一种测定多糖蛋白结合物中游离多糖含量的方法技术

本发明专利技术涉及一种测定多糖蛋白结合物中游离多糖含量的方法，该方法包括：冰浴条件下，向一定浓度的结合物原液中加入脱氧胆酸钠溶液，混合，静置后再加入三氯乙酸溶液，混匀，离心，取上清。上清为测定样品A，待测的结合物原液为待测样品B，利用化学方法或者免疫学方法分别测定样品A和样品B中的多糖含量a和b，根据公式：游离多糖含量=a/b×100%计算出结合物中游离多糖的含量。

【技术实现步骤摘要】
一种测定多糖蛋白结合物中游离多糖含量的方法
：本专利技术涉及疫苗的检测，特别涉及一种多糖蛋白结合物中游离多糖含量的测定。
技术介绍
：各种多糖疫苗的使用，有效地降低了相应传染病的发病率。但是由于荚膜多糖属于非T细胞依赖性抗原，不具备免疫记忆反应，且不能对2岁以下儿童产生保护性抗体，因此，其使用具有一定的局限性。研究表明，通过化学方法将蛋白载体共价结合于荚膜多糖上形成多糖蛋白结合物可以使之转化为T细胞依赖型抗原，从而可以提供对5岁以下婴幼儿的保护。实验表明，多糖蛋白结合物中游离多糖含量的过高会导致疫苗中有效的抗原含量降低，对临床效果产生不利影响。另外根据欧洲药典的要求，也需要对多糖蛋白结合物中的游离多糖的含量进行测定。因此，游离多糖含量对于产品的质量控制是一个重要因素。由于多糖种类以及多糖和蛋白的结合方式加之结合物的纯化方式的不同，目前还没有关于游离多糖含量测定的通用方法。我们通过实验证明，目前存在的一些测定游离多糖含量的方法，但分别具有一定的局限性，不能测定所有结合物中游离多糖的含量。国外有文献报道，可以在加入脱氧胆酸后，再加入盐酸(HCl)测定流感嗜血杆菌的多糖蛋白结合物中的游离多本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种多糖蛋白结合物中游离多糖含量的测定方法，其特征在于，步骤如下：1)取待测的多糖蛋白结合物原液，冰水浴条件下，加入0.3％～3％的脱氧胆酸钠溶液，添加量为结合物原液体积的5％～15％，充分混匀，静止20min～40min；然后加入100％三氯乙酸溶液，添加量为结合物原液体积的0.1％‑1％，混匀后4～8℃，8000rpm～12000rpm，离心15～20min；2)取离心后的上清为测定样品A，取待测的结合物原液为待测样品B，利用化学方法或者免疫学方法分别测定样品A和样品B中的多糖含量为a和b；3)多糖蛋白结合物中游离多糖含量即为a/b×100％；其中，多糖蛋白结合物选自：肺炎链球菌多糖‑CR...

【技术特征摘要】
1.一种多糖蛋白结合物中游离多糖含量的测定方法，其特征在于，步骤如下：1)取待测的多糖蛋白结合物原液，冰水浴条件下，加入0.3％～3％的脱氧胆酸钠溶液，添加量为结合物原液体积的5％～15％，充分混匀，静止20min～40min；然后加入100％三氯乙酸溶液，添加量为结合物原液体积的0.1％-1％，混匀后4～8℃，8000rpm～12000rpm，离心15～20min；2)取离心后的上清为测定样品A，取待测的结合物原液为待测样品B，利用化学方法或者免疫学方法分别测定样品A和样品B中的多糖含量为a和b；3)多糖蛋白结合物中游离多糖含量即为a/b×100％；其中，多糖蛋白结合物选自：肺炎链球菌多糖-CRM197、PRP-CRM197、或A群脑膜炎球菌多糖-CRM197。2.如权利要求1所述的测定方法，其特征在于，步骤如下：1)取待测的多糖蛋白结合物原液，冰水浴条件下，1％脱氧胆酸钠溶液，添加量为结合物原液体积的10％，充分混匀，静止20min～40min；然后加入100％三氯乙酸溶液，添加量为结合物原液体积的0.5％，混匀后4℃，1...

【专利技术属性】
技术研发人员：赵秋敏，孙倩，李军强，金永杰，李亚冰，刘贺军，李剑，
申请(专利权)人：天士力制药集团股份有限公司，
类型：发明
国别省市：天津,12