一种两歧双歧杆菌及其用途制造技术

本发明专利技术公开了一种能够显著缓解便秘的两歧双歧杆菌及其用途，属于微生物技术领域。本发明专利技术提供的两歧双歧杆菌CGMCC NO.13632能很好的耐受模拟胃肠液，能够很好的粘附在结肠癌细胞HT‑29上，能显著提高便秘小鼠的粪便含水量和缩短首粒黑便时间；在提高小肠推进率方面，本发明专利技术的两歧双歧杆菌CGMCC NO.13632优于泻剂酚酞，呈现最好的效果，在显著改善便秘病理指标的同时，也调节了血清中便秘相关的胃肠调节肽的分泌，同时也不具有治疗便秘的药物所具有的毒副作用，是预防和治疗便秘的首选。所述的两歧双歧杆菌CGMCC NO.13632用于制备缓解便秘的药物组合物与发酵食品，具有非常广泛的应用前景。

【技术实现步骤摘要】
一种两歧双歧杆菌及其用途
本专利技术涉及微生物
，尤其是涉及一种能够显著缓解便秘的两歧双歧杆菌及其用途。
技术介绍
双歧杆菌是人体必需营养源，可自身合成多种消化酶和B族维生素，如维生素B1、B2、B6、B12、叶酸、烟酸等多种维生素，帮助机体消化一些依靠本身酶系不能消化的营养物质，促进机体对营养物质的吸收，同时双歧杆菌也能合成、吸收和利用多种B族维生素，并能以氨为氮源，在肠道内合成氨基酸和尿素，降低血氨浓度，提高机体内蛋白质的蓄积。另外，双歧杆菌通过代谢产生有机酸降低肠道内环境的pH和Eh(氧化还原电位)后，有利于钙、铁、锌、镁等矿物质的吸收，从而促进生长。近年来，双歧杆菌以其特殊的生理活性和营养功能而成为益生菌的主要来源，正日益引起人们的重视。便秘(constipation)是临床常见的多种疾病的一个症状，主要是指排便次数减少、频率低，在不使用泻剂的情况下，每3-4天或更长的时间排便1次，每周排便次数少于3次，粪便量减少、粪便干结、排便费力、排便不尽，排便同时并伴有腹痛、腹胀等。便秘在人群中的患病率高达27％，但只有一小部分便秘者会就诊。便秘可以影响各年龄段的人。女性多于男性，老年多于青、壮年，而且随着年龄的增加，便秘也会逐渐加重，是诱发中老年男性高血脂、心脑血管疾病、动脉硬化、肿瘤等疾病及其并发症的罪魁祸首，从而导致老人心脑血管病变死亡率急剧增加，出现痔疮、肛裂等问题，令人痛苦不堪。另外长期便秘，大量便渣会滞留在肠道内发酵、腐烂，大量毒素和有害菌被肠道反复吸收，通过血液循环到达人体各部位，成为女性健康和美丽的罪魁祸首。便秘还会使小孩胃肠道菌群失衡，导致精力不集中、思维迟钝、营养不良、心情急躁、消瘦、免疫力下降、易感冒、生长迟缓，如不及时调理，可能造成不可逆的病变。因便秘发病率高、病因复杂，患者常有许多苦恼，便秘严重时会影响生活质量。因此，寻找一种能够代替药物来预防便秘的生物制品有很大的现实意义，微生态疗法恰是以一个崭新的手段解决了传统疗法存在的多种问题。国内外对双歧杆菌的生理功能有大量的研究报道，但对双歧杆菌预防便秘的功能性研究报道很少。关于双歧杆菌预防便秘的研究对食品科学、预防医学和微生态学等许多学科都有很大价值。发酵乳制品是人们摄入双歧杆菌的一条重要渠道，筛选优良的具有预防便秘和安全的双歧杆菌菌株，对于开发功能性乳制品、丰富现有乳制品种类、提高乳品的附加值将具有重要意义。因此，具有预防便秘的双歧杆菌具有很大的研究和应用价值。在目前已经公开的文献与专利或专利申请中，例如CN1O2845530A公开了一种有效缓解便秘的复合益生菌发酵豆乳饮，用于缓解便秘。CN105079450A公开了缓解老年人阴虚型便秘的益生菌中药制剂及其制备方法和应用，用于制备食品和药物的组合物，缓解老年人阴虚型便秘，调节肠道菌群平衡，提高抵抗力。CN105394773A公开了一种用于改善便秘的复合益生菌和膳食纤维制剂来预防或减轻便秘。CN103908585A公开了一种用于预防和治疗便秘的益生菌发酵组合物，特别是涉及中药提取物经肠道益生菌发酵，以提高和改善其预防和治疗便秘的方法。CN102119724A公开了一种预防便秘熟大黄肉从蓉活菌酸奶片配方及制备方法，用于补不足、益力气，常服改善腹泻便秘症状。但是，这些专利或专利申请的共同点都是应用混菌或者菌与中药或益生元混合使用用于预防和缓解便秘。到目前为止，还没有单菌缓解便秘，或者调解肠道运动等性能的双歧杆菌。而且双歧杆菌作为可食用的菌种之一，除了具有很多益生功能的优点外，同时也不具备缓解便秘的药物的毒副作用，综上所述，双歧杆菌可作为代替药物的微生物制剂用于调节肠道运动、预防便秘。
技术实现思路
针对现有技术存在的上述问题，本申请提供了一种两歧双歧杆菌及其用途。本菌株单菌即具有很强的缓解便秘的作用，并且还有调理肠胃等多种功能和用途。本专利技术的技术方案如下：本专利技术提供了一种两歧双歧杆菌CCFM16(Bifidobacteriumbifidum)，于2017年01月17日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心CGMCC，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所，保藏编号为CGMCCNO.13632。本专利技术还提供了一种缓解便秘的组合物，所述组合物包括两歧双歧杆菌CGMCCNO.13632以及在药学上可接受的载体。所述的组合物是颗粒剂、胶囊剂、片剂、丸剂或口服液剂型。优选的，所述在药学上可接受的载体包括医学上通常使用的填充剂、粘合剂、润湿剂、崩解剂、润滑剂、矫味剂中的一种或多种。本专利技术还提供了一种发酵食品，所述发酵食品为使用含有两歧双歧杆菌CGMCCNO.13632的发酵剂生产的乳制品、豆制品与果蔬制品；所述发酵剂是指含有所述两歧双歧杆菌CGMCCNO.13632的产品，使用该产品可以快速发酵产生终端食品。优选的，所述的乳制品包括牛奶、酸奶油或干酪；所述的豆制品包括豆奶、豆豉或豆酱；所述的果蔬制品包括黄瓜、胡萝卜、甜菜、芹菜或圆白菜制品。本专利技术还提供了一种含有两歧双歧杆菌CGMCCNO.13632的菌剂，所述菌剂为将含有两歧双歧杆菌CGMCCNO.13632的菌液干燥得到的粉剂，它含有大于106CFU/g的活性两歧双歧杆菌CGMCCNO.13632。优选的，所述干燥是指真空冷冻干燥或其它菌液干燥工艺。本专利技术还提供了所述的发酵食品或者菌剂的用途，所述发酵食品或者菌剂均有缓解便秘的作用。本专利技术还提供了一种制备两歧双歧杆菌CGMCCNO.13632菌剂的方法，包括以下步骤：(1)培养基的制备：两歧双歧杆菌的培养基为改良MRS培养基，即MRS培养基+0.05％L-半胱氨酸盐酸盐，调整其pH为6.8±0.2，得到培养基；(2)保护剂的制备：使用水与保护剂原料混合制备得到含有100g/L-150g/L脱脂奶粉、100g/L-150g/L麦芽糊精、140g/L-160g/L海藻糖、余量为水的冻干保护剂；(3)两歧双歧杆菌CGMCCNO.13632菌种按照以所述培养基的质量计2-4％的接种量接种到在119-123℃条件下灭菌15-25min后的培养基中，然后在温度35-39℃厌氧条件下培养24-48h，用pH为6.8-7.2磷酸盐缓冲液清洗2-4次，用所述的保护剂重悬，使菌浓达到1010CFU/mL；接着，让该悬浮液在温度37℃厌氧条件下预培养50-70min，再在-15～-20℃预冻8-14h，最后进行真空冷冻干燥得到所述的发酵菌剂。所述两歧双歧杆菌CGMCCNO.13632具有下述生物学特性：(1)菌体特征：呈革兰氏染色阳性，具有耐酸性，在pH3.0-8.0环境条件下生长良好，不形成孢子，不运动的细菌。菌体约0.5-1.3μm×1.5-8μm，外观变化很大的杆状体，其菌株的一般特征是均一或分枝或分叉的Y和V类型，以及棍棒状或匙状类型，单生、成对、有时呈链。(2)菌落特征：在MRS培养基上形成明显的菌落，直径在0.2-2.5mm之间，圆形，凸面或透镜状，微白，不透明，有平滑至粘液状的柔软表面，不形成菌丝体。MRS培养基深层菌落的形态不定，靠近表面不生长。(3)生长特性：该菌株最适生长温度为36-38℃，32-38℃生长良好，生长极限为23-25℃不等，20℃以下和4本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种两歧双歧杆菌CCFM 16(Bifidobacterium bifidum)，于2017年01月17日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心CGMCC，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所，保藏编号为CGMCC NO.13632。

【技术特征摘要】
1.一种两歧双歧杆菌CCFM16(Bifidobacteriumbifidum)，于2017年01月17日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心CGMCC，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所，保藏编号为CGMCCNO.13632。2.一种缓解便秘的组合物，其特征在于所述组合物包括两歧双歧杆菌CGMCCNO.13632以及在药学上可接受的载体。3.根据权利要求2所述的组合物，其特征在于所述的组合物是颗粒剂、胶囊剂、片剂、丸剂或口服液剂型。4.根据权利要求2所述的组合物，其特征在于所述在药学上可接受的载体包括医学上通常使用的填充剂、粘合剂、润湿剂、崩解剂、润滑剂、矫味剂中的一种或多种。5.一种发酵食品，其特征在于所述发酵食品为使用含有两歧双歧杆菌CGMCCNO.13632的发酵剂生产的乳制品、豆制品与果蔬制品；所述发酵剂是指含有所述两歧双歧杆菌CGMCCNO.13632的产品，使用该产品可以快速发酵产生终端食品。6.根据权利要求5所述的发酵食品，其特征在于所述的乳制品包括牛奶、酸奶油或干酪；所述的豆制品包括豆奶、豆豉或豆酱；所述的果蔬制品包括黄瓜、胡萝卜、甜菜、芹菜或圆白菜制品。7.一种含有两歧双歧杆菌CGMCCNO.13632的菌剂，其特征在于所述菌剂为将含有两歧双歧杆菌CGMCCNO.1...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈卫，王刚，王琳琳，田丰伟，张秋香，刘小鸣，范大明，赵国忠，张白曦，翟齐啸，毛丙永，郭敏，杨波，陆文伟，赵建新，张灏，
申请(专利权)人：江南大学，
类型：发明
国别省市：江苏,32