用NAALADase抑制物治疗癌症的方法技术

本发明专利技术涉及二肽酶抑制物，具体地讲，涉及使用磷酸盐衍生物、羟基氧膦基衍生物、以及氨基磷酸酯衍生物来抑制Ｎ－乙酰基化α－连接的酸性二肽酶（ＮＡＡＬＡＤａｓｅ）的酶活性的方法，以及治疗疾病，特别是使用本发明专利技术的化合物来抑制前列腺癌细胞的生长的方法。（*该技术在2017年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】
相关申请本申请是1996年6月17日提交的题目为“”的美国专利申请第08/665,775号的部分继续申请。专利技术背景1．专利
本专利技术涉及使用有效剂量的NAALADase抑制物来治疗癌症、防止肿瘤细胞生长、抑制前列腺肿瘤细胞生长、和抑制NAALADase酶活性的方法。2．本专利技术的现有技术前列腺癌症是美国男性的主要癌症，其引起的死亡是第二位的。美国癌症学会的估计是，仅在1996年，有317,100例前列腺癌症被诊断出来，并且有41,400例死亡是由于前列腺癌症造成的。从1980年到1990年，前列腺癌症的发病率提高了65％，这一数字会随着诊断水平的提高和寿命的延长而继续上升。虽然，大多数男人会在发生前列腺癌之前而死于其它的病因，但是，随着男人的寿命的延长以及这种病会有更多的时间发展，可以预见会出现更高的前列腺癌症的死亡率。在1993年，报道了作为潜在的前列腺恶性瘤的标记物的前列腺特异性膜抗原(PSMA)的分子克隆化，以及作为前列腺癌的细胞毒性治疗模型的靶标的假说。PSMA抗体，特别是111In-标记的和3H-标记的PSMA抗体，已经在对前列腺癌的临床诊断和治疗方面进行了检验。PSMA是在前列腺管的表皮中表达的，并且存在于精子浆体、前列腺液体和尿液中。在1996年，发现了对PSMA的cDNA的表达与NAALADase的活性有关。NAALADase抑制物NAAG和NAALADase已经涉及与谷胺酸异常和神经毒性有关的一些人和动物的疾病。例如，已经证实了在海马内注射NAAG可以引发长时间的癫痫。最近，有报道说，遗传性易于发生癫痫的大鼠都具有NAALADase基本水平的持续增高。这些现象提供了对突触间谷胺酸的提高可以增加癫痫发生率这种假说的支持，并且建议NAALADase抑制物可以提供抗癫痫的活性。NAAG和NAALADase还涉及ALS的病因以及在病理上相似的称为遗传性犬牙脊柱肌肉萎缩症(Hereditary Canine SpinalMuscular Atrophy,HCSMA)的病因。已经证实的是，NAAG和其代谢物如NAA、谷胺酸、天冬氨酸等的浓度在ALS患者和患有HCSMA的狗的脑脊髓液中升高了2-3倍。此外，NAALADase活性在死亡的ALS患者和患有HCSMA的狗的脊柱组织中被明显地提高了(2-3倍)。因此，如果NAAG是对于这些酸性氨基酸和肽的CSF水平的改变负有责任的话，则NAALADase抑制物就可以用于临床限制ALS的发展。在死亡的精神分裂症患者的脑子中的NAAG水平和NAALADase活性的异常已经被报道了，特别是在额叶前部和缘脑区域更是如此。上述的发现都建议NAALADase抑制物可以用于治疗谷胺酸异常。然而，本专利技术涉及的是突然地和未曾预料地发现了本专利技术的化合物不仅是有效的NAALADase抑制物，而且还对治疗前列腺疾病，特别是前列腺癌非常有效。虽然有关癌症的数据是关于前列腺癌细胞的，但是，NAALADase抑制物在治疗NAALADase酶所存在的其它组织的癌症，如脑组织、肾脏、睾丸等的癌症，也应该是同等有效的。虽然已经发现和鉴定了一些NAALADase抑制物，但是，它们都仅仅用在非临床的研究中。这些抑制物的例子包括，常规金属肽酶抑制物如O-菲咯啉、金属螯合物如EGTA和EDTA、肽的类似物如使君子酸和β-NAAG等。因此，就存在着鉴定更多的NAALADase抑制物的需要，特别是那些用于治疗前列腺疾病如前列腺癌的NAALADase抑制物。本专利技术的概述本专利技术涉及在动物中治疗癌症、防止肿瘤细胞生长、抑制前列腺肿瘤细胞生长、和抑制NAALADase酶活性的方法，该方法包括使用有效剂量的NAALADase抑制物。优选的NAALADase抑制物包括具有如下通式Ⅰ结构的化合物 其中R1是氢、C1-C9直链或分支的烷基、C2-C9的直链或分支的链烯基、C3-C8的环烷基、C5-C7环链烯基、或Ar1；X是CH2、O、或N；R2是C1-C9直链或分支的烷基、C2-C9的直链或分支的链烯基、C3-C8的环烷基、C5-C7环链烯基、或Ar1，其中所述的烷基、链烯基、环烷基、环链烯基或芳基都可以被羧酸取代或不取代。优选地，通式Ⅰ的化合物是以抑制NAALADase的酶活性或治疗动物的前列腺疾病的有效剂量存在的。本专利技术还涉及抑制动物的NAALADase酶活性的方法，该方法包括将有效剂量的通式Ⅰ的化合物提供给所述的动物。附图的简要说明附图说明图1是条块图，以前列腺癌细胞系LNCAP的生长对各种浓度的NAALADase抑制物使君子酸作图。图1显示了被使君子酸盐处理的LNCAP细胞在7天内的效果。浓度为10nM至1μM的使君子酸盐表现了对LNCAP细胞增殖的剂量依赖型抑制，正如3H胸苷的显著下降所证实。图2是条块图，以前列腺癌细胞系LNCAP的生长对各种浓度的NAALADase抑制物2-(膦酰基甲基)戊二酸作图。图2显示了被2-(膦酰基甲基)戊二酸处理的LNCAP细胞在7天内的效果。浓度为100pM至10nM的2-(膦酰基甲基)戊二酸表现了对LNCAP细胞增殖的剂量依赖型降低，正如3H胸苷的显著下降所证实。图3是曲线图，显示人前列腺肿瘤细胞对每日用2-(膦酰基甲基)戊二酸处理后的反应。开始进行处理之后，个体肿瘤的体积的平均值作为时间的函数作图。误差条代表SEM。用2-(膦酰基甲基)戊二酸处理6周后，在对照组和每日给以药物注射(p=0.04)的动物之间，以及对照组和植入聚合物(p=0.02)的动物之间的统计学偏差都变为显著性。图4是曲线图，显示被注射的动物依据天数的存活百分率。图4表明用2-(膦酰基甲基)戊二酸和聚合物的混合体处理的动物具有比仅仅接受肿瘤内注射2-(膦酰基甲基)戊二酸处理的动物和载体对照组的动物都高的平均存活率。该曲线表明，用聚合物处理的动物有88％在第72天依然存活，而且它们身上的肿瘤很小。图5是曲线图，显示在大鼠灰褐细胞注射后的肿瘤生长。细胞在84天的期间内被注射，采用了不同剂量的2-(膦酰基甲基)戊二酸和载体对照。图5表明肿瘤细胞生长的减慢是2-(膦酰基甲基)戊二酸剂量的函数。图6是曲线图，显示每日接受2-{甲基}戊二酸处理的R3327大鼠前列腺肿瘤的反应。以相对于处理开始时的肿瘤体积所表示的单个肿瘤体积的平均值(V/V0)作为时间的函数来制图。用2-{甲基}戊二酸处理2.5周使对照组和接受每日注射1μg药物(p=0.02)的动物之间的统计学偏差成为显著性。本专利技术的详细叙述定义“化合物3”指的是2-(膦酰基甲基)戊二酸，一种NAALADase抑制物。“抑制”一词，在涉及酶的时候指的是可逆转酶抑制，例如竞争性、不竞争性和非竞争性抑制。竞争性、不竞争性和非竞争性可以是通过抑制物对酶的动力学反应的效果来区分。竞争性抑制是在抑制物以与正常的底物竞争结合位点的方式与酶相结合时发生。抑制物和酶之间的亲和性可以通过抑制物常数Ki来测量，其定义是Ki=[E][I][EI]]]>其中是酶的浓度，是抑制物的浓度，是由酶与抑制物形成的复合体的浓度。除非另有说明，Ki在本文中指的是本专利技术的化合本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种治疗动物的癌症的方法，该方法包括给患有癌症的动物提供有效剂量的ＮＡＡＬＡＤａｓｅ抑制物。

【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员：巴巴拉S斯露舍，保尔F杰克逊，科文L泰斯，凯斯M麦克林，
申请(专利权)人：吉尔福特药业有限公司，
类型：发明
国别省市：US[美国]