一种从白芷中提取、分离纯化3种香豆素的方法技术

本发明专利技术涉及一种从白芷中提取、分离纯化3种香豆素的方法，是以白芷药材为原料，经过下述步骤：（1）白芷香豆素的提取；（2）白芷香豆素的分离分析；（3）白芷香豆素的分离纯化；（4）化合物的纯度检测及结构鉴定。用半制备型高效液相色谱进行分离纯化，流动相为甲醇-水，得到3种高纯度的成分，经鉴定分别是欧前胡素、氧化欧前胡素和异欧前胡素。本工艺过程绿色环保，对环境无严重危害，综合成本低。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于化工领域，具体是涉及一种从白芷中提取、分离纯化3种香豆素的方 法。
技术介绍
白芷始载于《神农本草经》，性温味辛，具有散风除湿、通窍止痛、消肿排脓的作用， 临床上广泛用于治疗感冒头痛、眉棱骨痛、鼻塞、鼻渊、牙痛、白带和疮疡肿痛等症。此外，白 芷还是各种保健品、化妆品、香料及调味品生产中必不可少的原料。白芷的化学成分复杂， 主要含有香豆素和挥发油。药理研究表明，香豆素为白芷的主要活性成分，其中含量较高的 有欧前胡素、异欧前胡素和氧化前胡素，这三种物质也是白芷及其相关制剂质量控制的主 要指标。据文献报道，分离纯化白芷香豆素的方法主要有反复硅胶柱层析法及高速逆流色 谱法，硅胶柱层析法的操作过程繁琐，回收率较低，经常使用氯仿、苯等毒性较强的有机溶 剂；在高速逆流色谱法中溶剂系统的选择比较困难，缺乏理论指导。因此，建立一种高效快 速的提取、分离纯化白芷香豆素的方法对于深化白芷的药理作用研究及完善质量控制体系 均具有重要的意义。本专利技术提供了一种高效、快速、简便的从白芷中提取、分离纯化3种香 豆素的方法。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种高效、快速、简便的从白芷中提取、分离纯化3种香豆 素的方法。 本专利技术的方案如下： 从白芷中提取、分离纯化3种香豆素的方法，其步骤为： (1)白芷香豆素的提取：将白芷药材粉碎，用有机溶剂进行提取，过滤，提取液经减压浓 缩得粗提物。 (2)白芷香豆素的分离分析：用分析型高效液相色谱仪对粗提物的组成进行分离 分析，色谱柱为C 18柱（250 mmX4.6 mm I.D·，5 μπι)，流动相为甲醇-水（67:33，V/V)，流 速为I. 0 mL/min，检测波长为220 nm，柱温为室温。 (3)白芷香豆素的分离纯化：用半制备型高效液相色谱仪对粗提物中的成分进行 分离纯化，色谱柱为C 18柱（250 mmX25.4mmI.D·，10 μπι)，流动相为甲醇-水（65:35， V/V)，检测波长为220 nm，柱温为室温。根据色谱图手动收集目标组分馏分，减压浓缩除去 溶剂。 (4)化合物的纯度检测及结构鉴定：将每一个目标组分馏分经减压浓缩后用甲醇 溶解，其纯度用高效液相色谱法进行检测，色谱条件见步骤（2)，分析结果表明3种化合物 的纯度都达到了 98%以上。经核磁共振波谱分析3种化合物分别是欧前胡素、氧化前胡素 和异欧前胡素。 前面所述的方法，优选的方案是，步骤（1)提取方法为冷浸、超声和加热回流(优选 加热回流)。 前面所述的方法，优选的方案是，步骤（1)提取溶剂为甲醇、无水乙醇、石油醚和乙 酸乙酯(优选石油醚)。 前面所述的方法，优选的方案是，步骤（1)提取时溶剂的用量为6-12倍量(优选10 倍量)。 前面所述的方法，优选的方案是，步骤（1)提取次数为2-5次(优选3次)。 前面所述的方法，优选的方案是，步骤（1)提取时间为1-3小时(优选2小时)。 前面所述的方法，优选的方案是，步骤（2 )高效液相色谱分离分析所用甲醇的浓度 为 65%-70% (优选 67%)。 前面所述的方法，优选的方案是，步骤（3)半制备型高效液相色谱分离纯化所用甲 醇的浓度分别为62%-68% (优选65%)。 前面所述的方法，优选的方案是，步骤（3)分离纯化用甲醇-水溶液进行洗脱，洗 脱液的流速为20-30 mL/min (优选25 mL/min)。 本专利技术涉及，步骤为：（1)白芷香 豆素的提取：将白芷药材粉碎，用有机溶剂进行提取，过滤，提取液经减压浓缩得粗提物。 (2)白芷香豆素的分离分析：用分析型高效液相色谱仪对粗提物的组成进行分离分析，色谱 柱为(：18柱（250 11111^4.6 1111111.0.，5 4111)，流动相为甲醇-水（67:33，￥八〇;流速为1.0 mL/min，检测波长为220 nm，柱温为室温。（3)白芷香豆素的分离纯化：用半制备型高效液 相色谱仪对粗提物中的成分进行分离纯化，色谱柱为C18柱（250 mmX25. 4 mm I.D·，10 μπι)，流动相为甲醇-水（65 :35，V/V)，检测波长为220 nm，柱温为室温。根据色谱图手动收 集目标组分馏分，减压浓缩除去溶剂。（4)化合物的纯度检测及结构鉴定：将每一个目标组 分馏分减压浓缩后用甲醇溶解，其纯度用高效液相色谱法进行检测，色谱条件见步骤（2)， 分析结果表明3种化合物的纯度都达到了 98%以上。经核磁共振波谱分析3种化合物分别 是欧前胡素、氧化前胡素和异欧前胡素。该工艺过程绿色环保，对环境无严重危害，综合成 本低。 本专利技术从白芷中提取、分离纯化3种香豆素，首先用石油醚加热回流将香豆素类 成分提取出来，可以使强极性成分不被溶出；接下来用分析型高效液相色谱仪对提取物的 组成进行分离分析；然后，用半制备型高效液相色谱仪对提取物中的成分进行分离纯化就 可以得到3种化合物；最后，用高效液相色谱法对化合物的纯度进行测定，根据核磁共振波 谱分析对化合物的结构进行鉴定。该方法所得目标化合物纯度高，杂质含量极低，这一点可 从图3至图5中看出。除此之外，还具有如下优势： (1)用石油醚加热回流对白芷中香豆素类成分进行提取是利用了"相似相溶"的原理， 白芷香豆素的极性很弱，因此在石油醚中的溶解度最大，温度升高，溶解度增大。因此，用 石油醚加热回流提取可以使白芷香豆素最大程度溶出，而水溶性杂质尽量不被溶出。不仅 提高了提取效率，而且可以使粗提物尽可能纯净，最大限度降低了制备型C 18柱被污染的程 度。 (2)用高效液相色谱法对白芷粗提物的组成进行分离分析，用甲醇-水作流动相 等度洗脱可以在短时间内对3种目标化合物实现基线分离。 (3)用半制备型高效液相色谱法对化合物进行分离纯化，可以得到3种高纯度单 体化合物，方法操作简单，效率高，工艺周期短，节省试剂，降低了生产成本。 (4)用高效液相色谱法对制备所得化合物的纯度进行测定，该方法准确、快速。 (5)提取、分离、纯化过程中仅用到石油醚、甲醇和水，不使用对环境和人体危害大 的氯仿、苯等有机溶剂，石油醚提取液、甲醇-水洗脱液经减压蒸馏回收后可以重复使用多 次，绿色环保。 (6)优化了层析方法的条件(洗脱液的组成和流速)，使化合物的纯度和效率都大 为提尚。【附图说明】 图1是白芷粗提物的分析型高效液相色谱图。 图2是白芷粗提物的半制备型高效液相色谱图。 图3是欧前胡素的高效液相色谱图及紫外光谱图。 图4是氧化欧前胡素的高效液相色谱图及紫外光谱图。 图5是异欧前胡素的高效液相色谱图及紫外光谱图。 在图1-5中，I :欧前胡素；II :氧化欧前胡素；III :异欧前胡素。【具体实施方式】 下面结合实施例和附图详细说明本专利技术的技术方案，但保护范围不被此限制。实 施例中所用设备或原料皆可从市场获得。所用试剂均购自济南试剂总厂，所用水为去离子 水。 实施例：从白芷中提取、分离纯化3种香豆素的方法，其步骤为： (1)白芷香豆素的提取：将白芷药材粉碎，用10倍量石油醚加热提取3次，每次2 h，过 滤，将提取液合并，减压浓缩得粗提物。 (2)白芷香豆素的分离分析：用分析型高效液相色谱仪对粗提物的组成进行分离 分析，色谱柱为C 18柱（250 mmX4.6 本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种从白芷中提取、分离纯化3种香豆素的方法,其特征是，步骤为：（1）白芷香豆素的提取：将白芷药材粉碎，用有机溶剂进行提取，过滤，提取液经减压浓缩得粗提物；（2）白芷香豆素的分离分析：用分析型高效液相色谱仪对粗提物的组成进行分离分析，色谱柱为C18柱（250 mm×4.6 mm I.D., 5 μm），流动相为甲醇‑水（67：33，V/V）；流速为1.0 mL/min，检测波长为220 nm，柱温为室温；（3）白芷香豆素的分离纯化：用半制备型高效液相色谱仪对粗提物中的成分进行分离纯化，色谱柱为C18柱（250 mm×25.4 mm I.D., 10 μm），流动相为甲醇‑水（65：35，V/V），检测波长为220 nm，柱温为室温；根据色谱图手动收集目标组分馏分，减压浓缩除去溶剂；（4）化合物的纯度检测及结构鉴定：将每一个目标组分馏分减压浓缩后用甲醇溶解，其纯度用高效液相色谱法进行检测，色谱条件见步骤（2），分析结果表明3种化合物的纯度都达到了98%以上；经核磁共振波谱分析3种化合物分别是欧前胡素、氧化前胡素和异欧前胡素。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：李爱峰，于琳琳，柳仁民，孙爱玲，
申请(专利权)人：聊城大学，
类型：发明
国别省市：山东;37