本发明专利技术公开了一种提高NK细胞对胃癌杀伤力的化合物及其制剂，该化合物为一类具有特定通式结构的吡咯化合物。本发明专利技术还提供了一种药物制剂，含有该吡咯化合物，还含有药学上可以接受的载体，制备成药学上可以接受的剂型。细胞水平上，本发明专利技术提供的吡咯化合物可以有效增强NK细胞对胃癌细胞的杀伤活性，且呈一定的浓度依赖性；动物水平上，本发明专利技术提供的吡咯化合物对裸鼠胃癌移植瘤具有显著的体内抑制作用，结合细胞水平实验结果，吡咯化合物很有可能是通过提高NK细胞对胃癌移植瘤杀伤作用而实现体内抑瘤效果的。本发明专利技术提供的吡咯化合物及其制剂可以用于制备提高NK细胞对胃癌杀伤力的药物。
Compound for improving the lethality of NK cell to gastric cancer and its preparation
The invention discloses a compound for improving the lethality of NK cells to gastric cancer and a preparation thereof, which is a group of pyrrole compounds with specific general structure. The invention also provides a pharmaceutical preparation containing the pyrrole compound and a pharmaceutically acceptable carrier to prepare a pharmaceutically acceptable dosage form. The cellular level, pyrrole compounds provided by the invention can effectively enhance the cytotoxicity of NK cells on gastric cancer cells, and in a concentration dependent manner; animal level, pyrrole compounds provided by the invention has obvious inhibitory effect in vivo in gastric cancer xenografts in nude mice, combining with the results of cell level, pyrrole is likely by improving the cytotoxic effect of NK cells of gastric cancer xenografts and in vivo antitumor effect. The pyrrole compound and the preparation provided by the invention can be used for preparing medicine for improving the lethality of NK cells to gastric cancer.
【技术实现步骤摘要】
一种提高NK细胞对胃癌杀伤力的化合物及其制剂
本专利技术属于细胞免疫领域，涉及NK细胞，具体涉及一种提高NK细胞对胃癌杀伤力的化合物及其制剂。
技术介绍
自然杀伤细胞(NK)是一群不同于T、B淋巴细胞的大颗粒淋巴细胞，分布于外周各淋巴器官及血液循环系统，无需抗原的预先刺激与活化即可发挥细胞毒效应，并可分泌多种细胞因子及趋化因子。NK细胞表达一系列活化性受体及抑制性受体，两者间的平衡是控制NK细胞是否被激活的重要机制。干扰素及巨噬细胞来源的细胞因子均是NK细胞极强的活化因子，NK细胞活化过程迅速，在趋化介质的作用下离开血液循环系统进入到外周组织部位，在病毒感染后2-3天NK细胞即可聚集于感染灶，杀伤被感染细胞；同时通过其分泌的可溶性因子如IFN、TNF、IL-3，GM-CSF、M-CSF等招募活化中性粒细胞、巨噬细胞、树突状细胞以及触发获得性免疫应答。另外，活化的NK细胞能够表达多种共刺激分子如CD80、CD86、CD70、OX40L、2B4等，直接与T细胞相互作用而促进获得性免疫应答；活化的NK细胞亦可能具有APC样表型，直接行驶抗原提呈功能从而促进T细胞免疫应答。胃癌是世界上排名第四的恶性肿瘤，全球每年约有70多万人死于胃癌，占全部恶性肿瘤死亡人数的10％左右。我国最新公布的肿瘤数据显示，胃癌的发病率和死亡率分别位居全国第二和第三。胃癌常好发于50岁以上的中老年人并逐渐呈现年轻化的趋势。胃癌的具体发病原因并不清楚，可能与个体遗传、不健康饮食和环境以及幽门螺杆菌的长期感染等因素相关。胃癌的发生发展和临床转归受到胃癌微环境中各种细胞相互调控的影响，其中抗肿瘤效应性免疫细胞受到抑制性的调控与胃癌的进展及病人的临床预后不良密切相关。因此，提高包括NK细胞在内的免疫细胞对胃癌细胞的杀伤力对胃癌的治疗，控制胃癌的进展，以及病人的临床预后具有重要意义。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种提高NK细胞对胃癌杀伤力的化合物及其制剂。本专利技术通过如下技术方案得以实现：如下结构通式的吡咯化合物在制备提高NK细胞对胃癌杀伤力的药物中的应用：其中，R1和R2选自氢、烷基、卤素。优选地，所述吡咯化合物选自如下结构：一种药物制剂，含有上述吡咯化合物。优选地，所述药物制剂还含有药学上可以接受的载体，制备成药学上可以接受的剂型。上述药物制剂在制备提高NK细胞对胃癌杀伤力的药物中的应用。本专利技术优点：本专利技术提供的吡咯化合物可以显著提高NK细胞对胃癌细胞的杀伤力，可以用于制备治疗胃癌的药物。附图说明图1为不同处理NK细胞对胃癌BGC-823细胞的杀伤活性；图2为各吡咯化合物对裸鼠胃癌移植瘤的体内抑瘤作用。具体实施方式为了更好地解释本专利技术的技术方案，下面结合具体实施例进一步介绍。实施例中未特别强调的实验材料均为常规实验材料，属于本领域技术人员易于获得的范畴。实施例1：细胞水平试验一、实验材料SCGM培养基为德国CellGenix品牌；人AB血浆由南京市血站提供；胃癌BGC-823细胞购于中国科学院上海细胞研究所；10％胎牛血清和RPMI-1640培养液购于Gibco公司；乳酸脱氢酶(LDH)细胞毒性检测试剂盒购于BioVision公司；编号为吡咯A-1、A-2、A-3、A-4、B-1、B-2的化合物均为已知化合物，委外合成。二、实验方法1、NK细胞培养及表型鉴定取健康成年志愿者外周静脉血20ml，低分子肝素钠抗凝后加入淋巴细胞分离液，离心2000r/min×13min(离心半径为10cm)。玻璃吸管吸取单个核细胞层，PBS洗涤2次，将细胞加入含有rhIL-2和人AB血浆的SCGM培养基中，置于37℃、5％CO2培养箱中培养。收集培养10d的NK细胞，PBS洗涤后将细胞浓度调整为1×106/ml。在细胞悬液中加入FITC-Anti-CD56和PE-Anti-CD3，室温下避光孵育15min，PBS洗涤并重悬细胞，采用流式细胞术检测NK细胞表型。2、胃癌细胞株BGC-823的培养取复苏后的胃癌BGC-823细胞加入细胞培养瓶，随后加入含10％胎牛血清的RPMI-1640培养液15ml，于37℃、5％CO2的培养箱中培养。每天观察细胞生长情况，根据细胞生长情况进行换液。待细胞铺满瓶底时，用2.5g/L胰蛋白酶消化细胞使其脱壁，收集细胞后离心800r/min×3min，弃去上清，使用生理盐水反复吹打混匀细胞，计数后用于实验。3、NK细胞对胃癌BGC-823细胞的杀伤活性采用LDH释放法测定NK细胞对胃癌BGC-823细胞的杀伤活性，步骤如下：取培养10d的NK细胞铺入6孔板，实验组加入不同的吡咯化合物(编号吡咯A-1、A-2、A-3、A-4、B-1、B-2，终浓度为5μM、10μM)，对照组加入等体积溶剂DMSO，继续培养24h，收集NK细胞作为效应细胞，对数生长期胃癌BGC-823细胞作为靶细胞，将效应细胞和靶细胞分别配成1.5×106/ml和1.5×105/ml的细胞悬液，效靶细胞等体积混合(效靶细胞数比例为10:1)。将混合后的效靶细胞置于37℃、5％CO2培养箱中孵育4h后，离心1500r/min×10min，取上清液。按乳酸脱氢酶细胞毒性检测试剂盒说明书操作，340nm波长下测定吸光度值(A)，每检测样本设3个复管，实验重复3遍。NK细胞的杀伤活性(％)＝(A实验组-A效应细胞自然释放组)/(A靶细胞最大释放组-A靶细胞自然释放组)×100％。4、统计学处理采用SPSS13.0软件进行统计分析，用均值±标准偏差表示，多组间比较采用单因素方差分析，P＜0.05为差异有统计学意义。三、实验结果1、人NK细胞的培养及鉴定NK细胞培养结果显示，人NK细胞在体外扩增培养10d后，可见大的集落和散在的细胞生长，单个细胞呈椭圆形或梭形生长。流式细胞术检测结果显示，PBMC未培养前NK细胞CD3-CD56+比例为6.35％，培养10d后NK细胞比例增加到85.41％。2、吡咯化合物对NK细胞杀伤胃癌BGC-823细胞的影响表1和图1为不同处理NK细胞对胃癌BGC-823细胞的杀伤活性。表1不同处理NK细胞对胃癌BGC-823细胞的杀伤活性(％，n＝3)表1和图1可以看出，与对照组相比，本专利技术提供的吡咯化合物可以有效增强NK细胞对胃癌细胞的杀伤活性，且呈一定的浓度依赖性。实施例2：动物水平试验一、实验材料BALB/C裸鼠，均选用雌性裸鼠，鼠龄6-7周，体重18-23g，在SPF条件下的裸鼠室内饲养，由南京大学实验动物中心提供。胃癌BGC-823细胞购于中国科学院上海细胞研究所。二、实验方法在无菌条件下，在雌性裸鼠右侧腋部皮下注射1×106/0.2ml的人胃腺癌BGC-823细胞。裸鼠在接种肿瘤细胞次日按照体重随机分成给药组(分别给予吡咯A-1、A-2、A-3、A-4、B-1、B-2)和对照组(给予等体积生理盐水)。当移植瘤长到第15天时开始，分别给予腹腔注射等体积生理盐水、8mg/kg吡咯化合物。各组均每天给药1次，连续20天。停药后将裸鼠拉颈处死，小心剥离皮下肿瘤，并称重，按下述公式计算抑瘤率(％)：抑瘤率(％)＝(对照组瘤重-给药组瘤重)/对照组瘤重×100％。三、实验结果表2和图2为各组吡咯化合物对裸鼠胃癌移植瘤的体内抑瘤率(％)。表2各吡咯本文档来自技高网...
【技术保护点】
如下结构通式的吡咯化合物在制备提高NK细胞对胃癌杀伤力的药物中的应用：
【技术特征摘要】
1.如下结构通式的吡咯化合物在制备提高NK细胞对胃癌杀伤力的药物中的应用：其中，R1和R2选自氢、烷基、卤素。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述吡咯化合物选自如下结构：3.一种药物制剂，其特征在于：含...
【专利技术属性】
技术研发人员：胡攀勇，张钟祥，吴雪，
申请(专利权)人：南京佰泰克生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏,32
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