促红细胞生成素受体结合抗体制造技术

一种抗体或其抗体片段，其在哺乳动物中激活人促红细胞生成素受体内源性活性，但不与具有ＳＥＱ　　ＩＤ　　ＮＯ：１氨基酸序列的肽相互作用。（*该技术在2023年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及识别、结合和优选地激活促红细胞生成素受体的抗体。
技术介绍
促红细胞生成素(“EPO”)是一种糖蛋白，其是红细胞生成的主要调节物。具体地说，EPO负责促进红细胞系祖细胞的生长、分化和生存，使成熟红细胞产生。响应于血液和组织中氧水平变化，促红细胞生成素看来似乎可刺激未成熟成红细胞的增殖和分化。其也作为生长因子的功能，刺激红细胞系祖细胞的有丝分裂活性，例如红细胞爆发形成和集落生成单位。也充当分化因子，触发红细胞集落生成单位转化为原成红细胞(参见Erslev，A.，New Eng.R Med.，316101-103(1987))。EPO具有约34,000道尔顿的分子量，以-α、β和脱唾液酸基的(asialo)三种形式存在。在怀孕的中期至晚期，EPO在胎儿肝脏内合成。此后，EPO在肾脏内合成，在血液中循环并在尿中排泄。人尿EPO已得到分离纯化(参见Miyake等.，J Biol.Chem.，2525558(1977))。此外，用于鉴定、克隆和表达编码EPO基因的方法(参见美国专利第4,703,008号)以及从细胞培养基中纯化重组EPO的方法(参见美国专利第4,667,016号)为本领域公知。通过结合并激活称为促红细胞生成素受体的细胞表面受体，介导了EPO活性。所述EPO受体属于细胞因子受体超家族，据信含有至少两种不同的多肽，55-72kDa类和85-100kDa类(参见美国专利第6,319,499号，Mayeux等.，J Biol.Chem，26623380(1991)，McCaffery等.，J Biol.Chem.，26410507(1991))。另外的研究业已揭示其它EPO受体多肽复合物具有诸如110、130和145kDa的分子量(参见美国专利第6,319,499号)。鼠和人EPO受体皆已得到克隆和表达(参见D′Andrea等.，Cell，57277(1989)；Jones等.，Blood，7631(1990)；Winkelmann等.，Blood，7624(1990)；WO 90/08822/美国专利第5,278,065号)。全长人EPO受体是483个氨基酸的跨膜蛋白质，具有约25个氨基酸的信号肽(参见美国专利第6,319,499号)。人受体显示与鼠受体具有约82％的氨基酸序列同源性。同前。在没有配体的情况下，EPO受体以预成型二聚体形式存在。EPO与其受体的结合导致构象改变，使得胞浆区密切接近。尽管无法充分理解，据信在受体激活中该“二聚化”起作用。EPO受体的激活产生了众多的生物效应。这些活性的一些包括刺激增殖、刺激分化和抑制细胞凋亡(参见美国专利第6,319,499号，Liboi等.，PNAS USA，9011351(1993)，Koury，Science，248378(1990))。EPO受体二聚化和激活之间的关系可用于鉴定不同于EPO的化合物(即，例如抗体)，所述化合物能(1)使EPO受体二聚化；及(2)激活所述受体。这些化合物可用于治疗患贫血症的哺乳动物，并可用于鉴定具有异常功能EPO受体的哺乳动物。专利技术概述在一个实施方案中，本专利技术涉及结合人促红细胞生成素受体的抗体。在一个实施方案中，所述抗体包含重链可变区，所述重链可变区选自SEQ ID NOS3、7、11、15、19、31、35、39、43、47、51、55及其片段。在另一个实施方案中，所述抗体包含轻链可变区，所述轻链可变区选自SEQ ID NOS5、9、13、17、21、23、25、27、29、33、37、41、45、49、53、57及其片段。在另一个实施方案中，本专利技术涉及分离的抗体，其能在哺乳动物中结合人促红细胞生成素受体。该抗体包含重链可变区或轻链可变区，所述可变区包含CDR1-CDR3的连续序列。重链可变区的氨基酸序列包含CDR1-CDR3的连续序列，所述连续序列选自SEQ ID NO58、SEQ ID NO59、SEQ ID NO60、SEQ ID NO61及其片段。轻链可变区的氨基酸序列包含CDR1-CDR3的连续序列，所述连续序列选自SEQ ID NO62、SEQ ID NO63、SEQ ID NO64、SEQ ID NO65、SEQ ID NO66、SEQ ID NO67、SEQ ID NO68及其片段。在另一个实施方案中，本专利技术涉及在哺乳动物中激活人促红细胞生成素受体内源性活性，但不与具有PGNYSFSYQLEDEPWKLCRLHQAPTARGAV(SEQ ID NO1)的氨基酸序列的肽相互作用的抗体。在另一个实施方案中，本专利技术涉及在哺乳动物中能激活人促红细胞生成素受体内源性活性的抗体，其中所述抗体或其抗体片段显示了内源性人促红细胞生成素与促红细胞生成素受体结合亲和力100倍范围内的结合亲和力。还在另一个实施方案中，本专利技术涉及在哺乳动物中激活人促红细胞生成素受体内源性活性的抗体或其抗体片段。所述抗体或其抗体片段包含至少一种具有SEQ ID NO3氨基酸序列或其抗体片段的人重链可变区，和/或至少一种具有SEQ ID NO5氨基酸序列或其抗体片段的人轻链可变区，只要所述抗体或其抗体片段不与具有PGNYSFSYQLEDEPWKLCRLHQAPTARGAV(SEQ ID NO1)的氨基酸序列的肽相互作用。还在另一个实施方案中，本专利技术涉及在哺乳动物中激活人促红细胞生成素受体内源性活性的抗体或其抗体片段。所述抗体或其抗体片段包含至少一种具有SEQ ID NO7氨基酸序列或其抗体片段的重链可变区，和/或至少一种具有SEQ ID NO9氨基酸序列或其抗体片段的轻链可变区，只要所述抗体或其抗体片段不与具有PGNYSFSYQLEDEPWKLCRLHQAPTARGAV(SEQ ID NO1)的氨基酸序列的肽相互作用。该实施方案也包括其它重链可变区，选自SEQ ID NO11、15、19、31、35、39、43、47、51和55或任一这些前述SEQ ID NOS的抗体片段，其中所述抗体或其抗体片段不与具有SEQ ID NO1的氨基酸序列的肽相互作用。包括于该实施方案中的其它轻链可变区可选自SEQ ID NO13、17、21、23、25、27、29、33、37、41、45、49、53和57或任一这些前述SEQ ID NOS的抗体片段，其中所述抗体或其抗体片段不与具有SEQ ID NO1的氨基酸序列的肽相互作用。还在另一个实施方案中，本专利技术提供了在哺乳动物中激活人促红细胞生成素受体内源性活性的抗体或其抗体片段，所述抗体包含至少一种重链可变区和至少一种轻链可变区的氨基酸序列，所述重链可变区/轻链可变区选自SEQ ID NO11/SEQ ID NO13、SEQ ID NO15/SEQ ID NO17、SEQ ID NO19/SEQ ID NO21、SEQ ID NO11/SEQ ID NO23、SEQ ID NO11/SEQ ID NO25、SEQ ID NO11/SEQ ID NO27、SEQ ID NO11/SEQ ID NO29、SEQ ID NO31/SEQ ID NO33、SEQ ID NO35/SEQ ID NO37、SEQ ID NO39/SEQ ID NO41、SEQ ID NO43/SEQ ID NO45本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】

【专利技术属性】
技术研发人员：P·J·达里埃斯，L·L·格琳，D·H·欧斯罗，E·B·雷利，J·韦勒，
申请(专利权)人：艾博特公司，
类型：发明
国别省市：