一种绵羊抗苦马豆素抗体的ELISA检测方法及试剂盒技术

本发明专利技术公开了一种绵羊抗苦马豆素抗体的ELISA检测方法及试剂盒，采用间接ELISA法检测绵羊血清抗苦马豆素抗体，包括以下步骤：(1)包被；(2)封闭；(3)添加待检血清及阳性、阴性血清；(4)添加酶标二抗；(5)添加底物溶液；(6)终止。通过该方法的实施，达到对绵羊免疫效果的快速、敏感、准确的判断，操作方法简单易行，适用于科研院所和基层畜牧系统。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于免疫学
，涉及一种绵羊抗苦马豆素抗体的ELISA检测方法及试剂盒。
技术介绍
疯草(Iocoweed)是豆科(Leguminosae)棘豆属(Oxytropis)和黄苗属(Astragalas)有毒植物的统称，由此而引起的中毒病称为疯草中毒(Locosim)或疯草病(Locodisease)。我国疯草主要分布于内蒙古、宁夏、甘肃、陕西、青海、新疆、西藏等省区。分布面积已超过1100万hm2,约占全国草场总面积的2. 8%,占西部草场面积的3. 3%,且每年以3. 5%的速度蔓延。疯草已成为我国西南、西北牧区危害草原畜牧业可持续发展的主要毒草。苦马豆素(Swainsonine, SW)是疯草的主要毒性成分之一,对疯草中毒病的发病机理和防治有重要意义。新疆是我国五大草原畜牧业省份之一，天然草地总面积为5596. 16X 104hm2,其中可利用面积4800. 68X 104hm2，是已垦农地的10. 4倍，林地的18倍。然而，由于“超载过牧”等原因，现已引起疯草等有毒植物的广泛蔓延，优质牧草严重退化，造成大量放牧家畜中毒，其中阿克苏地区每年中毒家畜在5% 10%，严本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种绵羊抗苦马豆素抗体的ELISA检测方法，其特征在于，采用间接ELISA法检测绵羊血清抗苦马豆素抗体，包括以下步骤：(1)包被：使用抗原包被缓冲液将苦马豆素人工抗原稀释到工作浓度，加入96孔酶标板，每孔100μL，4℃过夜；(2)封闭：将孔内抗原液弃去，加入PBST洗涤液，每孔200μL，振荡30s后弃去孔内液体，拍干，PBST洗涤液的配制方法：十二水磷酸氢二钠2.9g，无水磷酸氢二钾0.2g，氯化钠8.0g，氯化钾0.2g，吐温?200.5mL，溶解于1000mL蒸馏水；重复洗涤3次后，每孔加入20g/L明胶溶液，将酶标板置于37℃培养箱内培养1h进行封闭；(3)添加待检血清及阳性、阴性血...

【技术特征摘要】
1.一种绵羊抗苦马豆素抗体的ELISA检测方法，其特征在于，采用间接ELISA法检测绵羊血清抗苦马豆素抗体，包括以下步骤(1)包被使用抗原包被缓冲液将苦马豆素人工抗原稀释到工作浓度，加入96孔酶标板，每孔100yL，4°C过夜；(2)封闭将孔内抗原液弃去，加入PBST洗涤液，每孔200μ L，振荡30s后弃去孔内液体，拍干，PBST洗涤液的配制方法十二水磷酸氢二钠2. 9g，无水磷酸氢二钾O. 2g,氯化钠8. Og,氯化钾O. 2g，吐温-200. 5mL,溶解于IOOOmL蒸馏水；重复洗涤3次后，每孔加入20g/L明胶溶液，将酶标板置于37°C培养箱内培养Ih进行封闭；(3)添加待检血清及阳性、阴性血清弃去孔内明胶溶液，洗涤3次后，向每孔加入100 μ L工作浓度的待检血清、阳性血清和阴性血清，并以PBS溶液为空白对照，将酶标板置于37 °C培养箱内培养Ih;(4)添加酶标二抗弃去孔内血清，洗涤3次后，向每孔加入100μ L工作浓度的HRP-兔抗羊酶标抗体，将酶标板置于37°C培养箱内培养Ih ；(5)添加底物溶液弃去孔内溶液，洗涤3次后，向每孔加入100μ L底物溶液，底物使用四甲基联苯胺，即ΤΜΒ，配置方法为底物显色A液无水醋酸钠13. 6g，柠檬酸1. 6g，30%双氧水O. 3ml，用蒸馏水定容于500mL ;底物显色B液乙二胺四乙酸二钠O. 2g，柠檬酸O.95g，甘油50mL，0. 15g TMB,3mL DMS0，用蒸馏水定容于500mL，使用时A...

【专利技术属性】
技术研发人员：王帅，马春晖，胡建军，席琳乔，王连群，陈根元，
申请(专利权)人：塔里木大学，
类型：发明
国别省市：