黄曲霉毒素的测定方法技术

本发明专利技术公开了黄曲霉毒素的测定方法，其创新点在于：包括以下步骤：1)称取样品，加入乙腈‑水的提取液搅拌45分钟，其中乙腈和水的体积比为20:12，然后用定性滤纸过滤；2)样品测定：色谱条件为：液相色谱柱Agilent SB C‑18(25cm×4.6mm)；流动相：体积百分比为85％的乙腈和15％的水；柱温：45℃，进样量：25mL；流速：1.0mL/min；取8mL提取过滤液至多功能净化柱，净化柱的收集池内转移2mL净化液到衍生瓶中，60℃下氮吹后，加500mL正己烷和100mL三氯乙酸混匀，45s后于56℃烘箱衍生15min，室温下干燥后以500uL水‑乙腈溶解，混匀后全部进自动进样瓶中，测定。本发明专利技术的检测方法操作简单，快速，结果精确可靠；污染少，安全性高，减少对操作人员和环境的污染；检测成本较低，易于推广。

Methods for determination of aflatoxin

The invention discloses a method for determination of aflatoxin, is characterized in that: includes the following steps: 1) the sample extract into acetonitrile water and stir for 45 minutes, the acetonitrile and water volume ratio of 20:12, and then use the qualitative filter paper; 2) samples: liquid phase chromatographic conditions are as follows: column Agilent SB C 18 (25cm * 4.6mm); mobile phase: volume percentage of 85% acetonitrile and 15% water; column temperature: 45 degrees centigrade, sample volume: 25mL; 1.0mL/min; flow rate: 8mL extraction liquid filtering function to purifying column purification column collection tank transfer 2mL purification the derivative liquid bottle, 60 DEG C under nitrogen blowing after three chloroacetic acid with 500mL of hexane and 100mL blending, 45s derived 15min at 56 DEG C oven dried at room temperature in 500uL water acetonitrile solution, after mixing into full automatic sample bottle, determination. The detection method of the invention has the advantages of simple and fast operation, accurate and reliable results, less pollution, high safety, less pollution to the operators and the environment, low detection cost and easy popularization.

【技术实现步骤摘要】
黄曲霉毒素的测定方法
本专利技术涉及黄曲霉毒素的测定方法，属于食品安全检验

技术介绍
黄曲霉毒素(Aflatoxins，简写AF)主要是黄曲霉菌和寄生曲霉菌的代谢产物。黄曲霉毒素主要存在于土壤，动植物，各种坚果，特别是花生和核桃中。在大豆，稻谷，玉米，通心粉，调味品，牛奶，奶制品，食用油等制品中也经常发现黄曲霉毒素。目前已分离鉴定出12种，包括B1、B2、G1、G2、M1、M2、P1、Q、H1、GM、B2a和毒醇。黄曲霉毒素的分析方法主要有以薄层层析法、高效液相色谱法和酶联免疫吸附法三种。薄层层析法由于设备简单,易于普及,所以国内外仍在使用,但由于该法样品前处理繁琐,且提取和净化效果不够理想,提取液中杂质较多,因而在展开时影响斑点的荧光强度,双向展开法虽避免了杂质干扰,但增加了操作步骤和时间。目前最能被大家认可的分析方法还是液相色谱分析法，它具有自动化程度高，定量定性准确，检测种类多元的特点，一直是世界各国官方检测方法。但是，目前针对黄曲霉毒素的高效液相色谱分析法均采用免疫亲和柱来富集毒素，酶联免疫分析法提及的抗体的缺点仍然无法避免，因此研究一种新的黄曲霉毒素富集方法以摆脱抗体的缺点。
技术实现思路
本专利技术要解决的技术问题是提供一种操作简单，结果可靠的黄曲霉毒素的测定方法。为解决上述技术问题，本专利技术采用的技术方案为：黄曲霉毒素的测定方法，包括样品提取、标准溶液测定和样品测定步骤，其创新点在于：所述样品提取步骤采用乙腈-水的提取液提取，其中乙腈和水的体积比为20:12；所述标准溶液测定步骤中取黄曲霉毒素B1、G1标准储备液用乙腈定容，制备标准系列溶液，处理后利用液相色谱仪进行测定；所述样品检测采用高效液相色谱法检测样品中的黄曲霉毒素，具体检测步骤为：(1)样品提取：称取样品10g(精确至0.0001g)，加入乙腈-水的提取液搅拌45分钟，其中乙腈和水的体积比为20:12，然后用定性滤纸过滤；(2)标准溶液测定：取黄曲霉毒素B1、G1标准储备液10μg/mL，用乙腈定容至5mL，混匀，2～8℃保存三个月；使用时乙腈配成0.025μg/mL、0.05μg/mL、0.1μg/mL、0.15μg/mL、0.2μg/mL、0.25μg/mL系列标准溶液，吸取标准系列溶液各500μL，在60℃水浴下氮气吹干，加500mL正己烷和100mL三氯乙酸混匀，45s后于56℃烘箱衍生15min，室温下放入干燥器中1min后以500uL水-乙腈溶解，混匀后全部进自动进样瓶中，利用液相色谱仪进行测定；(3)样品测定：用高效液相色谱法检测样品中的黄曲霉毒素色谱条件：色谱柱：AgilentSBC-18(25cm×4.6mm)；流动相：体积百分比为85％的乙腈和15％的水；柱温：45℃，进样量：25mL；流速：1.0mL/min。取8mL提取过滤液至多功能净化柱，净化柱的收集池内转移2mL净化液到衍生瓶中，60℃下氮吹后，加500mL正己烷和100mL三氯乙酸混匀，45s后于56℃烘箱衍生15min，室温下干燥1min后以500uL水-乙腈溶解，混匀后全部进自动进样瓶中，上液相色谱仪测定。(4)黄曲霉毒素的含量计算：黄曲霉毒素按照G1、B1的顺序出峰，以标准系列的峰面积对浓度分别绘制每种黄曲霉毒素的标准曲线，标准曲线的相关系数r大于0.995，试样通过与标准色谱图保留时间的比较确定每一种黄曲霉毒素的峰，根据每种黄曲霉毒素的标准曲线及试样中的峰面积计算试样中各种黄曲霉毒素含量：X＝(A×V×1000)/(m×f)其中：X——试样中每种黄曲霉毒素含量，单位为μg/kg；A——试样按外标法在标准曲线中对应的浓度，单位为μg/mL；V——试样提取过程中提取液的体积，单位为mL；m——试样的取样量，单位为g；f——浓缩倍数。进一步的，所述步骤(1)中多功能净化柱为MycosepTM228多功能净化柱。本专利技术的有益效果：本专利技术的检测方法操作简单，快速，结果精确可靠；污染少，安全性高，减少对操作人员和环境的污染；检测成本较低，易于推广。附图说明图1为本专利技术实施例1的样品色谱图；图2为本专利技术实施例1的黄曲霉毒素B1曲线图；图3为本专利技术实施例1的黄曲霉毒素G1曲线图；图4为本专利技术实施例2的样品色谱图。具体实施方式下面结合具体实施例对本专利技术的技术方案作详细说明。实施例1(1)样品提取：称取10.0346g食用植物油，加入乙腈-水的提取液搅拌45分钟，其中乙腈和水的体积比为20:12，然后用定性滤纸过滤。(2)标准溶液测定：取黄曲霉毒素B1、G1标准储备液10μg/mL，用乙腈定容至5mL，混匀，2～8℃保存三个月；使用时乙腈配成0.025μg/mL、0.05μg/mL、0.1μg/mL、0.15μg/mL、0.2μg/mL、0.25μg/mL系列标准溶液，吸取标准系列溶液各500μL，在60℃水浴下氮气吹干，加500mL正己烷和100mL三氯乙酸混匀，45s后于56℃烘箱衍生15min，室温下放入干燥器中1min后以500uL水-乙腈溶解，混匀后全部进自动进样瓶中，利用液相色谱仪进行测定，黄曲霉毒素B1曲线图如图2，黄曲霉毒素G1曲线图如图3。(3)样品测定：用高效液相色谱法检测样品中的黄曲霉毒素色谱条件：色谱柱：AgilentSBC-18(25cm×4.6mm)；流动相：体积百分比为85％的乙腈和15％的水；柱温：45℃，进样量：25mL；流速：1.0mL/min。取8mL提取过滤液至MycosepTM228多功能净化柱，净化柱的收集池内转移2mL净化液到衍生瓶中，60℃下氮吹后，加500mL正己烷和100mL三氯乙酸混匀，45s后于56℃烘箱衍生15min，室温下干燥1min后以500uL水-乙腈溶解，混匀后全部进自动进样瓶中，液相色谱仪测定，测定的食用油样品色谱如图1所示。根据标准曲线得出试样浓度为：2.22(μg/mL)根据公式X＝(A×V×1000)/(m×f)黄曲霉毒素B1(μg/kg)＝(试样中对应浓度×提取液体积×1000)/(试样质量×浓缩倍数)＝2.22×8×1000/10.0346×10＝176.98实施例2(1)样品提取：称取10.1679g玉米粉，加入乙腈-水的提取液搅拌45分钟，其中乙腈和水的体积比为20:12，然后用定性滤纸过滤。(2)样品测定：用高效液相色谱法检测样品中的黄曲霉毒素色谱条件：色谱柱：AgilentSBC-18(25cm×4.6mm)；流动相：体积百分比为85％的乙腈和15％的水；柱温：45℃，进样量：25mL；流速：1.0mL/min。取8mL提取过滤液至MycosepTM228多功能净化柱，净化柱的收集池内转移2mL净化液到衍生瓶中，60℃下氮吹后，加500mL正己烷和100mL三氯乙酸混匀，45s后于56℃烘箱衍生15min，室温下干燥1min后以500uL水-乙腈溶解，混匀后全部进自动进样瓶中，液相色谱仪测定，测定结果如图4所示。根据标准曲线得出试样浓度为：50.95(μg/mL)根据公式X＝(A×V×1000)/(m×f)黄曲霉毒素G1(μg/kg)＝(试样中对应浓度×提取液体积×1000)/(试样质量×浓缩倍数)＝50.95×8×1000/10.1679×10＝5608.7本文档来自技高网...

【技术保护点】
黄曲霉毒素的测定方法，包括样品提取、标准溶液测定和样品测定步骤，其特征在于：所述样品提取步骤采用乙腈‑水的提取液提取，其中乙腈和水的体积比为20:12；所述标准溶液测定步骤中取黄曲霉毒素B

【技术特征摘要】
1.黄曲霉毒素的测定方法，包括样品提取、标准溶液测定和样品测定步骤，其特征在于：所述样品提取步骤采用乙腈-水的提取液提取，其中乙腈和水的体积比为20:12；所述标准溶液测定步骤中取黄曲霉毒素B1、G1标准储备液用乙腈定容，制备标准系列溶液，处理后利用液相色谱仪进行测定；所述样品检测采用高效液相色谱法，利用多功能净化柱检测样品中的黄曲霉毒素。2.根据权利要求1所述的黄曲霉毒素的测定方法，其特征在于：所述样品提取步骤具体为称取样品10g，精确至0.0001g，加入乙腈-水的提取液搅拌45分钟，其中乙腈和水的体积比为20:12，然后用定性滤纸过滤。3.根据权利要求1所述的黄曲霉毒素的测定方法，其特征在于：所述标准溶液测定步骤具体为取黄曲霉毒素B1、G1标准储备液10μg/mL，用乙腈定容至5mL，混匀，2～8℃保存三个月；使用时乙腈配成0.025μg/mL、0.05μg/mL、0.1μg/mL、0.15μg/mL、0.2μg/mL、0.25μg/mL系列标准溶液，吸取标准...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈霞，
申请(专利权)人：南通博泰美术图案设计有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏,32