一种肺及肺癌组织培养方法以及用其构建肺癌小鼠动物模型方法技术

本发明专利技术公开了一种体外培养人正常肺组织及肺癌组织类器官的方法，包括获取新鲜的人源肺组织细胞，胶原酶消化为单细胞；体外3D培养条件培养人肺组织及肺癌组织类器官。体外培养人正常肺组织及肺癌组织类器官（organoid）的方法：获取新鲜的人源肺组织细胞，胶原酶消化为单细胞；体外3D培养条件培养人肺癌组织类器官；H&E染色明确结构及形态，q‑PCR检测相关基因表达；免疫荧光染色鉴定细胞来源检测相关蛋白表达。以及基于上述的类器官构建小鼠动物模型的方法，对于构建大规模一致性好的人源、原位肺癌动物模型具有重要的意义，为肺癌的基础研究工作提供较好的基础及相关临床应用前景。

Lung and lung cancer tissue culture method and method for constructing lung cancer mouse animal model by using same

The invention discloses a method for human normal lung tissue and lung cancer tissue organ culture in vitro, including access to fresh human lung tissue cells into single cells by collagenase digestion in vitro; 3D cultured human lung tissue and lung cancer tissue organ. Human normal lung tissue and lung cancer tissue organ cultured in vitro (organoid) method: obtaining fresh lung tissue of human cells into single cells by collagenase digestion in vitro; 3D cultured human lung cancer tissue organ; H& E staining clear structure and morphology, the expression of Q PCR gene detection; immunofluorescence staining expression detection of protein identification of cells. Based on the above method, the class construction organs of mice animal model, is of great significance for the construction of a large-scale good consistency of the human and animal models of lung cancer in situ, provide a good base for clinical application and related basic research of lung cancer.

【技术实现步骤摘要】
一种肺及肺癌组织培养方法以及用其构建肺癌小鼠动物模型方法
本专利技术属于生物医药领域，特别是人肺正常组织及肺癌组织类器官培养体系，属于细胞培养或组织培养技术。本专利技术还包括了利用培养得到的肺癌组织构建小鼠动物模型的方法。
技术介绍
肺癌是目前发病率及死亡率第一的恶性肿瘤，肺组织/肺癌组织细胞原代培养及肺癌动物模型是研究肺癌发生、发展及治疗等的重要工具。传统的二维细胞培养技术使得培养的细胞在体外环境下逐渐失去其在体内原有状态，其形态、生物功能、遗传等方面的表现和人体内细胞差异极大，不能够满足现有的对于人肺癌医学研究需要。体外3D培养条件下使用成熟人体细胞培养人体组织类器官(organoid)，这种类器官可在体外表现出与体内细胞相似的遗传物质以及结构的稳定性，并可以在体内和体外被顺利诱导为具有正常功能的组织细胞。科学家已成功在体外3D培养条件下使用成熟人源组织细胞培养出肝脏、小肠等组织类器官。这些类器官细胞在体外培养条件下保持与体内细胞相似的遗传物质，并且具有形态结构的稳定性，可以在体内外被顺利诱导为具有正常功能的对应组织细胞。这一技术可以为研究提供充足的遗传稳定、均一的体外培养的组织本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种体外培养人正常肺组织及肺癌组织类器官的方法，包括获取新鲜的人源肺组织细胞，胶原酶消化为单细胞；体外3D培养条件培养人肺癌组织类器官。

【技术特征摘要】
1.一种体外培养人正常肺组织及肺癌组织类器官的方法，包括获取新鲜的人源肺组织细胞，胶原酶消化为单细胞；体外3D培养条件培养人肺癌组织类器官。2.如权利要求1所述体外培养人正常肺组织及肺癌组织类器官的方法，其特征在于，所述体外培养人正常肺组织及肺癌组织类器官的方法，获取新鲜的人源肺癌组织，胶原酶消化为单细胞，与基质胶混合后使用条件培养基培养。3.如权利要求2所述体外培养人正常肺组织及肺癌组织类器官的方法，其特征在于，所述条件培养基含有以下成分：B27、N-acetylcysteine、EGF、Noggin、R-spondin1、A83-01、FGF10、Nicotinamide、Y-27632*、WNT3a、Glutamax、N2、Gastin中的一种或多种。4.如权利要求3所述体外培养人正常肺组织及肺癌组织类器官的方法，其特征在于，至少含有其中的FGF10，R-spondin1，Noggin，WNT3a，A83-01，B27/N2。5.如权利要求3所述体外培养人正常肺组织及肺癌组织类器官的方法，其特征在于，所述条件培养基的成分如下：6.如权利要求2所述体外培养人正常肺组织及肺癌组织类器官的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)取肺组织和/或肺癌组织剪碎，优选在冰上剪碎或同等低温环境剪碎，或同等低温环境机械破碎；(2)取剪碎的组织块，胶原酶消化处理，优选在gentalMACS全自动组织处理器上运行HumanLung及HumanTumor程序1，用胶原酶重悬；优选的，剪碎的组织块用量为0.5-1克，胶原酶的用量为10mL；(3)将胶原酶处理后的组织块，在36-38℃继续消化处理10-30min；优选为37℃摇床上进行消化处理，消化时间优选20min；(4)将经过消化的溶液转移到全自动组织处理器gentalMACS上；优选地，在gentalMACS上，运行HumanLung及HumanTumor程序2；(5)步骤4处理后的溶液，在36-38℃继续消化处理5-20min；(6)将步骤5处理好的含有肺组织细胞的液体...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈崇，纳飞飞，
申请(专利权)人：四川大学华西医院，
类型：发明
国别省市：四川,51