修饰过的因子VII制造技术

因子Ⅶ的催化活性位点经修饰产生一种能有效地阻断血液凝固级联反应的化合物。这些修饰使因子Ⅶａ基本上不能激活血浆因子Ｘ或Ⅸ。本发明专利技术涉及一种新治疗方法以及修饰过的因子Ⅶ用于预防和治疗与缺血后再灌注相关的心肌损伤，用于改善再灌注过程中局部心肌血流以及用于维持或改善病人的血管开放度的用途，以及在血管易于形成血栓处修饰过的因子Ⅶ的局部应用。（*该技术在2017年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及新的治疗方法和修饰形式的因子Ⅶ的新用途，修饰过的因子Ⅶ抑制血栓形成，维持或改善血管开放度，改善局部心肌血流和调节在缺血后再灌注过程中的心肌损伤。
技术介绍
血液凝固是包含一系列不同血液成分或因子的复杂反应，最终产生血纤蛋白块。一般，血液中参与称为凝血级联反应的成分是酶原，一种能通过一种激活物(自身为活化的凝血因子)作用转变成蛋白水解酶的酶学无活性的蛋白质。已经历这种转变的凝血因子一般称为“活性因子”，并添加一个小写“a”命名(如，因子Ⅶa)。需要活化的因子Ⅹ(“Ⅹ a”)以转变凝血酶原为凝血酶，其再将纤维蛋白原转变成纤维蛋白，作为形成纤维蛋白块的最后阶段。有两个系统或途径促进因子Ⅹ的激活。“内源性途径”指通过利用仅在血浆中存在的因子导致凝血酶形成的那些反应。一系列蛋白酶介导的反应最终产生了因子Ⅸa，其与因子Ⅷa联合，切割因子X形成Ⅹ a。在血液凝固的“外源性途径”中，同样的蛋白水解由因子Ⅶa及其辅因子(组织因子)进行。组织因子是一种膜结合蛋白，一般不在血浆中循环。然而，一旦血管破裂，其可在Ca2+和磷脂存在下与因子Ⅶa复合以催化因子Ⅹ或因子Ⅸ的激活(Nemerson和Gentry，生物化学(Biochem.)25:4020-4033(1986))。虽然在止血中两种凝血途径的相对重要性不清楚，近年来，已发现因子Ⅶ和组织因子在调节血液凝固中起关键作用。因子Ⅶ是以单链酶原形式在血浆中循环的痕量血浆糖蛋白。此酶原无催化活性(Williams等人，生物化学杂志(J.Biol.Chem.)264:7536-7543(1989)；Rao等人，美国国家科学院学报(Proc.Natl.Acad.Sci),85:6687-6691(1988))。单链因子Ⅷ可以在体外通过因子Ⅹa，因子Ⅻa，因子Ⅸa或凝血酶转变成双链因子Ⅷa。认为因子Ⅹa是因子Ⅶ的主要生理激活剂。象其它几种参与止血的血浆蛋白一样，因子Ⅶ的活性依赖维生素K，这是在蛋白质氨基端成簇的多谷氨酸残基的g-羧基化所需的。这些g-羧基化的谷氨酸为因子Ⅶ与磷脂的金属关联的相互作用所需。酶原因子Ⅷ到活化的双链分子的转变通过位于大约分子中部的内肽键的切割来完成。人因子Ⅶ中，活性切割位点在Arg152-Ile153(Hagen等人，美国国家科学院院报，83:2412-2416(1986)；Thim等人，生物化学(Biochem.)27:7785-7793(1988)，此处引用两篇文献作为参考)。牛因子Ⅶ通过在类似的Arg152-Ile153键的切割被激活(Takeya等人，生物化学杂志(J.Biol.chem.)263:14868-14877,1988)。在组织因子、磷脂和钙离子存在下，双链因子Ⅶa通过有限蛋白水解迅速激活因子Ⅹ或因子Ⅸ。经常需要选择性阻断病人的凝血级联反应。例如，可以在肾透析或治疗深静脉栓塞、弥散性血管内凝血(DIC)以及其它医学疾病过程中使用如肝素、香豆素、香豆素衍生物、二氢化茚二酮衍生物等的抗凝药。例如，肝素处理或柠檬酸离子的体外处理(美国专利4,500,309)可用于透析以防止在治疗过程中的凝血。肝素也用于防止手术中病人的深静脉血栓形成。然而，用肝素和其它抗凝药的治疗有不期望的副作用。可得的抗凝药一般地作用遍及全身，而不是特异性作用于凝血位置。例如，肝素可引起严重出血。此外，由于半衰期约80分钟，肝素被从血中迅速清除，需要频繁给药。因为肝素以抗凝血酶Ⅲ(ATⅢ)的辅助因子起作用，而在DIC治疗中ATⅢ被迅速地耗贫，维持肝素的合适剂量经常是困难的，需要连续监视ATⅢ和肝素水平。如果ATⅢ极度贫乏肝素也无作用。此外，肝素的长期使用也可以增加血小板凝结且减少血小板数量，且参与骨质疏松的形成。二氢化茚二酮衍生物也可有毒副作用。除了上述简单描述的抗凝药之外，已发现几种天然存在的蛋白质有抗凝药活性。例如，Reutelingsperger(美国专利No.4,736,018)从牛主动脉和人脐静动脉中分离了抗凝蛋白质。Maki等人(美国专利No.4,732,891)公开了人胎盘衍生的抗凝蛋白质。此外，ATⅢ已被提议用作治疗性抗凝药(Schipper等人，柳叶刀(Lancet)1(8069):854-856(1978)；Jordan，美国专利No.4,386,025；Bock等人，美国专利No.4,517,294)。血管壁中平滑肌细胞(SMC)的增殖是动脉粥样硬化中血管再造或应答其它血管损伤之后血管损伤形成中的重要事件。例如，动脉粥样硬化的治疗经常包括用血管成形术、动脉内膜切除术或减少动脉粥样硬化斑切除术疏通封闭的血管，或者用旁路移植，一些通过导管插入术(血管成形术)将动脉粥样硬化斑压缩或除去，通过切开(动脉内膜切除术)从动脉壁剥离或通过天然或合成移植物分流的手术方法疏通封闭的血管。这些方法清除了血管内皮，干扰下面的内膜层，导致中层平滑肌细胞的死亡。此损伤之后的中层平滑肌细胞增生且移入内膜，这典型地在损伤后的头几周内最多六个月内发生，且当覆盖在上面的内皮层重建后停止。在人中，这些损伤由约20％细胞和80％胞外基质组成。在约30％或更多的用血管成形术、动脉内膜切除术或旁路移植治疗的病人中，血栓和/或内膜中平滑肌细胞增生引起血管再闭塞且经常使重建手术失败。这种手术后血管的关闭称为“再狭窄”。目前仍需要具有抗凝活性改善的物质，其能以相对低的剂量给药且不产生与传统抗凝剂相关的不期望的副作用。本专利技术通过提供特异性作用于损伤位置的抗凝药且进一步提供了其他相关的便利来满足这一需要。修饰过的因子Ⅶ分子给人施用治疗包括血管内凝血的各种情况特别有用。例如，虽然深静脉血栓和肺栓塞可以用传统抗凝药治疗，此处所述的修饰过的因子Ⅶ可用于在确定的如那些经历手术或有充血性心力衰竭的高危病人中防止血栓栓塞并发症。此外，修饰过的因子Ⅶ可作为组织因子介导的凝血诱导的拮抗剂，阻止凝血酶的产生和随后的纤维蛋白沉淀。同样，修饰过的因子Ⅶ可用于抑制组织因子活性，导致如对血液凝固、血栓形成或血小板沉积的抑制。修饰过的因子Ⅶ分子特别可用于由于急性血管损伤的内膜增生或再狭窄的治疗。急性血管损伤是那些与慢性血管损伤(如动脉粥样硬化)相反的迅速发生的(即数天至数月的)损伤。急性血管损伤常常由手术过程造成，如血管重建，其中使用了血管成形术，动脉内膜切除术，动脉粥样硬化斑切除术，血管移植物置入等技术。增生也可以作为对如移植物置入或器官移植的延迟反应而发生。由于修饰过的因子Ⅶ比肝素更有选择性，一般地仅结合暴露于损伤位置的组织因子，且因为修饰过的因子Ⅶ不破坏其它凝血蛋白，因此当防止深静脉栓塞的预防性使用时比肝素更有效且更不易引起出血并发症。冠状动脉疾病的最新进展包括机械性介入的使用以清除或取代病因性斑块物从而重建通过冠状动脉的足够的血流。除了各种形式的机械性介入的使用，包括气囊血管成形术、减少动脉粥样硬化斑切除术、血管斯坦特固定模(Stent)的放置、激光治疗或喷丸，这些技术的有效性仍受到治疗后六个月内约40％的再狭窄率的局限。再狭窄被认为是由生物过程的复杂相互作用造成的，包括血小板沉积和血栓形成，趋化因子和促分裂因子的释放以及血管平滑肌细胞迁移和增生进入扩张的动脉部分的内膜。对机械性损伤位置的血小板积累本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种抑制病人血栓形成的方法，其包括在病人易于形成血栓的血管位置局部施用治疗有效剂量的一种组合物，此组合物含有在其催化中心中至少有一种修饰的因子Ⅶ，此修饰基本上抑制了修饰过的因子Ⅶ激活血浆因子Ⅹ或Ⅸ的能力。

【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员：LC彼特森，CE哈特，U赫德内，ME拉斯穆森，
申请(专利权)人：诺沃挪第克公司，津莫吉尼蒂克斯，
类型：发明
国别省市：DK[丹麦]