一种发酵生产ALA的重组菌株及其制备方法技术

本发明专利技术提供了一种重组的甲醇利用型酵母，尤其是带有外源ALA(5‑氨基乙酰丙酸)合成酶表达载体的重组菌以及利用该重组菌生产ALA的方法和如何构建这样一种表达载体和获得重组工程菌的方法。具有该特性的重组菌在含甘油和适量甘氨酸、琥珀酸以及一定碳源的培养基中发酵，可以获得高水平的ALA积累。本发明专利技术所提供的新型甲醇利用型巴斯德毕赤酵母能够实现5‑氨基乙酰丙酸的绿色无污染生产，可以广泛应用于农业和饲料领域。

Recombinant strain for producing ALA by fermentation and preparation method thereof

The present invention provides a recombinant yeast by using methanol, especially with exogenous ALA (5 5-aminolevulinic acid synthase) expression of recombinant vectors and methods of using the recombinant ALA production and how to construct an expression vector and the recombinant engineering bacteria method. The recombinant bacteria with this property can be fermented in a medium containing glycerol and glycine, succinic acid and certain carbon sources, and high levels of ALA accumulation can be obtained. Green pollution-free production of new methanol provided by the invention by Pasteur Pichia pastoris can achieve 5 5-aminolevulinic acid, can be widely used in the field of agriculture and feed.

【技术实现步骤摘要】
一种发酵生产ALA的重组菌株及其制备方法
本专利技术涉及代谢工程和生物制造领域，具体地说，涉及利用DNA重组技术构建甲醇利用型酵母工程菌株，并用该菌株来生产ALA的方法。
技术介绍
5-氨基乙酰丙酸（ALA）是生物体中重要的中间代谢产物，是合成卟啉、叶绿素、血红素和维生素B12的前体物，在自然界动植物体内普遍存在。近年来，ALA因其对人畜无毒性，并可在环境中易降解、无残留的特性，被公认为一种无公害的绿色农用化学品，在农业上可作为绿色除草剂、杀虫剂、植物生长促进剂等。在医学领域，5-氨基乙酰丙酸可以用于光驱动疗法来治疗多种癌症，并对一些其他疾病有治疗效果。目前ALA的合成方法主要有化学合成法和微生物发酵法两种，其中化学合成法因其步骤繁复、造成的污染较严重，产物收率低等缺点日益被微生物发酵法所取代。微生物合成ALA的代谢途径主要有C4途径和C5途径两种，C4途径主要存在于光合细菌、真菌以及动物体中；C5途径广泛存在于植物、藻类以及细菌中。随着现在生物技术的飞速发展，利用有效的代谢工程原理和基因编辑技术，有望突破现有的技术瓶颈，实现ALA发酵法的工业化生产。早期，微生物合成ALA的相关研究本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种发酵生产ALA的重组菌株，其特征在于，是利用甲醇利用型酵母发酵来生产的，所述的甲醇利用型酵母为

【技术特征摘要】
1.一种发酵生产ALA的重组菌株，其特征在于，是利用甲醇利用型酵母发酵来生产的，所述的甲醇利用型酵母为Hansenula,Candida,pichia或Torulopsis等属的酵母，由重组表达外源ALAS的载体转化后获得。2.如权利要求1所述的方法，其特征在于该甲醇利用型酵母为巴斯德毕赤酵母Pichiapastoris菌株。3.如权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述的表达载体包含一个编码ALA合成酶的核苷酸序列。4.如权利要求3所述的方法，其特征在于，所述的表达载体中的ALA合成酶是酿酒酵母Saccharomycescerevisiae来源的，尤其是酿酒酵母Saccharomycescer...

【专利技术属性】
技术研发人员：叶春江，王凯，王元秀，
申请(专利权)人：济南大学，
类型：发明
国别省市：山东,37