莫哈韦芽孢杆菌的生产方法技术

本发明专利技术涉及莫哈韦芽孢杆菌的生产方法，尤其是涉及用于提高莫哈韦芽孢杆菌的生产率的方法，更详细地涉及可大量提供莫哈韦芽孢杆菌的方法，其特征在于，包括：在胰蛋白酶大豆肉汤(TSB，Trytic Soy Broth)培养基中振荡培养莫哈韦芽孢杆菌KJS‑3菌株(B.mojavensis KJS‑3KCCM10961P)来进行种子培养的步骤；将进行了种子培养的上述莫哈韦芽孢杆菌KJS‑3菌株接种于工业用培养基的步骤；以及在37℃～48℃温度下，将接种的上述莫哈韦芽孢杆菌KJS‑3菌株的pH调节为6.8～7.2，并在好氧条件下进行培养的步骤。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及莫哈韦芽孢杆菌的生产方法，尤其涉及用于提高莫哈韦芽孢杆菌的生产率的方法，更详细地涉及高温培养莫哈韦芽孢杆菌，来增加菌株的活性芽胞数的生产率，从而可大量提供莫哈韦芽孢杆菌的方法。
技术介绍
莫哈韦芽孢杆菌(Bacillusmojavensis)作为1994年在莫哈维沙漠最初分离鉴定的菌株，证明为与解淀粉芽孢杆菌(Bacillusamyloliquefaciens)、萎缩芽胞杆菌(Bacillusatrophaeus)、枯草芽孢杆菌枯草亚种(Bacillussubtilis)类似的菌株(InternationalJournalofsystematicBacteriologyVol.44,p256-264)。据论文报告，1996年，莫哈韦芽孢杆菌(Bacillusmojavensis)生存为植物体内生物，并具有抗霉菌作用(EnvironmentalHealthPerspectives,Vol.109,p325-332)。并且，Bacon，C.W.等，1996年证明为莫哈韦芽孢杆菌作用为减少植物体内积累霉菌毒素(mycotoxin)的植物内生物(CanadianJournalBotany,Vol.74,p1195～1202)，在2002年证明为可促进植物生长，并生存为植物内生物(BiologicalControl,Vol.23,p274～284)，在2007年报告，在接种禾谷镰刀菌(Fusariumgraminearum)的植物中，莫哈韦芽孢杆菌起到抑制作用，从而正常进行植物的生长(BiocontrolScienceandTechnology,Vol.17,p81～94)。最近，发表结果称作为莫哈韦芽孢杆菌(Bacillusmojavensis)生产的第二代谢产物的cyclolipopeptied具有抗菌性物质(J.Agric.Food.Chem.,2009,Vol.57,p4287～4292)。并且，最近，本专利技术人等曾发表促进植物生长的作用相关结果(JournalofLifeScience2014Vol.24.No.12.1308～1315)。并且，本专利技术人在韩国专利局曾登录具有抗菌活性及抗真菌活性的新的菌株莫哈韦芽孢杆菌KJS-3的专利(韩国特许登录10-1074878，2011年10月12日)。并且，根据韩国特许登录(10-0380626)，可通过脱氧核糖核酸促旋酶类型A(DNAgyrasetypeA)的基因分析，与萎缩芽胞杆菌(Bacillusatrophaeus)、地衣芽孢杆菌(Bacilluslicheniformis)、莫哈韦芽孢杆菌(Bacillusmojavensis)、枯草芽孢杆菌枯草亚种(Bacillussubtillissubsp.Subtillis)、芽孢杆菌枯草亚种(Bacillussubstilissubsp.Spizizenii)等有效区分。另一方面，作为微生物发酵的问题，由于长时间进行培养操作，杂菌污染的危险性大，且菌株有可能变异或退化，由于反应速度比化学反应慢，因而利益不大，生产物的浓度低，分离生产物时使用的费用高，从而在莫哈韦芽孢杆菌的培养方面，也需要解决上述问题。现有技术文献专利文献非专利文献非专利文献0001：InternationalJournalofsystematicBacteriologyVol.44,256-264页非专利文献0002：EnvironmentalHealthPerspectives,Vol.109,325～332页非专利文献0003：CanadianJournalBotany,Vol.74,1195～1202页非专利文献0004：BiologicalControl,Vol.23,274～284页非专利文献0005：BiocontrolScienceandTechnology,Vol.17,81～94页非专利文献0006：J.Agric.Food.Chem.,2009,Vol.57,4287～4292页
技术实现思路
本专利技术用于解决如上所述的现有问题，其目的如下。本专利技术的目的在于，提供莫哈韦芽孢杆菌的高温培养方法，来增加菌株的培养数，并使活性芽胞数维持高浓度，从而划时代地增加生产率。并且，本专利技术的目的在于，缩短莫哈韦芽孢杆菌的培养时间，来防止污染可能性和长时间培养导致的菌株的变异，从而提高其经济价值。用于达成上述目的的本专利技术通过以下解决方法来实现。本专利技术的莫哈韦芽孢杆菌(Bacillusmojavensis)的生产方法的特征在于，其包括：在胰蛋白酶大豆肉汤(TSB，TryticSoyBroth)培养基中振荡培养莫哈韦芽孢杆菌KJS-3菌株(B.mojavensisKJS-3KCCM10961P)来进行种子培养的步骤；将进行了种子培养的上述莫哈韦芽孢杆菌KJS-3菌株接种于工业用培养基的步骤；以及在37℃～48℃温度下，将接种的上述莫哈韦芽孢杆菌KJS-3菌株的pH调节为6.8～7.2，并在好氧条件下进行培养的步骤。本专利技术的特征在于，上述工业用培养基包含1～5重量份的玉米淀粉、l～3重量份的酵母提取物、0.05～0.5重量份的磷酸一钾、0.05～0.5重量份的磷酸二钾、0.05～0.5重量份的二水氯化钙、0.01～0.1重量份的氯化钠、0.01～0.1重量份的七水硫酸镁、0.001～0.01重量份的一水硫酸锰及0.01～0.1重量份的二水氯化钙，并且，上述温度优选为45℃。本专利技术的特征在于，在上述工业用培养基中，作为抑制莫哈韦芽孢杆菌(Bacillusmojavensis)的生长的因子还放入葡萄糖、磷酸、镁、锰、钙及硅。本专利技术根据上述的本结构具有如下效果。本专利技术提供莫哈韦芽孢杆菌的高温培养方法，增加菌株的培养数，并使活性芽胞数维持高浓度，从而划时代地提高生产率，并且，缩短莫哈韦芽孢杆菌的培养时间，来防止污染可能性和长时间培养导致的菌株的变异，从而提高其经济价值。附图说明图1为表示对莫哈韦芽孢杆菌生长的硅(Si4+)及磷酸(PO42+)的影响的图表。图2为表示对莫哈韦芽孢杆菌生长的Mn2+的影响的图表。图3为表示对莫哈韦芽孢杆菌生长的铝(Al3+)、钙(Ca2+)、镁(Mg2+)的影响的图表。具体实施方式至今，本专利技术的莫哈韦芽孢杆菌未试图通过高温培养法来进行培养。但是，本专利技术人发现通过高温培养莫哈韦芽孢杆菌，增加菌株的培养数，并使活性芽胞数维持高浓度，因而划时代地增加生产率。并且，由于缩短培养时间，可防止污染可能性和长时间培养导致的菌株的变异，从而经济价值高。即，本专利技术中，分别在37℃、40℃、42℃、45℃、50℃温度中进行培养，并比较了不同温度中的结果，确认了微生物在45℃高温中，莫哈韦芽孢杆菌的生长速度最快。并且，微生物发酵的问题如下：因长时间进行培养操作，杂菌污染的危险性大，有可能发生菌株的变异或退化，与化学反应相比，反应速度慢，从而利益不高，由于生产物的浓度低，分离生产物的费用高等，且莫哈韦芽孢杆菌可进行高温发酵，因而污染菌不能在高温条件下生长，从而降低污染的可能性，在高温中，菌快速生长，从而缩短培养时间，从而可减少污染的可能性。用于本专利技术的莫哈韦芽孢杆菌的高温培养的培养基可使用碳源、本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种莫哈韦芽孢杆菌的生产方法，其特征在于，包括：在胰蛋白酶大豆肉汤培养基中振荡培养莫哈韦芽孢杆菌KJS‑3菌株来进行种子培养的步骤；将进行了种子培养的上述莫哈韦芽孢杆菌KJS‑3菌株接种于工业用培养基的步骤；以及在37℃～48℃温度下，将接种的上述莫哈韦芽孢杆菌KJS‑3菌株的pH调节为6.8～7.2，并在好氧条件下进行培养的步骤。

【技术特征摘要】
2015.09.02 KR 10-2015-01243411.一种莫哈韦芽孢杆菌的生产方法，其特征在于，包括：在胰蛋白酶大豆肉汤培养基中振荡培养莫哈韦芽孢杆菌KJS-3菌株来进行种子培养的步骤；将进行了种子培养的上述莫哈韦芽孢杆菌KJS-3菌株接种于工业用培养基的步骤；以及在37℃～48℃温度下，将接种的上述莫哈韦芽孢杆菌KJS-3菌株的pH调节为6.8～7.2，并在好氧条件下进行培养的步骤。2.根据权利要求1所述的莫哈韦芽孢杆菌的生产方法，其特征在于，上述工业用培养基包含1～5重量份的玉米淀粉、l～3重量份的酵母提取物、...

【专利技术属性】
技术研发人员：姜在璿，刘杰，欧黎虹，
申请(专利权)人：武汉虹睿生物科技开发有限公司，庆星大学产学协力团，
类型：发明
国别省市：湖北;42