缢蛏基因组DNA的提取方法技术
Method for extracting genomic DNA of sinonovaculaconstricta
The present invention relates to a method for the extraction step, sinonovaculaconstricta genomic DNA are as follows: (1) take sinonovaculaconstricta muscle tissue after smashing into centrifugal containing 500 L STE and 50 L 10% SDS lysis buffer tube, and adding 5 L concentration of protease K 20mg/mL, 55-57 C water bath 10-60 min; (2) adding 250 L and 250 L saturated phenol chloroform / isoamyl alcohol (24:1), gently shake the 5-15min, 10000-12000 rpm 8-15min centrifugation at room temperature; (3) to obtain supernatant to the new centrifugal tube, repeat steps (2); (4) to learn new supernatant centrifugal tube 500 L, add chloroform / isoamyl alcohol, gently shake the 5-15min, 10000-12000 rpm 8-15min centrifugation at room temperature; (5) to obtain supernatant, adding of 50 L 3M NaAc, adding 1mL at -20 DEG C ethanol pre cooling, -20 C placed 20-50min, 10000-15000rpm centrifugal 8-15min, DNA precipitation (6; 70) % washing with ethanol precipitation of 1-3; (7) drying to RNA precipitation dissolution; extraction method of the invention is particularly suitable for sinonovaculaconstricta DNA, DNA concentration and purity of the extracted is very high, suitable for library construction and PCR follow-up study.
【技术实现步骤摘要】
缢蛏基因组DNA的提取方法
本专利技术涉及缢蛏基因组DNA的提取方法。
技术介绍
名缢蛏，属软体动物，是双壳纲帘蛤目贝类动物，生活在海洋之中，为常见的海鲜食材。贝壳脆而薄呈长扁方型，自壳顶到腹缘，有一道斜行的凹沟，故名缢蛏。宁波沿海一带多滩涂，对养殖蛏子有得天独厚的优势，是宁波大众海特产，宁海长街一带，面临三门湾，常年有大量淡水注入，海水咸淡适宜，饵料丰富，涂质以泥沙为主，因而蛏子生长快，个体大，肉嫩而肥，色白味鲜，故得名长街蛏子，据清《宁海县志》记载：蛏、蚌属，以田种之种之谓蛏田，形狭而长如中指，一名西施舌，言其美也。分子生物学是生物学研究的一项重要分支，而DNA的提取则是分子生物学研究的重要基础，DNA纯度的纯度及质量对后续的研究工作具有极为重要的影响。每一物种由于其自身各成分的含量不同（比如有的物种蛋白含量高、有的物种糖分含量高），会对DNA的纯度和质量产生较大影响。因此，需要针对不同的物种开发出适宜的有针对性的提取方法。
技术实现思路
针对上述问题，本专利技术旨在提供一种适于缢蛏的高质量、高纯度的DNA提取方法。缢蛏基因组DNA的提取方法，步骤如下：（1）取缢蛏肌肉组织3-8克，用液氮研磨后，将粉末平均加入到10-15管装有500μLSTE（100mMNaCl；10mMTris-Cl，pH8.0；1mMEDTA，pH8.0）及50μL10%SDS裂解缓冲液的1.5mL离心管中，随即每管加入5μL浓度为20mg/mL的蛋白酶K，55-57℃水浴10-60min，至溶液澄清；（2）每管加入250μL饱和酚、250μL氯仿/异戊醇（24:1），轻柔晃动5-1...
【技术保护点】
缢蛏基因组DNA的提取方法，其特征在于，步骤如下：（1）取缢蛏肌肉组织3‑8克，用液氮研磨后，将粉末平均加入到10‑15管装有500μL STE及50μL 10% SDS裂解缓冲液的1.5mL离心管中，随即每管加入5μL 浓度为20mg/mL的蛋白酶K，55‑57℃水浴10‑60 min，至溶液澄清；（2）每管加入250μL饱和酚、250μL氯仿/异戊醇（体积比24:1），轻柔晃动5‑15min，室温10000‑12000 rpm离心8‑15min；（3）离心后有机相位于下层，中间层为蛋白层，上层为溶有DNA的水相，吸取上清液至新离心管中，重复步骤（2），至水相和有机相之间无蛋白层残留； （4）吸取上清液至新离心管中，加入500μL氯仿/异戊醇，轻柔晃动5‑15min，室温10000‑12000 rpm离心8‑15min；（5）吸取上清液，加入50μL 3M NaAc，缓慢轻柔摇匀，添加1mL在‑20℃预冷的无水乙醇，放置于‑20℃冰箱 20‑50min，10000‑15000rpm 离心8‑15min，得到DNA沉淀；（6）用预冷的 70%乙醇洗涤沉淀1‑3次；（7）沉淀干燥，根据沉...
【技术特征摘要】
1.缢蛏基因组DNA的提取方法，其特征在于，步骤如下：（1）取缢蛏肌肉组织3-8克，用液氮研磨后，将粉末平均加入到10-15管装有500μLSTE及50μL10%SDS裂解缓冲液的1.5mL离心管中，随即每管加入5μL浓度为20mg/mL的蛋白酶K，55-57℃水浴10-60min，至溶液澄清；（2）每管加入250μL饱和酚、250μL氯仿/异戊醇（体积比24:1），轻柔晃动5-15min，室温10000-12000rpm离心8-15min；（3）离心后有机相位于下层，中间层为蛋白层，上层为溶有DNA的水相，吸取上清液至新离心管中，重复步骤（2），至水相和有机相之间无蛋白层残留；（4）吸取上清液至新离心管中，加入500μL氯仿/异戊醇，轻柔晃动5-15m...
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