灵芝多糖蛋白及其制备方法与用途技术

本发明专利技术涉及一种含有５至２０个氨基酸的肽，特别涉及一种从灵芝中提取而获得的灵芝多糖蛋白Ｇ１－ＰＰ，其以灵芝为原料母体提取提取液，将提取液浓缩后，经过超滤或透析而截留高分子量的多糖蛋白而获得。还涉及该灵芝多糖蛋白可工业化生产的制备方法及该灵芝多糖蛋白Ｇ１－ＰＰ应用于制备抗肿瘤作用的药物。本发明专利技术可以获得一种高分子量、药用价值高的灵芝多糖蛋白，且提供一种可以工业化生产高分子灵芝多糖蛋白的制备方法，该制备方法成本低、提取率高、提取纯度高，而所获得的灵芝多糖蛋白可以通过抑制肿瘤血管的新生及抑制癌细胞的侵袭而抑制肿瘤的生长，抑制效果好，为一种新型的抗肿瘤药物。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种含有5至20个氨基酸的肽，特别涉及一种从灵芝中提取而获得的灵芝多糖蛋白及其制备方法与用途。
技术介绍
灵芝具有特殊的药用价值，被视为珍贵的中药材，传统的服用方法为煎服或煮食。目前国内也有较多的学者在进行灵芝有效成分的提取、分离及药用分析的工作，其中，针对灵芝多糖的研究主要有如下几例1、期刊《中草药》1994，25(8).-395-397中记载了由作者何云庆、李荣芷撰写的《灵芝肽多糖的化学研究》，其从灵芝子实体中提取了的葡聚糖肽的分子量都较小，一般在几万的单位，分子量较小，而且也没有对所获取的多糖蛋白的药用作用进一步的研究和公开。2、期刊《食用菌学报》1997，4(2).-40-42中记载了由作者陈书明、王勤撰写的《灵芝肽多糖生物活性初探》，其从灵芝菌丝体中分离纯化得到的灵芝肽多糖的分子量为140000，并且认为该肽多糖具有增强体液免疫和红细胞的功能。3、期刊《分析试验室》1998，17(4).-17-21中记载了由作者罗立新、周少奇撰写的《灵芝多糖的结构分析》，其经过热水提取的多糖的分子量较小，如3.7×104和4.2×104。综上所述，现有技术对于灵芝多糖的提取方法有热水浸提(或水煎煮)、乙醇提取和稀碱提取，提取工艺各有不同，而且只能适用于小批量制备而无法进行工业化生产，因而实用性差，并且获得的多糖的结构和分子量也不同，特别多糖肽的分子量小直接影响了灵芝多糖蛋白的药用价值。
技术实现思路
本专利技术的目的在于克服现有技术中的不足之处，而提供一种分子量大、药用价值高的灵芝多糖蛋白及其可工业化生产的制备方法，并且还提供了灵芝多糖蛋白在制备抗肿瘤药物中的用途。本专利技术的目的可以经如下方案实现。灵芝多糖蛋白Gl-PP，其要点在于，其以灵芝为原料母体提取提取液，将提取液浓缩后，经过超滤或透析而截留高分子量的多糖蛋白而获得。灵芝多糖蛋白为一种结合蛋白多糖(Gamaderma Lncidumpolysacnarides peptide，简称GL-PP)。作为原料的灵芝可以是代料栽培而获得的灵芝子实体，也可以是段木栽培的灵芝子实体，甚至还可以是通过深层发酵而获得的灵芝菌丝体。一般认为灵芝多糖的药理活性来自于所含的几万到十几万分子量的多糖，而本专利技术突破现有技术从灵芝中只能提取得到分子量较小的分子多糖的技术而采用将灵芝提取液再经超滤或透析而截留得到高分子量的多糖蛋白(Gl-PP)。这种对提取液进行透析或超滤的工艺现有技术中并没有应用于提取灵芝多糖蛋白。这可能是因为现有技术中在研究灵芝多糖时一般都是实验室行为，现有课题的研究还没有意识到高分子结合多糖蛋白的存在，自然不可能超出这种普通认识而采用超滤或透析对灵芝提取液进行精加工而获得高分子量的多糖蛋白，因而本专利技术是一种非显而易见的专利技术创造。而通过这种工艺提取而获得的灵芝多糖蛋白的药用价值得到了很大的提高，例如经本专利技术提取而获得的灵芝多糖蛋白(Gl-PP)可以抑制肿瘤新生血管的形成，还可以直接抑制人肺癌PG细胞的侵袭，即该灵芝多糖蛋白具有抗肿瘤作用。这种精确多糖蛋白所获取的效果在现有的灵芝多糖的研究中并没有记载。本专利技术还在于该多糖蛋白呈黄褐色至褐色粉末状，其重均分子量Mw为40～60万。该黄褐色至褐色粉末状物质可溶于水，现有技术中从灵芝中提取的多糖蛋白的分子量均较小，一般在几万到十几万的范围内，而本专利技术所获取多糖蛋白的重均分子量Mw为40～60万。进一步还在于该多糖蛋白组分由D-葡萄糖、D-半乳糖、果糖、D-木糖、D-鼠李糖组成。利用1HNMR波谱分析鉴定，该多糖蛋白的化学位移值具有δ4.704ppm，δ4.509ppm等信号，说明多糖蛋白中的这些单糖主要以β-型糖苷键连接。且尚有δ5.189ppm，δ5.01ppm信号，表明另有少数量α-糖苷键的存在。本专利技术的另一个目的提供一种灵芝多糖蛋白的制备方法，其要点在于，1)提供一种灵芝作为原料母体，清洗，干燥，2)破碎该原料母体而得破碎物，3)用乙醇回流破碎物后干燥而得干燥物，4)将干燥物用水提取而得提取液，比例为干燥物∶水＝1∶10～15，5)将提取液静置过滤，获取滤液并浓缩至浓缩液中生药∶水＝1∶5左右时作为粗浓缩液，6)提供一种澄清剂，7)在粗浓缩液中加入澄清剂，搅拌静置加热，并进行固液分离得到提取澄清液；8)将提取澄清液进行超滤处理，截留分子量6000以上的多糖蛋白而成超滤液，9)将超滤液浓缩至含生药量0.5～1.5g/ml的超滤浓缩液后加入乙醇进行沉淀，离心分离后取沉淀物低温干燥至干，即得灵芝多糖蛋白。现对该工艺作如下解释作为原料的灵芝可以是代料栽培而获得的灵芝子实体，也可以是段木栽培的灵芝子实体，甚至还可以是通过深层发酵而获得的灵芝菌丝体。清洗及干燥采用常规的技术进行。采用常用破碎装置对灵芝原料母体进行破碎，破碎后的灵芝状态可以为片状或烟丝状，只要满足可以获得细胞壁已被粉碎的母体即可。进一步还在于将灵芝子实体破碎成烟丝状。实验表明将灵芝子实体破碎成烟丝状比破碎成块状，多糖蛋白的提取率高。而代料栽培灵芝比段木栽培灵芝提取率要高。因为所要提取的灵芝多糖蛋白不溶于乙醇，因而将破碎物用乙醇回流处理，以便去除不必要的杂质，并将处理物干燥。因为灵芝多糖蛋白溶于水，因而将干燥物用水提取，提取时间越长，提取率越高，但成本也相应增加，因而可以选择在2～3小时为好。并对提取液进行浓缩获取药物活性成份浓度较高的粗浓缩液。粗浓缩液中含生药量的浓度会对接下来的纯化工艺产生一定的影响，但对整个提取工艺的效果不会产生太大的影响，因而只需合理控制便可，但尽量控制在浓缩液中生药∶水＝1∶5左右最佳。在浓缩液中加入澄清剂，因为澄清剂可以除去鞣质、蛋白质、树脂及色素等杂质，因而可以增加提取的灵芝多糖蛋白的纯净度。采用常规固液分离方式，例如过滤，离心。超滤处理的进行可以达到精制和提纯的目的，从而获取高分子的多糖蛋白，并获得更为精确的灵芝多糖蛋白(Gl-PP)。在灵芝多糖蛋白的提取工艺中采用超滤工艺此为首次。灵芝多糖的分离纯化常采用乙醇沉淀法，将超滤液浓缩至含生药量0.5～1.5g/ml时加入乙醇进行沉淀，离心分离后取沉淀物低温干燥至干，即得灵芝多糖蛋白(Gl-PP)。本专利技术进一步还在于用水提取的步骤可以具体为二次提取，第一次提取时间为2.5小时，第二次1.5小时。对提取液进行浓缩的设备或为转速控制在90～100r/min的旋转蒸发仪，或为真空浓缩锅。在粗浓缩液中加入澄清剂，搅拌静置加热，并进行固液分离得到提取澄清液的具体步骤为1)提供一种ZTC-II天然澄清剂，2)澄清剂分A组分与B组分，配制时A组分加水配A溶液，B组分加1％醋酸溶液配成B溶液，3)将提取液浓缩到生药∶水＝1∶5左右时，按0.2～0.4％加入B溶液，每20分钟搅拌一次，2h后用同样方法加入0.1～0.2％的A溶液，加料30～60分钟再搅拌一次，2h后粗过滤，静置过夜，滤过为澄清液。ZTC-II天然澄清剂市面上有售，其产品有标明A组分与B组分的结构及使用方法，例如南开大学就有提供这种澄清剂。将提取澄清液进行超滤处理的具体步骤可以为1)提供一种超滤装置为CLW型的组件，该组件以中空纤维超滤膜、泵、管道、阀门、压力表和预处理装置组成，开机前将溶液阀及超滤液阀打开，然后启动泵，本文档来自技高网...

【技术保护点】
灵芝多糖蛋白Ｇ１－ＰＰ，其特征在于，其以灵芝为原料母体提取提取液，将提取液浓缩后，经超滤或透析而截留高分子量的多糖蛋白而获得。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：林志彬，林树钱，王赛贞，吕松涛，曹琦珍，
申请(专利权)人：福州绿谷生物药业技术研究所，林志彬，林树钱，王赛贞，吕松涛，曹琦珍，
类型：发明
国别省市：35[中国|福建]