The invention relates to an adjuvant vaccine of outer membrane protein subunit of Vibrio parahaemolyticus, in particular to an outer membrane protein subunit adjuvant vaccine and a large-scale preparation technique of Vibrio parahaemolyticus. The invention of the Vibrio harveyi outer membrane protein subunit vaccine, which comprises the following components: Vibrio harveyi outer membrane protein Ompk, Montanide ISA 763A (763A) adjuvant. The invention also provides a large-scale preparation method of the adjuvant outer vaccine of Vibrio parahaemolyticus outer membrane protein. It is characterized by containing Vibrio outer membrane protein Ompk gene of Escherichia coli plasmid carrying 500L (engineering bacteria) in fermentation tank of high density culture and induced expression, purified from Vibrio outer membrane protein Ompk, ISA 763A and Montanide (763A) emulsion in certain proportion, aseptic packaging, made of outer membrane protein of Vibrio Ompk adjuvant vaccine finished product. The immune protection rate of this vaccine to grouper and crucian carp was over 60%.
【技术实现步骤摘要】
一种弧菌外膜蛋白亚单位佐剂疫苗及规模化制备技术
本专利技术属水产养殖病害免疫防治
,具体涉及一种海水鱼弧菌外膜蛋白亚单位佐剂疫苗及规模化化制备技术。
技术介绍
病原性弧菌是海水养殖动物最重要的细菌性病原,其引起的病害通常被称为“弧菌病”。哈氏弧菌是海水鱼养殖细菌性疾病的重要病原之一。研究人员在研制各类灭活疫苗的同时,也对外膜蛋白亚单位疫苗进行研发以对海水鱼养殖病害进行免疫防治。由于我国水产疫苗研制起步较晚,一些水产领域用于疫病防治的亚单位疫苗基本还处于实验室规模,目前尚未有亚单位疫苗可规模化生产与应用于海水鱼的疾病免疫防治。
技术实现思路
为了解决现有技术中的诸多问题,本专利技术提供了一种弧菌外膜蛋白亚单位佐剂疫苗及规模化制备技术。本专利技术通过如下的技术方案来实现:一种哈氏弧菌外膜蛋白亚单位佐剂疫苗,所述疫苗包括以下组分:哈氏弧菌外膜蛋白Ompk和MontanideISA763A佐剂。优选的,所述哈氏弧菌外膜蛋白Ompk与MontanideISA763A佐剂的比例为2:3。优选的,所述哈氏弧菌外膜蛋白Ompk的浓度高于1.5mg/mL。本专利技术还提供了一种哈氏弧菌外膜亚单位佐剂疫苗的规模化制备技术,该技术包括如下步骤:将哈氏弧菌外膜蛋白Ompk溶液和MontanideISA763A佐剂,按2:3比例混合搅拌均匀,乳化,无菌灌装,即得到疫苗成品。优选的,所述哈氏弧菌外膜亚单位佐剂疫苗的规模化制备技术包括如下步骤:将20L哈氏弧菌外膜蛋白Ompk溶液,加入4LpH7.0的无菌磷酸缓冲液,过滤除菌后加入油相罐,将灭菌后的MontanideISA763A佐剂 ...
【技术保护点】
一种哈氏弧菌外膜蛋白亚单位佐剂疫苗,所述疫苗包括以下组分:哈氏弧菌外膜蛋白Ompk和Montanide ISA 763A佐剂。
【技术特征摘要】
1.一种哈氏弧菌外膜蛋白亚单位佐剂疫苗,所述疫苗包括以下组分:哈氏弧菌外膜蛋白Ompk和MontanideISA763A佐剂。2.根据权利要求1所述的哈氏弧菌外膜蛋白亚单位佐剂疫苗,其特征在于:所述哈氏弧菌外膜蛋白Ompk与MontanideISA763A佐剂的比例为2:3。3.根据权利要求2所述的哈氏弧菌外膜蛋白亚单位佐剂疫苗,其特征在于:所述哈氏弧菌外膜蛋白Ompk的浓度高于1.5mg/mL。4.一种制备权利要求1-3任一所述哈氏弧菌外膜亚单位佐剂疫苗的规模化制备技术,该技术包括如下步骤:将哈氏弧菌外膜蛋白Ompk溶液和MontanideISA763A佐剂,按2:3比例混合搅拌均匀,乳化,无菌灌装,即得到疫苗成品。5.根据权利要求4所述哈氏弧菌外膜亚单位佐剂疫苗的规模化制备技术,其特征在于,所述哈氏弧菌外膜亚单位佐剂疫苗的规模化制备技术包括如下步骤:将20L哈氏弧菌外膜蛋白Ompk溶液,加入4LpH7.0的无菌磷酸缓冲液,过滤除菌后加入油相罐,将灭菌后的MontanideISA763A佐剂36L,缓慢加入,搅拌速度50-100r/min。在搅拌混合30min后,乳化30min,在无菌条件下,灌装制得疫苗成品。6.根据权利要求5所述哈氏弧菌外膜亚单位佐剂疫苗的规模化制备技术,其特征在于:所述将哈氏弧菌外膜蛋白Ompk溶液的制备包括如下步骤:(1)工程菌一级种子制备(2)工程菌二级种子制备(3)高密度培养诱导外膜蛋白表达与工程菌体获取(4)外膜蛋白的提取与浓缩。7.根据权利要求6所述...
【专利技术属性】
技术研发人员:陶家发,孙承文,赖迎迢,江小燕,罗霞,赵长臣,巩华,刘春花,黄志斌,
申请(专利权)人:中国水产科学研究院珠江水产研究所,
类型:发明
国别省市:广东,44
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