一种治疗乳腺癌的CAR‑T细胞制剂的制备方法技术

本发明专利技术公开了一种治疗乳腺癌的CAR‑T细胞制剂的制备方法，包括以下步骤：S1，抽取患者自身的血液，分离出T细胞，选取1‑3mm3的T细胞，放入离心管中，加入1mg/ml的胶原酶浸润，在36‑38℃消化2‑4小时；S2，向S1中离心管加入D‑Hank’s平衡盐溶液冲洗细胞2‑6次，离心力200‑400g，持续6‑8min，获得混合液；S3，将混合液放在培养皿中，并将培养皿放入培养箱内，培养箱内的温度为36‑38℃，含有5‑7％的CO2，扩增培养；S4，将慢病毒对S3中培养所得T细胞进行转染并扩增培养，获得CAR‑T细胞；S5，将S4中制备的CAR‑T细胞与人血白蛋白以1：1‑2的比例混匀。本发明专利技术成分明确，制作简便，有效降低乳腺癌患者的复发和提高治疗效果，为CAR‑T细胞的临床推广应用提供了更便捷的方法。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及生物
，尤其涉及一种治疗乳腺癌的CAR-T细胞制剂的制备方法。
技术介绍
在肿瘤免疫治疗方法中，过继性免疫效应细胞治疗因具有众多的优点而受到人们的重视。嵌合抗原受体修饰T细胞(CAR-T)作为过继免疫细胞治疗的新领域更是成为研究热点。癌症病人因放、化疗导致的免疫系统功能低下，是导致病情复发的重要原因，也是困扰医学界的一大难题。CAR-T细胞疗法则是一种全新的生物免疫治疗方法，通过提取患者体内T淋巴细胞，经过体外10至14天的培养改造，通过载体整合进入到正常T细胞基因序列，形成嵌合抗原受体T细胞(CAR-T)。被重新编码的T细胞就能获得特异性识别和攻击杀伤肿瘤细胞的能力，能精确杀伤肿瘤细胞，但又不会伤及正常细胞。由于是诱导、激活自体细胞，因此该疗法没有通常放、化疗的毒副反应，也没有传统治疗中出现的耐药性。CAR-T细胞是由单克隆抗体的单链可变区和T细胞信号传导区连接而成，抗体与相应的肿瘤抗原结合后能以主要组织相容性复合体以非限制性方式使T细胞活化，进而发挥抗肿瘤效应。CAR的结构分为：胞外抗原结合区、铰链区、跨膜区和胞内信号区。目标抗原的选择对于CAR的特异性、有本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种治疗乳腺癌的CAR‑T细胞制剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：S1，抽取患者自身的血液，分离出T细胞，选取1‑3mm3的T细胞，放入离心管中，加入1mg/ml的胶原酶浸润，在36‑38℃消化2‑4小时；S2，向S1中离心管加入D‑Hank’s平衡盐溶液冲洗细胞2‑6次，离心力200‑400g，持续6‑8min，获得混合液；S3，将混合液放在培养皿中，并将培养皿放入培养箱内，培养箱内的温度为36‑38℃，含有5‑7％的CO2，扩增培养；S4，将慢病毒对S3中培养所得T细胞进行转染并扩增培养，获得CAR‑T细胞；S5，将S4中制备的CAR‑T细胞与人血白蛋白以1：1‑2的比例混匀，并加入...

【技术特征摘要】
1.一种治疗乳腺癌的CAR-T细胞制剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：S1，抽取患者自身的血液，分离出T细胞，选取1-3mm3的T细胞，放入离心管中，加入1mg/ml的胶原酶浸润，在36-38℃消化2-4小时；S2，向S1中离心管加入D-Hank’s平衡盐溶液冲洗细胞2-6次，离心力200-400g，持续6-8min，获得混合液；S3，将混合液放在培养皿中，并将培养皿放入培养箱内，培养箱内的温度为36-38℃，含有5-7％的CO2，扩增培养；S4，将慢病毒对S3中培养所得T细胞进行转染并扩增培养，获得CAR-T细胞；S5，将S4中制备的CAR-T细胞与人血白蛋白以1：1-2的比例混匀，并加入生理盐水，制成可以治疗乳腺癌的CAR-T细胞制剂。2.根据权利要求1所述的一种治疗乳腺癌的CAR-T细胞制剂的制备方法，其特征在于，所述S1，抽取患者自身的血液，选取2mm3的血液放入离心管中，加入1mg/ml的胶原酶浸润，在37℃消化3小...

【专利技术属性】
技术研发人员：张同存，胡广，顾潮江，柳浥时，
申请(专利权)人：武汉波睿达生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：湖北;42