一种吡噻菌胺残留量的GC-EI-MS快速测定方法技术

本发明专利技术公开了一种吡噻菌胺残留量的GC-EI-MS快速测定方法，该方法主要用于测定脂肪含量高的动物源性食品中残留的吡噻菌胺含量的方法。用乙腈均质提取样品中残留的吡噻菌胺，提取液经增强型脂质去除产品（Enhanced Matrix Removal，EMR）基质分散净化、反萃管萃取浓缩后，气相色谱-电子轰击离子源-质谱（GC-EI-MS）检测，采用不含待测农药的空白基质溶液建立校正的标准工作曲线，外标法定量。本方法平均回收率为92.7%～93.4%，平均相对标准偏差（RSD）为4.9%～7.6%，检出限低于4.38 μg/kg，具有操作简便、快速、去杂效果好、灵敏度高、特征性强、重复性好、定性定量准确的优点。能满足美国、欧盟、日本等国家对相应产品安全检测的技术要求，为保障我国人民食品安全及对外出口贸易健康发展提供有力的技术支撑。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种吡噻菌胺残留量的GC-EI-MS快速测定方法，更具体地说是采用气相色谱-电子轰击离子源-质谱(GC-EI-MS)定性定量测定猪肉、牛肉、羊肉、鸡肉等动物肌肉及制品等脂肪含量高的动物源性食品中残留的吡噻菌胺含量的方法，属于农药残留量的测定

技术介绍
吡噻菌胺(Penthiopyrad)是日本三井化学公司研发的新颖酰胺类杀菌剂，英文通用名为penthiopyrad，试验代号：MTF-753，商品名为Afetofluapro。CAS登录号：183675-82-3，化学名称为(RS)-N-[2-(1,3-二甲基丁基)-3-噻吩基]-甲基-3-(三氟甲基)-1H-吡唑-4-甲酰胺，化学结构式为：吡噻菌胺与现有的羧酰胺类杀菌剂有不同的杀菌谱，除了与现有羧酰胺类杀菌剂一样对担子菌有效外，其对子囊菌、不完全菌亦有效，现被推荐用于防治对其他杀菌剂具抗性的灰霉病和白粉病。该药剂通常使用的有效成分剂量为100～200g/hm2，其被广泛应用于果树、蔬菜、草坪等众多作物，防治锈病、菌核病、灰霉病、霜霉病、苹果黑星病和白粉病。Penthiopyrad于2008年在日本获得首次批准，用于果树、蔬菜和观赏植物，后又于2011年11月在加拿大获准登记。商标名为Vertisan和Fontelis(均以penthiopyrad200g/L为其活性成分)和Treoris(penthiopyrad100g/L+chlorothalonil(百菌清)250g/L)的3个产品主要用在果树、蔬菜和田间作物上，在实际应用发现吡噻菌胺具有很广阔的应用前景。随着吡噻菌胺的登记、推广和使用，作为我国主要出口市场的欧盟、加拿大和澳大利亚等国家制定了其在蔬菜、水果、粮谷和畜产品等食品农产品中的最大允许残留量(MRL)，加拿大规定吡噻菌胺在果蔬、坚果、粮谷及畜产品等动物源性食品中的MRL为0.01～30mg/kg；澳大利亚规定吡噻菌胺在果蔬、坚果、粮谷及畜产品等动物源性食品中的MRL为0.01～5mg/kg；欧盟规定吡噻菌胺在果蔬、坚果、粮谷及畜产品等动物源性食品中的MRL为0.01～30mg/kg；欧盟、日本等国家规定若田间使用农药没有在该国家登记，没有制定相应的残留限量标准时，出口至其国家的食品农产品包括畜禽肉等动物源性食品中残留限量均实行0.01mg/L的“一律标准”。现阶段，对吡噻菌胺残留量测定方法的研究较少，报道的检测方法主要为蔬菜和水果中吡噻菌胺残留检测方法，这些检测方法均采用液相色谱串联质谱(LC-MS/MS)测定蔬菜和水果中吡噻菌胺残留量的检测方法，使用LC-MS/MS测定食品农产品中农药残留具有快速、简便、灵敏度高等优点，但由于其价格较昂贵，很多检测机构、企业或科研院所未配置该仪器或配置台数较少，由于不同的化合物采用LC-MS/MS检测时，需使用不同的流动相或色谱柱，这样需要不断更换色谱柱、流动相并耗费比较长的时间对系统进行平衡，这一定程度上制约了LC-MS/MS的应用。配备电子轰击电离源的气相色谱质谱(GC-EI-MS)分析食品农产品中农药残留具有很大优势，由于电子轰击电离源质谱为通用性检测器，可实现几百种农药的多残留分析，可同时定性和定量，价格适中，因此现各种检测机构和企业均配备气相色谱-电子轰击离子源-质谱仪(GC-EI-MS)对食品农产品中的农药残留进行检测，但迄今为止未见食品农产品中吡噻菌胺残留量的GC-EI-MS检测方法的报道。另外，众所周知，QuEChERS前处理技术已成为农药残留分析中应用最广的样品前处理方法，但QuEChERS方法主要适用于低脂肪含量的高含水基质，如大部分的水果蔬菜，在面对高脂肪含量基质时能力有限，一般需要增加正己烷除脂、冷冻样品提取液去脂等步骤，但效果有限。近年来有些公司推出了增强型脂质去除专利产品-EnhancedMatrixRemoval，EMR-lipid，主要用于去除具有直链烃类结构的脂类干扰物，包括游离脂肪酸、胆固醇、甘油三酯、磷脂等。该产品已被制成基质固相分散萃取剂，经水活化后可直接通过分散固相萃取流程对提取液中的脂类杂质进行去除，本专利技术应用该前处理方法净化动物源性食品时发现，该方法简单高效、对脂类物质去除效果好，建立EMR基质分散净化、气相色谱-电子轰击离子源-质谱(GC-EI-MS)定性和定量分析动物源性食品中吡噻菌胺残留量的检测方法具有重要意义。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种吡噻菌胺残留量的GC-EI-MS快速测定方法，主要用于测定动物源性食品等脂肪含量高的食品农产品中吡噻菌胺残留量。为实现以上目的，本专利技术所采用的技术方案是：一种吡噻菌胺残留量的GC-EI-MS快速测定方法，包括如下步骤：(1)提取称取混匀样品于具塞离心管中，加入适量水复苏后，定量加入乙腈溶液均质提取，然后加入氯化钠和无水硫酸镁，剧烈涡旋1min后离心。净化将增强型脂质去除产品EMR用水活化，移取样品提取液于活化好的EMR净化管中，涡旋1min后，7000r/min离心5min，转移全部上清液至装有无水硫酸镁和氯化钠的离心管中进行盐析，涡旋离心后，移取一定体积的上清液，浓缩至干后，用体积比为1/1的丙酮/正己烷混合溶剂溶解定容，过膜后，待气相色谱-电子轰击离子源-质谱(GC-EI-MS)检测。(3)标准工作溶液的配制将不含吡噻菌胺的同种类基质空白样品按上述步骤(1)、(2)处理，得样品提取净化残渣，加入适量溶剂和标准溶液，涡旋混匀，配制成至少3个浓度的吡噻菌胺系列标准工作液。(4)测定和结果计算将步骤(3)中的各浓度梯度的标准工作液进行GC-EI-MS测定，以标准工作液的色谱峰面积对其相应浓度进行回归分析，得到基质标准工作曲线；在相同条件下将步骤(2)中净化后的样品液注入GC-EI-MS进行测定，测得样品液中吡噻菌胺的色谱峰面积，代入基质标准工作曲线，得到样品液中吡噻菌胺含量，然后根据样品液所代表试样的质量计算得到样品中吡噻菌胺残留量；若上机溶液中吡噻菌胺残留量超过线性范围上限，需用定容溶剂将上机溶液浓度稀释至线性范围之内。步骤(1)中样品若为动物肝脏等含水量较少的样品，提取前须加适量水充分浸润。步骤(4)中气相色谱条件为：色谱柱：HP-5MS毛细管色谱柱，柱长30m，内径0.25mm，膜厚0.25μm；进样口温度250℃；载气：He，不分流模式进样，进样量：1μL；恒流模式，流速1.0mL/min；升温程序：初温60℃保持2min，以每分钟20℃的速度升至200℃，然...

【技术保护点】
一种吡噻菌胺残留量的GC‑EI‑MS快速测定方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：(1)提取称取混匀样品于具塞离心管中，加适量水后，加入乙腈溶液均质提取后，加入氯化钠和无水硫酸镁，剧烈涡旋1min后离心；(2)净化将增强型脂质去除产品EMR用水活化，移取样品提取液于活化好的EMR净化管中，涡旋1min后，7000r/min离心5min，转移全部上清液至装有无水硫酸镁和氯化钠的离心管中进行盐析，涡旋离心后，移取一定体积的上清液，浓缩至干后，用体积比为1/1的丙酮/正己烷混合溶剂溶解定容，过膜后，待气相色谱‑电子轰击离子源‑质谱(GC‑EI‑MS)检测；(3)标准工作溶液的配制将不含吡噻菌胺的同种类基质空白样品按上述步骤(1)、(2)处理，得样品提取净化残渣，加入适量溶剂和标准溶液，涡旋混匀，配制成至少3个浓度的吡噻菌胺系列标准工作液；(4)测定和结果计算将步骤(3)中的各浓度梯度的标准工作液进行GC‑EI‑MS测定，以标准工作液的色谱峰面积对其相应浓度进行回归分析，得到基质标准工作曲线；在相同条件下将步骤(2)中净化后的样品液注入GC‑EI‑MS进行测定，测得样品液中吡噻菌胺的色谱峰面积，代入基质标准工作曲线，得到样品液中吡噻菌胺含量，然后根据样品液所代表试样的质量计算得到样品中吡噻菌胺残留量；若上机溶液中吡噻菌胺残留量超过线性范围上限，需用定容溶剂将上机溶液浓度稀释至线性范围之内。...

【技术特征摘要】
1.一种吡噻菌胺残留量的GC-EI-MS快速测定方法，其特征在于，所述方法包括以下步
骤：
(1)提取
称取混匀样品于具塞离心管中，加适量水后，加入乙腈溶液均质提取后，加入氯化钠和
无水硫酸镁，剧烈涡旋1min后离心；
(2)净化
将增强型脂质去除产品EMR用水活化，移取样品提取液于活化好的EMR净化管中，涡旋
1min后，7000r/min离心5min，转移全部上清液至装有无水硫酸镁和氯化钠的离心管中进行
盐析，涡旋离心后，移取一定体积的上清液，浓缩至干后，用体积比为1/1的丙酮/正己烷混合
溶剂溶解定容，过膜后，待气相色谱-电子轰击离子源-质谱(GC-EI-MS)检测；
(3)标准工作溶液的配制
将不含吡噻菌胺的同种类基质空白样品按上述步骤(1)、(2)处理，得样品提取净化
残渣，加入适量溶剂和标准溶液，涡旋混匀，配制成至少3个浓度的吡噻菌胺系列标准工作液；
(4)测定和结果计算
将步骤(3)中的各浓度梯度的标准工作液进行GC-EI-MS测定，以标准工作液的色谱峰
面积对其相应浓度进行回归分析，得到基质标准工作曲线；在相同条件下将步骤(2)中净化
后的样品液注入GC-EI-MS进行测定，测得样品液中吡噻菌...

【专利技术属性】
技术研发人员：郭庆龙，
申请(专利权)人：郭庆龙，
类型：发明
国别省市：山东;37