核酸快速抽提方法技术

本发明专利技术是一种核酸快速抽提方法。现有技术中用强力变性剂溶解蛋白质，再采用硅藻、玻璃粉吸附和解吸附等方法提取核酸，但是操作繁琐，多次离心等不足，经常易导致实验失败。本发明专利技术研制了一种乙醇、焦碳酸二乙酯混合溶液，与一定比例的待测标本混合，经反应、浓缩、离心后，即可得到用于ＰＣＲ或ＲＴ－ＰＣＲ的核酸溶液，方法简单、可靠，不仅提高了标本的检测稳定性，也大大提高了检测效率。（*该技术在2018年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属分子生物学和医学检测领域，是采用较为简便可靠的方法抽取临床标本DNA、RNA，再采用DNA聚合酶链反应(PCR)或逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法对其进行检测。一般情况下DNA、RNA的提取主要是采用强力变性剂如盐酸胍或异硫氰胍或尿素-氯化锂等来溶解蛋白质，从而破坏细胞、病毒，并使核蛋白从核酸上解离下来，并灭活可能存在的RNA酶。在此基础上可采用硅藻、玻璃粉吸附和解吸附或有机溶剂抽提、乙醇(异丙醇)沉淀法提取核酸。这一方法是目前从事RT-PCR的临床实验室常规应用的方法。有机溶剂法的原理是强力变性剂与硫基乙醇联合作用溶解蛋白灭活RNA酶，再加入乙酸钠、饱和酚、氯仿-异戊醇抽取以变性蛋白，经高速离心后得到上清，再以乙醇或异丙醇沉淀浓缩核酸再以75％乙醇洗涤沉淀和容器去除残余盐份，再经烘干去除残余乙醇，从而得到纯净的核酸。从以上实验过程我们可以看到其优点在与能有效去除蛋白，排除一些溶于有机溶剂的干扰反应的物质，而且可以有效地浓缩核酸，但是其缺点也非常明显，首先是操作非常繁琐，有机溶剂抽提后取上清的过程必须小心谨慎，通常的小体积操作时很容易吸到或碰到导致实验失败的本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种核酸快速抽提方法，其特征在于用乙醇和焦碳酸二乙酯混合溶液，以一定比例与待测标本均匀混合，经水浴反应，浓缩样品，离心后，抽提完毕，上述过程具体条件如下：（１）混合溶液中乙醇浓度是５０－９０％（Ｖ／Ｖ），焦碳酸二乙酯浓度是１－１０％（Ｖ ／Ｖ）；（２）上述混合液以（０．８－１．２）∶（８－１２）比例与待测标本均匀混合；（３）与待测标本混合后的溶液在２５－４０℃水浴下反应１－１２分钟，再在沸水浴中置５－２０分钟；（４）在５５－７０℃水浴中挥发乙醇、焦碳酸二乙酯和水 份，用以浓缩样品；（５）高速离心，得上清液。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：唐榕，李晓芳，毛裕民，
申请(专利权)人：复旦大学，
类型：发明
国别省市：31[中国|上海]