血管紧张素原（AGT）iRNA组合物及其使用方法技术

本发明专利技术涉及靶向血管紧张素原(AGT)基因的RNAi剂，例如，双链RNAi剂，以及使用这样的RNAi剂抑制AGT表达的方法和治疗患有AGT相关失调(例如，高血压)的受试者的方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】相关申请的交叉参考本申请要求2014年5月22日提交的美国临时申请No.62/001,731和2014年9月9日提交的美国临时申请No.62/047978的优先权权益。将上述每篇申请的完整内容按引用并入本文中。序列表本申请含有已经以ASCII格式电子提交的序列表并且将其全部按引用并入本文中。2015年5月18日形成的该ASCII拷贝命名为121301-01320_SL.txt并且为318,688字节大小。
技术介绍
肾素-血管紧张素-醛固酮系统(RAAS)在血压调节中起着关键作用。RAAS级联始于肾脏的近肾小球细胞将肾素分泌至循环中。肾素分泌受到几个因素的刺激，包括远端小管中的Na+负荷、β-交感神经刺激和/或降低的肾灌注。血浆中的活性肾素将血管紧张素原(由肝脏产生)分裂成血管紧张素I，其随后通过循环和局部表达的血管紧张素-转化酶(ACE)转化成血管紧张素II。血管紧张素II对RAAS的大部分作用是通过其与血管紧张素II1型受体(AT1R)的结合来发挥的，导致动脉血管收缩、管和肾小球效应，如增强的Na+重吸收或肾小球滤过率的调节。此外，与其他刺激物(如促肾上腺皮质激素、抗-利尿激素、儿茶酚本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种用于抑制细胞中的血管紧张素原(AGT)表达的双链核糖核酸(RNAi)剂，其中所述双链RNAi剂包含形成双链区的正义链和反义链，其中所述正义链包含至少15个与SEQ ID NO:1的核苷酸序列的差异不超过3个核苷酸的连续核苷酸，和所述反义链包含至少15个与SEQ ID NO:2的核苷酸序列的差异不超过3个核苷酸的连续核苷酸，其中所述正义链的基本上全部的核苷酸和所述反义链的基本上全部的核苷酸是修饰的核苷酸，和其中所述正义链与在3’‑末端连接的配体偶联。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2014.05.22 US 62/001,731;2014.09.09 US 62/047,9781.一种用于抑制细胞中的血管紧张素原(AGT)表达的双链核糖核酸(RNAi)剂，其中所述双链RNAi剂包含形成双链区的正义链和反义链，其中所述正义链包含至少15个与SEQIDNO:1的核苷酸序列的差异不超过3个核苷酸的连续核苷酸，和所述反义链包含至少15个与SEQIDNO:2的核苷酸序列的差异不超过3个核苷酸的连续核苷酸，其中所述正义链的基本上全部的核苷酸和所述反义链的基本上全部的核苷酸是修饰的核苷酸，和其中所述正义链与在3’-末端连接的配体偶联。2.一种用于抑制细胞中的血管紧张素原(AGT)表达的双链核糖核酸(RNAi)剂，其中所述双链RNAi剂包含形成双链区的正义链和反义链，其中所述正义链包含至少15个与SEQIDNO:1的核苷酸序列的核苷酸2801-2101；803-843；834-859；803-859；803-875；834-875；847-875；1247-1271；1566-1624；1570-1624；1584-1624；1584-1624；1584-1621；2035-2144；2070-2144；2070-2103；2201-2223；2227-2360；2227-2304；2290-2318；2304-2350；2304-2326；2320-2342；2333-2360；2333-2358；485-503；517-535；560-578；635-653；803-821；814-832；822-840；825-843；834-852；837-855；841-859；855-873；967-985；1247-1265；1248-1266；1249-1267；1251-1269；1253-1271；1566-1584；1570-1588；1572-1590；1574-1592；1584-1602；1587-1605；1591-1609；1592-1610；1595-1613；1601-1619；1602-1620；1605-1623；1729-1747；1738-1756；1739-1757；1741-1769；1767-1785；1810-1828；1827-1845；1880-1989；1892-1914；1894-1914；1894-2012；2035-2053；2046-2064；2057-2075；2070-2088；2072-2090；2078-2096；2078-2107；2078-2011；2080-2098；2081-2099；2081-2104；2081-2011；2082-2100；2084-2102；2084-2011；2090-2108；2100-2118；2111-2129；2124-2142；2125-2143；2167-2185；2179-2197；2201-2219；2202-2220；2203-2221；2204-2222；2227-2245；2230-2248；2234-2252；2244-2264；2255-2273；2266-2284；2268-2286；2270-2288；2279-2297；2281-2299；2283-2301；2284-2302；2285-2303；2286-2304；2288-2306；2290-2308；2291-2309；2291-2311；2291-2318；2291-2315；2292-2310；2294-2312；2296-2314；2299-2317；2304-2322；2304-2329；2306-2324；2307-2325；2309-2327；2309-2329；2309-2342；2309-2350；2309-2358；2314-2332；2316-2334；2317-2335；2320-2338；2321-2339；2323-2341；2325-2343；2326-2344；2328-2346；2329-2347；2331-2349；2333-2351；2334-2352；2335-2353；2339-2357；2340-2358或2341-2359的差异不超过3个核苷酸的连续核苷酸和所述反义链包含至少15个与SEQIDNO:2的核苷酸序列相应位置的核苷酸的差异不超过3个核苷酸的连续核苷酸，和其中所述反义链与所述正义链基本上互补。3.权利要求2的双链RNAi剂，其中所述正义链的基本上全部的核苷酸是修饰的核苷酸，所述反义链的基本上全部的核苷酸是修饰的核苷酸，或所述正义链的基本上全部的核苷酸和所述反义链的基本上全部的核苷酸是修饰的核苷酸。4.权利要求2的双链RNAi剂，其中所述正义链与在3’-末端连接的配体偶联。5.权利要求1-4任一项的双链RNAi剂，其中所述正义链的全部核苷酸和所述反义链的全部核苷酸是修饰的核苷酸。6.权利要求1-4任一项的双链RNAi剂，其中所述正义链和所述反义链包含互补区，其包含至少15个与表3、4、7、8、11、13和15任一个中所列的任一个序列的差异不超过3个核苷酸的连续核苷酸。7.权利要求1和3-6任一项的双链RNAi剂，其中至少一个所述修饰的核苷酸选自3’-末端脱氧-胸腺嘧啶(dT)核苷酸、2’-O-甲基修饰的核苷酸、2’-氟修饰的核苷酸、2’-脱氧-修饰的核苷酸、锁核苷酸、未锁核苷酸、构象限制核苷酸、约束乙基核苷酸、无碱基核苷酸、2’-氨基-修饰的核苷酸、2’-烷基-修饰的核苷酸、吗啉代核苷酸、氨基磷酸酯、包含非天然碱基的核苷酸、包含5’-硫逐磷酸酯基团的核苷酸和连接于胆固醇基衍生物或月桂酸二癸酰胺基团的末端核苷酸。8.权利要求1-7任一项的双链RNAi剂，其中至少一条链包含至少1个核苷酸的3’悬端。9.权利要求1-7任一项的双链RNAi剂，其中至少一条链包含至少2个核苷酸的3’悬端。10.一种抑制细胞中的血管紧张素原(AGT)表达的双链核糖核酸(RNAi)剂，其中所述双链RNAi剂包含形成双链区的正义链和反义链，其中所述反义链包含与编码AGT的mRNA的部分互补的区域，其中每条链为约14至约30个核苷酸长，其中所述双链RNAi剂由式(III)来表示：正义：5'np-Na-(XXX)i-Nb-YYY-Nb-(ZZZ)j-Na-nq3'反义：3'np′-Na′-(X′X′X′)k-Nb′-Y′Y′Y′-Nb′-(Z′Z′Z′)l-Na′-nq′5'(III)其中：i、j、k和l各自独立地为0或1；p、p’、q和q’各自独立地为0-6；每个Na和Na’独立地表示包含0-25个修饰或未修饰的或其组合的核苷酸的寡核苷酸序列，每个序列包含至少两个不同修饰的核苷酸；每个Nb和Nb’独立地表示包含0-10个修饰或未修饰的或其组合的核苷酸的寡核苷酸序列；每个np、np′、nq和nq′，其各自可以存在或不存在，独立地表示悬端核苷酸；XXX、YYY、ZZZ、X′X′X′、Y′Y′Y′和Z′Z′Z′各自独立地表示三个连续核苷酸上三个相同修饰的一个基序；Nb上的修饰不同于Y上的修饰且Nb’上的修饰不同于Y’上的修饰；和其中所述正义链与至少一个配体偶联。11.权利要求10的双链RNAi剂，其中i是0；j是0；i是1；j是1；i和j是0；或i和j是1。12.权利要求10的双链RNAi剂，其中k是0；l是0；k是1；l是1；k和l都是0；或k和l是1。13.权利要求10的双链RNAi剂，其中XXX与X′X′X′互补，YYY与Y′Y′Y′互补，和ZZZ与Z′Z′Z′互补。14.权利要求10的双链RNAi剂，其中YYY基序出现在所述正义链的切割位点处或附近。15.权利要求10的双链RNAi剂，其中Y′Y′Y′基序出现在所述反义链从5′端的11、12和13位置处。16.权利要求15的双链RNAi剂，其中Y’是2’-O-甲基。17.权利要求10的双链RNAi剂，其中式(III)由式(IIIa)来表示：正义：5'np-Na-YYY-Na-nq3'反义：3'np′-Na′-Y′Y′Y′-Na′-nq′5'(IIIa)。18.权利要求10的双链RNAi剂，其中式(III)由式(IIIb)来表示：正义：5'np-Na-YYY-Nb-ZZZ-Na-nq3'反义：3'np′-Na′-Y′Y′Y′-Nb′-Z′Z′Z′-Na′-nq′5'(IIIb)其中每个Nb或Nb′独立地表示包含1-5个修饰的核苷酸的寡核苷酸序列。19.权利要求10的双链RNAi剂，其中式(III)由式(IIIc)来表示：正义：5'np-Na–XXX-Nb-YYY-Na-nq3'反义：3'np′-Na′-X′X′X′-Nb′-Y′Y′Y′-Na′-nq′5'(IIIc)其中每个Nb或Nb′独立地表示包含1-5个修饰的核苷酸的寡核苷酸序列。20.权利要求10的双链RNAi剂，其中式(III)由式(IIId)来表示：正义：5'np-Na–XXX-Nb-YYY-Nb-ZZZ-Na-nq3'反义：3'np′-Na′-X′X′X′-Nb′-Y′Y′Y′-Nb′-Z′Z′Z′-Na′-nq′5'(IIId)其中每个Nb或Nb′独立地表示包含1-5个修饰的核苷酸的寡核苷酸序列和每个Na或Na′独立地表示包含2-10个修饰的核苷酸的寡核苷酸序列。21.权利要求1-4或10任一项的双链RNAi剂，其中所述双链区是15-30个核苷酸对长。22.权利要求21的双链RNAi剂，其中所述双链区是17-23个核苷酸对长。23.权利要求21的双链RNAi剂，其中所述双链区是17-25个核苷酸对长。24.权利要求21的双链RNAi剂，其中所述双链区是23-27个核苷酸对长。25.权利要求21的双链RNAi剂，其中所述双链区是19-21个核苷酸对长。26.权利要求21的双链RNAi剂，其中所述双链区是21-23个核苷酸对长。27.权利要求1-4和10任一项的双链RNAi剂，其中每条链具有15-30个核苷酸。28.权利要求1-4和10任一项的双链RNAi剂，其中每条链具有19-30个核苷酸。29.权利要求10的双链RNAi剂，其中所述核苷酸上的修饰选自LNA、CRN、cEt、UNA、HNA、CeNA、2′-甲氧基乙基、2′-O-烷基、2′-O-烯丙基、2′-C-烯丙基、2′-氟、2′-脱氧、2’-羟基及其组合。30.权利要求29的双链RNAi剂，其中所述核苷酸上的修饰是2′-O-甲基或2’-氟修饰。31.权利要求1、4和10任一项的双链RNAi剂，其中所述配体是通过二价或三价分支接头连接的一个或多个GalNAc衍生物。32.权利要求1、4和10任一项的双链RNAi剂，其中所述配体是33.权利要求1、4和10任一项的双链RNAi剂，其中所述配体连接于所述正义链的3’端。34.权利要求33的双链RNAi剂，其中所述RNAi剂如以下示意图中所示的与所述配体偶联其中X是O或S。35.权利要求1-4和10任一项的双链RNAi剂，其中所述RNAi剂进一步包含至少一个硫逐磷酸酯或甲基膦酸酯核苷酸间连接基团。36.权利要求35的双链RNAi剂，其中所述硫逐磷酸酯或甲基膦酸酯核苷酸间连接基团在一条链的3’-末端。37.权利要求36的双链RNAi剂，其中所述链是反义链。38.权利要求36的双链RNAi剂，其中所述链是正义链。39.权利要求35的双链RNAi剂，其中所述硫逐磷酸酯或甲基膦酸酯核苷酸间连接基团在一条链的5’-末端。40.权利要求39的双链RNAi剂，其中所述链是反义链。41.权利要求39的双链RNAi剂，其中所述链是正义链。42.权利要求35的双链RNAi剂，其中所述硫逐磷酸酯或甲基膦酸酯核苷酸间连接基团同时在一条链的5’-和3’-末端。43.权利要求42的双链RNAi剂，其中所述链是反义链。44.权利要求35的双链RNAi剂，其中所述RNAi剂包含6-8个硫逐磷酸酯核苷酸间连接基团。45.权利要求44的双链RNAi剂，其中所述反义链包含5’-末端的两个硫逐磷酸酯核苷酸间连接基团和3’-末端的两个硫逐磷酸酯核苷酸间连接基团，和所述正义链包含5’-末端或3’-末端的至少两个硫逐磷酸酯核苷酸间连接基团。46.权利要求1-4和10任一项的双链RNAi剂，其中所述反义链5’-端的1位的碱基对是AU碱基对。47.权利要求10的双链RNAi剂，其中所述Y核苷酸含有2’-氟修饰。48.权利要求10的双链RNAi剂，其中所述Y’核苷酸含有2’-O-甲基修饰。49.权利要求10的双链RNAi剂，其中p’>0。50.权利要求10的双链RNAi剂，其中p’＝2。51.权利要求50的双链RNAi剂，其中q’＝0、p＝0、q＝0，且p’个悬端核苷酸与靶mRNA互补。52.权利要求50的双链RNAi剂，其中q’＝0、p＝0、q＝0，且p’个悬端核苷酸与靶mRNA不互补。53.权利要求50的双链RNAi剂，其中所述正义链具有总共21个核苷酸和所述反义链具有总共23个核苷酸。54.权利要求49-53任一项的双链RNAi剂，其中至少一个np’通过硫逐磷酸酯连接基团连接于相邻的核苷酸。55.权利要求54的双链RNAi剂，其中所有np’通过硫逐磷酸酯连接基团连接于相邻的核苷酸。56.权利要求1-4和10任一项的双链RNAi剂，其中所述RNAi剂选自表3、4、7、8、11、13和15任一个中所列的RNAi剂。57.一种用于抑制血管紧张素原(AGT)表达的双链核糖核酸(RNAi)剂，其中所述双链RNAi剂包含形成双链区的正义链和反义链，其中所述正义链包含至少15个与SEQIDNO:1的核苷酸序列的差异不超过3个核苷酸的连续核苷酸和所述反义链包含至少15个与SEQIDNO:2的核苷酸序列的差异不超过3个核苷酸的连续核苷酸，其中所述正义链的基本上全部的核苷酸包含选自2’-O-甲基修饰和2’-氟修饰的修饰，其中所述正义链包含5’-末端的两个硫逐磷酸酯核苷酸间连接基团，其中所述反义链的基本上全部的核苷酸包含选自2’-O-甲基修饰和2’-氟修饰的修饰，其中所述反义链包含5’-末端的两个硫逐磷酸酯核苷酸间连接基团和3’-末端的两个硫逐磷酸酯核苷酸间连接基团，和其中所述正义链在3’-末端与通过分支的二价或三价接头连接的一个或多个GalNAc衍生物偶联。58.权利要求57的双链RNAi剂，其中所述正义链包含至少15个与SEQIDNO:1的核苷酸序列的核苷酸2801-2101；803-843；834-859；803-859；803-875；834-875；847-875；1247-1271；1566-1624；1570-1624；1584-1624；1584-1624；1584-1621；2035-2144；2070-2144；2070-2103；2201-2223；2227-2360；2227-2304；2290-2318；2304-2350；2304-2326；2320-2342；2333-2360；2333-2358；485-503；517-535；560-578；635-653；803-821；814-832；822-840；825-843；834-852；837-855；841-859；855-873；967-985；1247-1265；1248-1266；1249-1267；1251-1269；1253-1271；1566-1584；1570-1588；1572-1590；1574-1592；1584-1602；1587-1605；1591-1609；1592-1610；1595-1613；1601-1619；1602-1620；1605-1623；1729-1747；1738-1756；1739-1757；1741-1769；1767-1785；1810-1828；1827-1845；1880-1989；1892-1914；1894-1914；1894-2012；2035-2053；2046-2064；2057-2075；2070-2088；2072-2090；2078-2096；2078-2107；2078-2011；2080-2098；2081-2099；2081-2104；2081-2011；2082-2100；2084-2102；2084-2011；2090-2108；2100-2118；2111-2129；2124-2142；2125-2143；2167-2185；2179-2197；2201-2219；2202-2220；2203-2221；2204-2222；2227-2245；2230-2248；2234-2252；2244-2264；2255-2273；2266-2284；2268-2286；2270-2288；2279-2297；2281-2299；2283-2301；2284-2302；2285-2303；2286-2304；2288-2306；2290-2308；2291-2309；2291-2311；2291-2318；2291-2315；2292-2310；2294-2312；2296-2314；2299-2317；2304-2322；2304-2329；2306-2324；2307-2325；2309-2327；2309-2329；2309-2342；2309-2350；2309-2358；2314-2332；2316-2334；2317-2335；2320-2338；2321-2339；2323-2341；2325-2343；2326-2344；2328-2346；2329-2347；2331-2349；2333-2351；2334-2352；...

【专利技术属性】
技术研发人员：D·福斯特，B·贝腾考特，K·查里斯，G·辛克尔，S·库奇曼奇，M·迈尔，S·米尔斯泰恩，
申请(专利权)人：阿尔尼拉姆医药品有限公司，
类型：发明
国别省市：美国;US