利用元宝枫油高效转化制备共轭亚油酸的方法技术

本发明专利技术公开了一种利用元宝枫油高效转化制备共轭亚油酸的方法，用于生产共轭亚油酸的菌株是具有亚油酸异构酶表达的乳酸菌——例如(但不限于)植物乳杆菌CGMCC No.8198。本发明专利技术所提供的生产共轭亚油酸的方法，是在乳酸菌的发酵培养基中加入元宝枫种仁油，进行微生物转化共轭亚油酸。本发明专利技术生产共轭亚油酸的方法，不需要高温高压的环境，使用元宝枫种仁油代替纯亚油酸，其亚油酸含量较高，降低了原料成本。此外，转化产物由可食用的益生菌、元宝枫种仁油及共轭亚油酸组成，亦可直接作为食品级原料用于相关产品。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于功能食品领域，尤其是一种以元宝枫种仁油为底物，以乳酸菌转化制备两种共轭亚油酸活性异构体的方法。
技术介绍
元宝枫种仁油是自然产生的最稳定的液态植物油，由于含有丰富的抗氧化剂，能保存多年而不酸败，压榨的元宝枫毛油不需要严格的纯化、精炼就能食用。元宝枫种仁油属于优良的半干性油，总脂肪酸中，不饱和脂肪酸占92.31％，具有降低血胆固醇，减少动脉硬化，防止冠心病的作用；其中必需脂肪酸——亚油酸和亚麻酸高达53％，是食用植物油及工业用油中的极品。通过实验发现，元宝枫种仁油能抑制肿瘤细胞、促进新生组织生长和修复体细胞。共轭亚油酸(Conjugatedlinoleicacid,CLA)是由亚油酸(Linoleicacid,LA)衍生出的一类共轭双烯酸异构体。共轭亚油酸的双键在碳链上的排列方式主要有四种，分别为：8,10-、9,11-、10,12-以及11,13-，每种位置异构又具有cis-cis、cis-trans、trans-cis、trans-trans四种几何异构体，所以共轭亚油酸的异构体的种类众多。其中，cis-9,trans-11-CLA(c9,t11-CLA)和trans-10,cis-12-CLA(t10,c12-CLA)两种构型被认为最具有生物活性，并且这两种CLA异构体已经在2008年通过美国FDA的一般公认安全认证(GRAS,GenerallyRecognizedasSafe)，允许其作为安全的食品添加剂加入到奶制品、果汁等食品中。目前，人类从饮食中摄取CLA最主要的天然来源是反刍动物的乳制品和肉制品以及一些蔬菜产品，但其含量很低。乳制品尤其是奶酪，是动物食品中共轭亚油酸的主要来源，每克脂肪中的含量可达3-7mg，仍远低于人类体外摄取共轭亚油酸的健康推荐剂量每天1g至3g的标准。因此，科学家越来越关注如何获得更多的共轭亚油酸来满足人体的需要。而CLA的合成方法主要为化学合成法和生物转化法，化学合成法纯化CLA异构体非常困难，并且不同异构体之间的生理活性也存在很大差异，使其无法应用于生产实践中；生物转化法生产CLA的菌种主要涉及瘤胃菌、乳酸菌、丙酸杆菌及其相关的诱变菌种瘤胃菌培养条件苛刻，痤疮丙酸杆菌为非安全级微生物，而乳酸菌为安全级微生物，并具有多种保健功能。乳酸菌是一类以糖为原料产生乳酸的细菌，具有提高食品营养价值、改善食品风味、延长保存时间、对人畜安全无害且具有多方面保健功能的益生菌，被视为理想的生物转化法共轭亚油酸的菌株。因此，开发更多的乳酸菌菌株作为生物转化产CLA是具有十分广阔的应用前景的。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种利用元宝枫油高效转化制备共轭亚油酸的方法，本专利技术以此发酵所获得的产品具有高度的安全性及营养健康功效。本专利技术所采用的技术方案：一种利用元宝枫油高效转化制备共轭亚油酸的方法，将共轭亚油酸发酵菌株接种到含元宝枫种仁油乳化液的培养基中，发酵培养产生共轭亚油酸。而且，所述将共轭亚油酸发酵菌株为具有内源性亚油酸异构酶表达的植物乳杆菌、干酪乳杆菌等乳酸菌。而且，所述将共轭亚油酸发酵菌株为植物乳杆菌CGMCCNo.8198。而且，所述培养基中元宝枫种仁油乳化液的含量为0.25-1mg/mL。而且，所述的培养条件为28-30℃。而且，所述的元宝枫油乳化液按如下方法配置：将300-600mg元宝枫种仁油与200mg-400mg吐温-80在冰水浴条件下进行超声乳化，得到元宝枫种仁油乳化液。一种元宝枫油作为益生菌发酵食品生产的应用。本专利技术的优点和积极效果如下：1.本专利技术提供了一种利用元宝枫油作为转化底物，以乳酸菌为媒介，高效地生物转化c9,t11-CLA和t10,c12-CLA，实验表明，其产量分别为本底表达的9.16倍和2.25倍。2.本专利技术提供了来自乳酸菌的一种具有高活性的亚油酸异构酶(LIase)基因序列，并由实验证明元宝枫油可浓度依赖性的上调该基因的转录表达。3.本专利技术所用菌株为食品级的益生菌，所用转化底物元宝枫油为已获得国家卫生和计划生育委员会批准的新资源食品。本专利技术以此发酵所获得的产品具有高度的安全性及营养健康功效。4.本专利技术为元宝枫和共轭亚油酸的应用与发展提供了新的理论指导。附图说明图1为本专利技术利用RT-PCR法分析未添加元宝枫油时乳酸菌(以L.plantarumCGMCC8198为例)发酵不同时间后LIase基因mRNA转录水平变化，泳道1-3分别代表发酵12h，24h和36h。图2为本专利技术利用qPCR法分析未添加元宝枫油后乳酸菌(以L.plantarumCGMCC8198为例)发酵不同时间后LIase基因mRNA转录水平变化。图3为本专利技术利用RT-PCR法分析添加0.5mg/mL元宝枫油乳酸菌(以L.plantarumCGMCC8198为例)发酵不同时间后LIase基因mRNA转录水平变化，泳道1-3分别代表发酵12h，24h和36h。图4为本专利技术利用qPCR法分析添加0.5mg/mL元宝枫油乳酸菌(以L.plantarumCGMCC8198为例)发酵不同时间后LIase基因mRNA转录水平变化。图5为本专利技术利用RT-PCR法分析添加不同浓度元宝枫油乳酸菌(以L.plantarumCGMCCNo.8198为例)发酵24h后LIase基因mRNA转录水平变化，泳道1-4分别代表添加元宝枫油的浓度为0,0.25,0.5,1mg/mL。图6为本专利技术利用qPCR法分析分别添加0,0.25,0.5,1mg/mL的元宝枫种仁油乳酸菌(以L.plantarumCGMCCNo.8198为例)发酵24h后LIase基因mRNA转录水平变化。图7为本专利技术制作的c9,t11-CLA的标准曲线。图8为本专利技术制作的t10,c12-CLA的标准曲线。图9为本专利技术乳酸菌(以L.plantarumCGMCCNo.8198为例)添加元宝枫油底物前后c9,t11-CLA产量变化。图10为本专利技术乳酸菌(以L.plantarumCGMCCNo.8198为例)添加元宝枫油底物前后t10,c12-CLA产量变化。具体实施方式下面结合实施例，对本专利技术进一步说明，下述实施例是说明性的，不是限定性的，不能以下述实施例来限定本专利技术的保护范围。一、利用元宝枫油及乳酸菌转化制备共轭亚油酸的方法以元宝枫种仁油乳化液为底物，利用植物乳杆菌CGMCCNo.8198等乳酸菌进行生物转化共轭亚油酸的方法，包括：将活化的乳酸菌接种到含0.5mg/mL的元宝枫种仁油乳化液的培养基中，在30℃厌氧培养箱中静置培养24h，提取其发酵液上清的脂肪酸后，进行碱催化的甲脂化后进行GC-MS检测。一种元宝枫种仁油乳化液制备方法，包括：取质量比为1.5:1的元宝枫油和Tween-80，将其溶于水进行冰水浴超声乳化，超声条件为：10个振幅，2min，超1s，停1s；超声后用0.22μM水相膜过滤。一种共轭亚油酸异构体的GC-MS检测方法，其GC-MS反应程序为：初温为200℃，以2℃/min升至230℃，再以8℃/min升至270℃，保持15min。一种具有较高活性的亚油酸异构酶基因，基因序列如序列1所示。本专利技术采用的代表性菌株为植物乳杆菌(Lactobacillusplantarum)CGMCCNo.8198，保本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种利用元宝枫油高效转化制备共轭亚油酸的方法，其特征在于：将共轭亚油酸发酵菌株接种到含元宝枫种仁油乳化液的培养基中，发酵培养产生共轭亚油酸。

【技术特征摘要】
1.一种利用元宝枫油高效转化制备共轭亚油酸的方法，其特征在于：将共轭亚油酸发酵菌株接种到含元宝枫种仁油乳化液的培养基中，发酵培养产生共轭亚油酸。2.根据权利要求1所述的利用元宝枫油高效转化制备共轭亚油酸的方法，其特征在于：所述将共轭亚油酸发酵菌株为具有内源性亚油酸异构酶表达的植物乳杆菌、干酪乳杆菌等乳酸菌。3.根据权利要求1所述的利用元宝枫油高效转化制备共轭亚油酸的方法，其特征在于：所述将共轭亚油酸发酵菌株为植物乳杆菌CGMCCNo.8198。4.根据权利要求1所述的利用元宝枫油高效...

【专利技术属性】
技术研发人员：罗学刚，陈冬菊，闫莉华，张同存，
申请(专利权)人：天津科技大学，
类型：发明
国别省市：天津;12