量溶液，离心收集细胞，然后以1～6×106细胞/ml的浓度接种于新的含完全培养基的培养皿中进行培养，3～5天细胞生长至对数生长期，获得传代培养的人气道上皮细胞。本发明专利技术的培养方法技术稳定，重复性好，培养的细胞纯度高，形态均一，生长良好，且可以连续传代。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术是，属于生物

技术介绍
气管或支气管是下呼吸道的重要组成部分，气道上皮细胞是呼吸道的重要防御屏障，已有研究发现，反复的呼吸道感染与粘膜上皮功能失调密切相关，因此，气道上皮细胞是探寻C0PD、哮喘等呼吸系统常见疾病发病机制的重要研究材料。气道上皮细胞离体后， 生物学特性尚未发生变化，能在一定程度上反映体内状态，并显示亲体组织的形态学特征和细胞生物学特性，因此体外气道上皮细胞的原代培养和细胞株的建立是研究亲体组织生物学特性的有效手段，同时也为研究呼吸道疾病发病机制及其防治措施提供研究工具。另外，我国的气管移植技术一直处于实验研究阶段，组织工程气管是气管移植的重要手段，而气道上皮细胞作为种子细胞是组织工程气管中不可缺少的部分，因此找到一种简便、高效的气道上皮培养方法对研究呼吸系统疾病发病机制以及开展气管移植都具有重要的意义。目前，气道上皮细胞的培养方法主要有胰酶和/或蛋白酶消化结合机械剥离粘膜法和/或机械刮刷法，这些方法都存在以下缺点(1)机械剥离粘膜法/机械刮刷法是采用镊子等器械在气管或支气管上进行钝性分离，其操作难度大，且在剥离过程中容易损伤上皮细胞，获得的存活本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：卢文菊，何建行，王健，钟南山，张晨婷，徐小明，陈豫钦，巩雪芳，
申请(专利权)人：广州医学院第一附属医院，呼吸疾病国家重点实验室，
类型：发明
国别省市：