从木橘中分离欧前胡素的方法技术

本发明专利技术涉及从木橘中分离欧前胡素的方法，所述欧前胡素是有效的诱导型一氧化氮合酶抑制剂和抗炎候选物。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及从木橘(Aegle marmelos Correa)中分离欧前胡素(imperatorin)的方法，所述欧前胡素是有效的诱导型一氧化氮合酶抑制剂和抗炎候选物。本专利技术还涉及欧前胡素的分离方法，所述欧前胡素是来自新鲜/干木橘果实的成熟/未成熟中果皮的抗首过有效的低分子量呋喃香豆素(furanocoumarin)。本方法的副产品是富含免疫学上重要的植物甾醇的部分，其可用作免疫系统中的靶向特异位点的治疗。欧前胡素属于线性呋喃香豆素族化合物。欧前胡素(9--7H-呋喃并苯并吡喃-7-酮)是苯并-a-吡喃骈香豆素(pyranocoumarin)的呋喃衍生物并且在植物中处于游离态。
技术介绍
木橘是中等大小、细长、有香味的树，高6.0至7.5米，围长90至120厘米，原产于印度次大陆。这种植物的野生生长遍及印度的落叶林以及野生于印度中部和南部的次喜玛拉雅(sub-Himalayan)森林中。其也移植于斯里兰卡、巴基斯坦、孟加拉、缅甸、泰国和大部分东南亚国家。其在北印度语、阿萨姆语和孟加拉语中也被称为Bael(印度枸桔)和Bel，在古吉拉特语中被称为Marwari和Bili，在坦米尔语中被称为Koovalam和Vilvam，在泰卢固语语中被称为Bilvamu和Maredu，在乌尔都语被称为Bel以及在英语中被称为Stone Apple。Aegle属于柑橘亚科Aurantioideae，Clauseneae族和Balsamocitrinae亚族和科(rutaceae)的单型属中的一种。木橘果实直径5.0至7.5厘米，球状、长椭圆梨状，表皮灰色或黄色，果肉甜美，颜色呈深黄色、橙色至棕色。其种子数目众多并且置于粘稠透明的粘液包围的小室中。未成熟的或半成熟的果实被视为收敛剂、消化药和健胃药。所述果实被誉为滑泻和痢疾的有价值的印度草药并作为心脏和大脑的补药。未成熟果实的临床试验显示了其对新城鸡瘟病毒的抗病毒活性、低血糖活性和抗寄生虫的重要效果。使用水稀释并且添加一定量的糖和罗晃子，所述果肉将成为美味的清凉饮料。印度枸桔果实是最富有营养的可食用果实之一，其富含类胡萝卜素、核黄素以及果胶，可用于制备许多产品，例如糖果、果汁饮料、太妃糖、厚片、果肉粉末和果茶等(The Wealth of India，vol.5，1990-94和Compendium of Indian Medicinal Plants，vol.1-5，(1962-1998))。呋喃香豆素(除了最熟知的呋喃香豆素外，也称作呋喃并香豆素(furocoumarin)，有时指的是补骨脂素)是一类广泛存在的酚类化合物，尤其在柑橘属果实中含量丰富。这些化合物在高等植物中是普遍存在的。它们存在于大约15个植物科中，其中伞形科(Umbelliferae)成员是最著名的呋喃香豆素生产者，其次是芸香科(Rutaceae)、桑科(Moraceae)和豆科(Leguminasae)。这些植物的若干种是人类食物的一部分，例如柠檬、芫荽、芹菜、防风草、荷兰芹以及胡萝卜。呋喃香豆素具有除了其有名的光敏化效应以外，还具有诸如止痛、抗炎、抗菌、抗病毒、抗凝血等若干令人关注的生物活性。由白芷(Angelica dahurica)(伞形科)根分离出的欧前胡素被发现可以诱发人体早幼粒细胞白血病HL-60细胞的凋亡。DNA断裂分析、基于形态学的评价以及流式细胞计数分析证明，微摩尔浓度的欧前胡素可以触发HL-60细胞的凋亡(Hyun-Ock等人，Imperatorin，a furanocoumarin from Angelica dahurica(Umbelliferae)，induces cytochrome c-dependent apoptosis in human promyelocyticleukaemia，HL-60 cells(欧前胡素，来自白芷(伞形科)的呋喃香豆素，在人体早幼粒细胞白血病HL-60细胞中诱导细胞色素c依赖的凋亡)；Pharmacology & Toxicology，vol.91，no.1，pp40-48，2002)。使用氮蓝四唑(NBT)法，欧前胡素对HL-60细胞显示出强大活性(Kawa等人，Effectof coumarins on HL-60 cell differentiation(香豆素类对HL-60细胞分化的影响)；Anticancer research，vol.20，No.4，pp 2505-2512，2000)。由中药I.防风(Saposhnikovia divaricata(Turcz)Schischk)分离的欧前胡素是可能的诱导型一氧化氮合酶(iNOS)抑制剂，其对亚硝酸盐产生的抑制的IC50值为17.3μg/ml，它可以用作癌症的化学预防剂(Yang等人，Inducible mitric oxide synthase inhibitor of the Chinese herb I.Saposhnikovia divaricata(Turcz)Schischk(中药I.防风(Turcz)Schischk的诱导型一氧化氮合酶抑制剂；Cancer Letters，vol.145，pp 2505-2512，1999)。欧前胡素是由芫花萜和Radix Angelica dahurica制造的芫花萜止痛胶囊的主要成分(0.66至0.72mg/胶囊)，其被收录于由中华人民共和国卫生部出版的药物标准第八卷(1993)(Wenxiang等人，Determinationof imperatorin in Yuanhu analgesic capsule by RP-HPLC(使用RP-HPLC测定芫花萜止痛胶囊中的欧前胡素)；Chemical Journal on Internet，vol.3，No.11，pp56-59，2001)。因此，开发将来具有潜在治疗和商业用途的有效和经济可行的iNO抑制剂的天然来源是有价值的。欧前胡素广泛分布于植物界，并可以从植物的不同部分(尤其是果实、种子和根)分离出欧前胡素。从王草(Imperatoria osthruthium L.)的根、当归(Angelica archangelia L.)的种子和欧防风(Pastinaca sativa L.)的果实中分离出欧前胡素(The Merck index，XII edition，p4960)。还可以从莳萝(Anethum graveolens)、当归(Angelica archangelia)、茴芹(Anthriscus cerefolium)、旱芹(Apium graveolens)、葛缕子(Carum carvi)、芫荽(Coriandrum sativum)、孜然(Cuminum cminum)、胡萝卜(Daucuscarota)、茴香(Foeniculum vulgare)、独活(Heracleum sphondylium)、欧当归(Levisticum officinale)、欧防风(Pastinaca sativa)、香芹(Petroselinum crispum)和大茴香(Pimpinella anisum)中分离出欧前胡素(Cesk本文档来自技高网...

【技术保护点】
从成熟／未成熟的木橘果实中分离欧前胡素的方法，所述方法包括：（ａ）使用卤代溶剂提取新鲜的／干粉末的果实果肉直接地得到油水混合物或使用一元醇提取新鲜的／干粉末的果实果肉得到醇提取物；（ｂ）真空下浓缩所述提取的醇提取物至其原始体 积的１０至３０％；（ｃ）使用卤代溶剂分配所述浓缩的醇提取物，以将欧前胡素转移至非极性溶剂中；（ｄ）使用无水硫酸钠干燥步骤（ａ）中直接得到的或通过步骤（ｃ）的分配得到的提取的油水混合物并蒸发所述溶剂以得到浓缩物；（ｅ） 溶剂中结晶所述浓缩物并过滤所生成的晶体；（ｆ）浓缩滤液并在硅胶上经减压柱液相色谱处理；（ｇ）在溶剂中洗脱欧前胡素以提供富含植物甾醇的部分和纯欧前胡素；（ｈ）结晶含有纯欧前胡素化合物的所述部分。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：曼加拉高里庞南帕利，马埃瓦里穆拉利达拉恩吉贾，马达姆瓦迪拉詹韦努高帕兰韦卢帕伦布，阿鲁穆汉沙米，
申请(专利权)人：科学与工业研究委员会，
类型：发明
国别省市：IN[印度]