从紫杉醇粗产品分离纯化紫杉醇的方法技术

一种从紫杉醇粗产品分离纯化紫杉醇的方法，包含下述步骤：　　　　①紫杉醇含量为９～２０％的紫杉醇粗产品为原料样品；　　　　②用大孔吸附树脂作固定相，大孔吸附树脂与样品的重量比为１０比０．９～１．４；　　　　③用能与水混溶的、浓度为４０～７０％极性溶剂水溶液为流动相；　　　　　④用柱层析法分离纯化紫杉醇，样品溶液从大孔吸附树脂的层析柱顶端上样；　　　　⑤流动相洗脱时，层析柱内流出液流速为０．６～１．５升／小时；　　　　⑥按时间分段收集经层析后的流出液，每小时收集１份，至ＨＰＬＣ检测紫杉醇浓度低于０．２毫克／毫升时终止；　　　　⑦流出液中紫杉醇含量小于三尖杉宁碱含量，浓缩干燥得紫杉醇中间产品Ａ；　　　　⑧流出液中紫杉醇含量大于三尖杉宁碱含量，浓缩干燥得紫杉醇中间产品Ｂ。（*该技术在2023年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及植物提取物的分离纯化领域，具体是一种。(二)技术背景紫杉醇是近二十年来世界上发现的最有希望的抗癌药物，对治疗乳腺癌、卵巢癌、食道癌、肺癌、肝癌等癌症均有良好疗效，对癌细胞有极强的杀伤力，而毒副作用极小。因此成为目前药品行业研究的重点。紫杉醇属于二萜类生物碱。最开始是从天然植物红豆杉中提取分离紫杉醇。红豆杉是珍稀物种，天然红豆杉资源极为有限，而且红豆杉生长缓慢，天然红豆杉无法满足紫杉醇生产的需要量。为了开辟紫杉醇的新的来源，人们研究了从人工种植的曼地亚红豆杉中提取分离紫杉醇、红豆杉细胞培养生产紫杉醇及多种生物合成、半合成、全合成紫杉醇工艺。无论采用何种工艺，由于紫杉醇合成率低、成本高，所以紫杉醇价格昂贵。另外从多种结构相近的衍生物、同系物的混合物中分离纯化出紫杉醇药物，特别是紫杉醇与三尖杉宁碱的分离，是很困难的工作。分离纯化过程中收率稍有升降，即意味着珍贵的紫杉醇的得失多少，效益上将有巨大差异。所以如何改进紫杉醇的分离纯化工艺，是目前普遍重视的课题。目前的分离方法主要有硅胶柱层析法、氧化铝柱层析法，纯化方法主要有C18柱层析、氟苯基柱层析等反相层析法和硅胶柱层析正相层析法。有关紫杉醇的分离纯化工艺的专利申请有多件，如加拿大植原药物公司1999年申请的中国专利99815315.X“从含紫杉醇物质生产紫杉醇的高产率提取方法”用丙酮/水沉淀法制备高纯度紫杉醇，复旦大学1998年申请的中国专利“一种清洁纯化紫杉醇的方法”使用填充色谱柱正构烷烃淋洗纯化紫杉醇粗产物，梅县梅雁生物工程研究所2001申请的中国专利“从红豆杉细胞培养液滤液中富集提取紫杉醇的方法”将大孔吸附树脂与试液充分混合进行吸附富集，有机溶剂洗脱被树脂吸附的紫杉醇，浓缩得到高含紫杉醇的浓缩物。现有的分离纯化方法的不足之处在于，紫杉醇一次收率(即从投料开始，经过按顺序的工艺流程，而得到的产出物收得率，以有效成份紫杉醇计算。不包括副产出物的反复投入)仅为70％；而且要使用易燃、易爆或有毒溶剂，如氯仿、二氯甲烷、乙酸乙酯、甲醇、乙腈等，对人体有害，污染环境，生产操作过程危险性高；此外上样量小，一般硅胶柱层析时硅胶与样品的比例为150比0.9～1.0。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种收率高、且生产操作安全的。本专利技术的，包含下述步骤①紫杉醇含量为9～20％的紫杉醇粗产品为原料样品；②用大孔吸附树脂作固定相，大孔吸附树脂与样品的重量比为10比0.9～1.4；③用能与水混溶的、浓度为40～70％极性溶剂水溶液为流动相；④用柱层析法分离纯化紫杉醇，样品溶液从大孔吸附树脂的层析柱顶端上样；⑤流动相洗脱时，层析柱内流出液流速为0.6～1.5升/小时；⑥按时间分段收集经层析后的流出液，每小时收集1份，至HPLC检测紫杉醇浓度低于0.2毫克/毫升时终止，按时间段收集的流出液分为三部分；⑦第I部分流出液中基本无紫杉醇，集中处理，回收溶剂；⑧第II部分流出液中紫杉醇含量小于三尖杉宁碱含量，浓缩干燥得紫杉醇中间产品A；⑨第III部分流出液中紫杉醇含量大于三尖杉宁碱含量，浓缩干燥得紫杉醇中间产品B。本专利技术的优点为1、分离纯化效果好，很方便地将紫杉醇含量为9～20％的紫杉醇粗产品纯化为含紫杉醇40～60％的紫杉醇中间产品；2、收率高，紫杉醇一次性收率高达80％左右；3、操作安全，不使用易燃、易爆或有毒溶剂；4、上样量大，大孔吸附树脂与样品的重量比高达10比0.9～1.5，是一般硅胶柱层析时硅胶上样量的15倍；5、可除去紫杉醇粗产品中的水溶性杂质。具体实施方式实施例1①原料样品中紫杉醇含量为15.6％的紫杉醇粗产品100克，其中紫杉醇净含量15.6克；②紫杉醇样品原料溶于300毫升95％(V/V)极性溶剂乙醇中，然后加水至乙醇浓度为60％(V/V)，样品与乙醇水溶液重量比约为1比5；③大孔吸附树脂AB-8 1000克，与样品的重量比为10比1，装入外径6厘米可充填高度100厘米的玻璃层析柱内；④从大孔吸附树脂的层析柱顶端上样，即将样品溶液倒入层析柱中，调节层析柱出口阀门，控制层析柱内溶液流速为1升/小时；⑤ 按时间分段收集经层析后的流出液，每小时收集1份，至HPLC检测紫杉醇浓度为0.2毫克/毫升时终止；⑥1～4份流出液为第I部分，其中基本无紫杉醇，集中处理，回收溶剂；⑦5～20份流出液为第II部分，其中紫杉醇含量小于三尖杉宁碱含量，浓缩干燥得紫杉醇中间产品A8.35克，其中含紫杉醇37.4％，即紫杉醇净含量为3.12克，占原料中紫杉醇的20％；⑧21～终止的流出液为第III部分，其中紫杉醇含量大于三尖杉宁碱含量，浓缩干燥得紫杉醇中间产品B 18.2克，其中含紫杉醇54.2％，即紫杉醇净含量为9.86克，占原料中紫杉醇的63.2％。紫杉醇中间产品A和B中的紫杉醇净含量共为12.98克，占原料中紫杉醇的83.2％，即紫杉醇的一次性收率为83.2％。紫杉醇中间产品A和B中的紫杉醇净含量平均为48.9％。实施例2使用大孔吸附树脂D101，①～⑥步其它条件与实施例1相同；⑦5～20份流出液为第II部分，其中紫杉醇含量小于三尖杉宁碱含量，浓缩干燥得紫杉醇中间产品A8.55克，其中含紫杉醇38.5％，即紫杉醇净含量为3.29克，占原料中紫杉醇的21.09％；⑧21～终止的流出液为第III部分，其中紫杉醇含量大于三尖杉宁碱含量，浓缩干燥得紫杉醇中间产品B 17.5克，其中含紫杉醇53.5％，即紫杉醇净含量为9.36克，占原料中紫杉醇的60.01％。紫杉醇中间产品A和B中的紫杉醇净含量共为12.65克，占原料中紫杉醇的81.1％，即紫杉醇的一次性收率为81.1％。紫杉醇中间产品A和B中的紫杉醇净含量平均为48.6％。实施例3使用大孔吸附树脂D201，①～⑥步其它条件与实施例1相同；⑦5～20份流出液为第II部分，其中紫杉醇含量小于三尖杉宁碱含量，浓缩干燥得紫杉醇中间产品A8.765克，其中含紫杉醇40.2％，即紫杉醇净含量为3.52克，占原料中紫杉醇的22.57％；⑧21～终止的流出液为第III部分，其中紫杉醇含量大于三尖杉宁碱含量，浓缩干燥得紫杉醇中间产品B 18.5克，其中含紫杉醇50.2％，即紫杉醇净含量为9.19克，占原料中紫杉醇的59.53％。紫杉醇中间产品A和B中的紫杉醇净含量共为12.81克，占原料中紫杉醇的82.1％，即紫杉醇的一次性收率为82.1％。紫杉醇中间产品A和B中的紫杉醇净含量平均为47.0％。实施例4使用大孔吸附树脂AK-9，①～⑥步其它条件与实施例1相同；⑦5～20份流出液为第II部分，其中紫杉醇含量小于三尖杉宁碱含量，浓缩干燥得紫杉醇中间产品A8.60克，其中含紫杉醇37.8％，即紫杉醇净含量为3.25克，占原料中紫杉醇的20.84％；⑧21～终止的流出液为第III部分，其中紫杉醇含量大于三尖杉宁碱含量，浓缩干燥得紫杉醇中间产品B17.4克，其中含紫杉醇51.2％，即紫杉醇净含量为8.91克，占原料中紫杉醇的57.11％。紫杉醇中间产品A和B中的紫杉醇净含量共为12.16克，占原料中紫杉醇的77.9％，即紫杉醇的一次性收率为77.9％。紫杉醇中间产品A和B中的紫杉醇净含量平均为46.8％。实施例5①与实施例1相同；②紫杉醇样品原料溶于2本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：丁志坚，徐位坤，
申请(专利权)人：丁志坚，
类型：发明
国别省市：