本发明专利技术公开了一种从动物胆汁中提取胆汁酸的方法，其包括如下步骤：（１）将新鲜胆汁用真空冷冻干燥法制成干粉，再加入新鲜胆汁０．８～１．２倍体积量的水混匀，再加入新鲜胆汁体积量２～３倍的甲醇或乙醇混匀，静置；或者将新鲜胆汁与其０．８～１．２倍体积量的水混合，再用真空冷冻干燥法制成干粉，再加入新鲜胆汁０．１～０．２倍体积量的水混匀，再加入新鲜胆汁１～２倍体积量的甲醇或乙醇混匀，静置；（２）过滤，调滤液ｐＨ值至７～９，向滤液中加入其０．４～０．６倍体积量的水和其１．５～２倍体积量的氯仿混匀，静置分层，分出上层溶液，将其干燥制成粉。本发明专利技术的方法操作简便，条件温和，试剂消耗量较低，产品纯度高，收率高，易应用于工业化生产。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及。技术背景中世纪以来，各国都致力于胆汁的成分生化代谢和生理病理方面的尖端 试验性研究。研究表明动物胆汁中的胆汁酸中的鹅脱氧胆酸和熊脱氧胆酸 具有有效的溶石作用；胆汁酸具有抑制、杀伤和溶解敏感性细菌的作用，如肺炎双球菌和链球菌。但只有高纯度和较高浓度的胆汁酸才具有杀菌作用， 稀浓度的胆汁酸仅具有抗菌作用。目前，制备胆汁酸主要有化学合成法和天然胆汁提取法两类。目前公开 的从天然胆汁中提取胆汁酸的方法存在操作复杂，纯度较低，收率较低，试 剂消耗量大，成本较高，难以应用于工业化等缺点。1. Haslewond， G. A.D等(Studies in bile acids, Biochem. J, 1950, 47， 584-590)和Wiggins， H. S.等(Studies in bile acids, Biochem. J, 1958,70,349; Biochem. J, 1953,55， 293)公开了两种从胆汁中提取胆汁酸的方法方法一将胆汁与其2倍体积量的乙醇混和，静置24小时，过滤后蒸干。方法二将胆汁用一定量乙醇不断提取，直至醇提取液中呈无色，直至 全部蛋白沉淀除去，合并提取液蒸干成粉。上述两种方法的缺点在于虽然能将胆汁中的全部蛋白除去，但胆汁酸 中仍保留胆固醇和中性脂肪，因此产品纯度较低。2. 专利文献CN85 1 04111 A (公开日1986年7月16日)公开了一种 从胆汁中提取胆汁酸的方法将胆汁过滤后用NaOH调至碱性，加热水5小时，滤液用HC1酸化，沉淀物用水洗至中性，干燥，磨粉。该方法的缺点在 于用酸碱处理胆汁，特别是碱性溶液可降低氨基酸结合胆汁酸的活性(呈 游离胆汁酸)，且产品中含有胆固醇、中性脂肪和蛋白质，纯度不高，得率 较差。3丄eslie等(Clin. Chim. Acta,1969， 24, 253-259; Gut， 19710， 11， 126-130)公开了一种从胆汁中提取胆汁酸的方法:将十二指肠胆液与5倍量甲醇混和， 于37'C保温5-10分钟，离心后，沉淀用l-2倍量甲醇提取二次，合并甲醇 提取液蒸干呈粉，再用2倍量石油醚(40-60°C)抽提，除去脂质和胆固醇。 该方法的缺点在于甲醇用量大，胆汁酸呈干粉后用石油醚抽提操作麻烦， 也不能将胆固醇和脂质全部抽除。4丄arusso等(Gastroenterology, 1975， 69, 1307-1320)公开了一种从胆汁 中提取胆汁酸的方法将胆汁加10倍量95%乙醇，加热沉凝蛋白，过滤后， 提取液加水0.5倍量，调节pH至中性，然后用2倍量石油醚提取3次，最 后将乙醇提取液蒸干，呈粉末。该方法的缺点在于乙醇和乙醚用量太大， 操作麻烦，石油醚与乙醇分界面层次不清晰，很难掌握，会出现误差，成本 太高。5.Setchell等(Gastroenterology, 1997， 112， No.l)公开了一种从胆汁中 提取胆汁酸的方法将肝组织(10-lOOmg)加水20ml，捣成匀浆，加甲醇7 倍量(最终浓度为80%)，然后超声波处理20分钟，回流2小时，过滤后沉 淀，用1: 1等量氯仿和甲醇抽提，过滤液合并后，用旋转式蒸发器蒸干， 得肝胆汁酸粉末。该方法的缺点在于操作复杂，甲醇用量大，以氯仿和甲醇抽提胆固醇时分层不清晰，很难掌握，易出现误差，很难达到分离胆固 醇和脂质的目的，成本太高。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是为了克服现有的从胆汁中提取胆汁酸的方法操作复杂，纯度较低，收率较低，试剂消耗量大，成本较高，难以应用 于工业化的缺陷，而提供一种操作简便，条件温和，试剂消耗量较低并可回 收使用，产品纯度高，收率高，易应用于工业化生产的胆汁酸的提取方法。 本专利技术的方法包括如下步骤(1) 将新鲜胆汁用真空冷冻干燥法制成干粉，再加入新鲜胆汁0.8 1.2 倍体积量(更佳的为等量)的水混匀，再加入新鲜胆汁2 3倍体积量的甲醇 或乙醇混匀，静置；或者将新鲜胆汁与其0.8-1.2倍体积量(更佳的为等量)的水混合，再 用真空冷冻干燥法制成干粉，再加入新鲜胆汁0.1~0.2倍体积量的水混匀， 再加入新鲜胆汁1 2倍体积量的甲醇或乙醇混匀，静置；(2) 离心后取上清液或者过滤后取滤液，调pH值至7-9，加入上清液 或滤液0.4~0.6倍体积量的水和其1.5~2倍体积量的氯仿混匀，静置分层， 分出上层溶液，将其干燥制成粉。步骤(1)中，所述的新鲜胆汁较佳的为动物屠宰后保持时间为4小时 以内的新鲜胆汁。所述的静置的时间较佳的为2~24小时。.步骤(2)中，所述的离心或过滤后，较佳的将离心后的沉淀或过滤后 的滤渣用新鲜胆汁0.8~1.2倍体积量(更佳的为等量)的40 50'C的热甲醇 提取1 2次，将提取液与前述步骤中离心后的上清液或者过滤后的滤液合并， 之后再调节pH值至7~9，加入合并液0.4-0.6倍体积量的水和其1.5~2倍体 积量的氯仿混匀，静置分层，分出上层溶液，将其干燥制成粉。所述的调节 pH至7~9可用NaOH或KOH水溶液进行调节。所述的干燥较佳的为真空干 燥，更佳的为40 5(TC的真空干燥。所述的热甲醇提取的时间较佳的为每次 5~10分钟。所述的静置分层的时间较佳的为2~5小时。所述的真空干燥的 温度较佳的为40 50'C。在所述的分出上层溶液的步骤后，可先将上层溶液 蒸馏回收甲醇以循环使用，再进行真空干燥除去水。本专利技术所用原料及试剂均市售可得。本专利技术的积极进步效果在于本专利技术的方法操作简便，条件温和，试剂 消耗量低，易应用于工业化生产。本专利技术的方法制得的胆汁酸纯度可达95%以上，收率可达85-90%。具体实施方式下面通过实施例的方式进一步说明本专利技术，但并不因此将本专利技术限制在 所述的实施例范围之中。以下实施例中，本专利技术的收率定义为收率=胆汁酸产品质量/胆汁干粉质 量X100。/q。实施例l取100ml新鲜猪胆汁(猪屠宰后保存4小时)，经真空冷冻干燥后，得 干粉(8.5g)。向干粉中加入80ml水，再加入200ml甲醇，充分混和搅拌， 直至无泡黏沫出现，静置2小时。离心后，取上清液。将沉淀物再用100ml 预热甲醇(40°c)抽提1次(抽提后的沉淀物呈灰白色，为粘蛋白沉淀)， 提取时间为10分钟。合并提取液和上清液，lmol/LNaOH调节pH至7。向 合并液中加入其0.4倍体积量的水和其2倍体积量的氯仿，充分混和后，静 置2小时，溶液分两层，下层主要为胆固醇和游离脂肪酸。将上层溶液(甲 醇-水溶液)，真空(4(tc)干燥后，即得淡黄色胆汁酸无定形粉末，称重为 7.5g，收率88%， pettenkoffer反应测得纯度96y。。实施例2取100ml新鲜牛胆汁(牛屠宰后保存3小时)，经真空冷冻干燥后，得 干粉(7.5g)。向干粉中加入100ml水，再加入250ml甲醇，充分混和搅拌， 直至无泡黏沫出现，静置24小时。离心后，取上清液，lmol/LNaOH调节 pH至7，向上清液中加入其0.6倍体积量的水和其1.5倍体积量的氯仿，充 分混和后，静置2小时，将上层溶液(甲醇-水溶液)，真空(45°c)干燥后， 即得淡绿色胆汁酸无定形粉末，称重为6.38g，收率85%， pettenkoffer反应测本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种从动物胆汁中提取胆汁酸的方法，其特征在于包括如下步骤：（１）将新鲜胆汁用真空冷冻干燥法制成干粉，再加入新鲜胆汁０．８～１．２倍体积量的水混匀，再加入新鲜胆汁２～３倍体积量的甲醇和／或乙醇混匀，静置；或者将新鲜胆汁与其０． ８～１．２倍体积量的水混合，再用真空冷冻干燥法制成干粉，再加入新鲜胆汁０．１～０．２倍体积量的水混匀，再加入新鲜胆汁１～２倍体积量的甲醇和／或乙醇混匀，静置；（２）离心后取上清液或者过滤后取滤液，调节ｐＨ值至７～９，加入上清液或滤液 ０．４～０．６倍体积量的水和上清液或滤液１．５～２倍体积量的氯仿混匀，静置分层，分出上层溶液，将其干燥制成粉。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：周才一，
申请(专利权)人：吴夏君，周才一，
类型：发明
国别省市：31[]
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