一种将植物油转化为富含超长链高度不饱和脂肪酸的生物油的方法技术

本发明专利技术提供一种将植物油高效转化为富含超长链高度不饱和脂肪酸的生物油的方法。通过将植物油或者是地沟油作为生物培养基成分，采用可以转化累积超长链高度不饱和脂肪酸的生物如破囊壶菌等，通过活体生物的培养，获得富含超长链高度不饱和脂肪酸的生物体，经过提取，可以获得富含超长链高度不饱和脂肪酸的生物油。植物油不仅可以快速促进破囊壶菌的生长，而且可以提高破囊壶菌的油脂含量。这种经过生物富集转化所获得的生物油，不仅增加了原先植物油中不含有的超长链高度不饱和脂肪酸，而且这种转化方法所获得的生物油相对于地沟油等更加安全可靠。可以广泛应用于各种动物饲料添加剂以及保健食品中。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于油脂加工处理
，具体涉及一种将植物油转化为富含超长链高度不饱和脂肪酸的生物油的方法。
技术介绍
高度不饱和脂肪酸是指含有三个或三个以上双键且碳链长度为20个以上碳原子的脂肪酸，其中，在化学结构上属于n-3型的高度不饱和脂肪酸具有特别重要的意义，主要包括二十碳五烯酸(EPA)和二十二碳六烯酸(DHA)。由于这类脂肪酸在高等动物(包括人类)其自身生物合成普遍缺乏，因此，这类脂肪酸也被称为必需脂肪酸，必需通过摄食途径得到补充，如果摄入不足，则会产生严重的健康影响。例如，人体中DHA主要分布在大脑灰质、神经系统、视网膜细胞的外节、心肌、精子、嗜酸性白细胞、母乳等，DHA在细胞膜、调节脑中枢神经、保护视力、治疗心血管疾病、抗肿瘤、抗炎症、抗过敏等发挥重要功能；EPA则主要在心血管疾病防控以及肥胖预防方面有重要作用。同时，在海洋水产养殖中，EPA和DHA也是重要的饲料营养添加剂。因此，如何发掘高度不饱和脂肪酸的可持续资源是一个重要的产业应用需求。自然界中，EPA和DHA的主要来源于海洋生物，特别是在深海和寒冷地区的海洋生物，其中海洋鱼类的脂肪是EPA和DHA的最为重要的传统资源，但鱼油资源有限，纯化工艺繁杂，得率低。从产业发展的另外一个角度来看，植物油资源十分丰富，主要含有十八碳脂肪酸，而且在产业中通常会有大量的过期植物油资源或者地沟油，如果可以将这些植物油资源大量产生新鲜的生物油，则不仅可以产生产业急需的高度不饱和脂肪酸，而且可以促进植物油加工处理的循环经济发展。
技术实现思路
本专利技术所要解决的主要技术问题是提供一种将植物油转化为富含超长链高度不饱和脂肪酸的生物油的方法，即使用破囊壶菌来利用植物油发酵产生富含超长链高度不饱和脂肪酸。通过植物油添加的新方法有效促进破囊壶菌的生长和油脂积累。本专利技术的植物油转化为富含超长链高度不饱和脂肪酸的生物油的方法，是将植物油作为破囊壶菌的培养基成分，通过活体生物的培养，获得富含超长链高度不饱和脂肪酸的破囊壶菌，经过提取，获得富含超长链高度不饱和脂肪酸的生物油。其中的植物油全部或部分用地沟油来替代。本专利技术的方法，其具体步骤如下：1)菌种纯化将破囊壶菌在固体培养基平板上进行划线培养，培养温度为15-20℃；其中固体培养基的配方如下：葡萄糖1％，蛋白胨0.15％，酵母提取物0.01％，琼脂1％。2)活化培养在步骤1)的培养基平板上选定的菌株区域添加植物油，将选定的菌株转移到培养液中，培养温度为15-20℃，震荡培养，培养时间为4-7天；培养液的配方如下：葡萄糖1％，蛋白胨0.15％，酵母提取物0.01％，植物油1-2％；3)快速培养将步骤2)的培养液静置后，吸取表面一层的培养液，将培养液接种到新鲜的液体培养基中进行振荡培养；培养温度为15-30℃，液体培养基起始pH值范围为4-8，培养时间为4-7天；其中液体培养基的配方如下：葡萄糖1％，蛋白胨0.15％，酵母提取物0.01％，植物油4-20％；其中植物油添加的最佳浓度为6-12％；4)在步骤3)的液体培养基中添加食盐，使培养液盐度为45‰-70‰，继续培养至菌体富含超长链高度不饱和脂肪酸的生物油；5)从菌体中制备生物油离心收集菌体，加入甲醇和氯仿溶液，研磨匀浆后进行提取，过滤后在滤液中加入水，振荡后静置分层，将下层有机溶剂相收集，低温蒸发除去有机溶剂，即可得到纯化提取的生物油。与现有技术相比，本专利技术的优点在于：1、本专利技术采用植物作为微生物发酵培养基，可以有效地提高破囊壶菌的生长速度和油脂累积速度，能够达到高度不饱和脂肪酸累积更加高效的积累，相比于传统方法其效率可提升20-50％以上；2、本专利技术采用植物作为微生物发酵培养基，所获得的破囊壶菌生物质中所含有的生物油具有新鲜安全的特点，可以有效促进植物油的产业利用潜力；3、本专利技术所获得的破囊壶菌生物油，经过提取或者以生物质直接添加的方法，可以广泛应用于需要EPA和DHA作为食品或饲料添加剂的产业中。附图说明图1破囊壶菌在四种培养基中的生长曲线图；图2：破囊壶菌在不同培养基培养下的呼吸量测定图。具体实施方式本专利技术所用的植物油是指市售的植物油，包括花生油、菜籽油、大豆油等，这些植物油中通常含有C16脂肪酸和C18脂肪酸，其中不饱和脂肪酸脂肪酸主要是C18:2和C18:3。地沟油是指经过工业回收净化处理的废弃植物油，这样的产品大量存在，如果能够将其作为微生物培养基，获得新鲜的富含生物油的新原料，那么就可以使废弃植物油(地沟油)得到更加安全的保证。上述两种原料通常都不含有超长链高度不饱和脂肪酸，因此，如果能够将其作为微生物的发酵培养基，通过微生物自有的生物合成途径从而获得超长链高度不饱和脂肪酸，是本专利技术的主要目的。以下结合实施例对本专利技术进行详细描述。实施例1：1.菌种纯化将破囊壶菌在蛋白胨、酵母提取粉、葡萄糖培养基下固体培养基平板上，划线，选择生长速度快的菌落进行纯化。100ml培养基的配方：葡萄糖1％，蛋白胨0.15％，酵母提取物0.01％，琼脂1％。培养温度为20℃，静止培养。2.活化培养在上述平板上选定的区域添加1小滴植物油，用移液枪吸取，并转移到100ml三角烧瓶，每100ml培养液中含葡萄糖1％，蛋白胨0.15％，酵母提取物0.01％，植物油1-2％；培养温度为15-20℃，震荡培养，培养时间为7天。3.快速培养上述培养液静置30分钟后，吸取表面一层液体，大致30ml的接种液，取数瓶，以1:20的接种比例，将接种液添加至新鲜的液体培养基中培养。转移到1000-10000ml烧瓶或其他培养容器中。每100ml培养液中含葡萄糖1％，蛋白胨0.15％，酵母提取物0.01％，植物油4-8％。放置在摇床培养，转速快，转速为100-180rpm，或者充气培养。温度高，培养温度为30℃，起始pH值范围为4.5，培养时间为6天。通过以上培养条件发现破囊壶菌可以在含植物油的GYP培养中生长，且有促进作用。实验结果表明，在两种经典的培养基500mL中，如果添加20mL植物油，均可以高效促进破囊壶菌的生长速度，在培养周期为6天的培养过程中，对于GYP培养基(葡萄糖、酵母、蛋白胨)来说，添加植物油可以使生物量增加1倍以上，而对于YP培养基(酵母、蛋白胨)来说，添加植物油可以使生物量增加至约5倍。由此实验可以本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种将植物油转化为富含超长链高度不饱和脂肪酸的生物油的方法，其特征在于，所述的方法是将植物油作为破囊壶菌的培养基成分，通过活体生物的培养，获得富含超长链高度不饱和脂肪酸的破囊壶菌，经过提取，获得富含超长链高度不饱和脂肪酸的生物油。

【技术特征摘要】
1.一种将植物油转化为富含超长链高度不饱和脂肪酸的生物油的方法，其
特征在于，所述的方法是将植物油作为破囊壶菌的培养基成分，通过活体生物
的培养，获得富含超长链高度不饱和脂肪酸的破囊壶菌，经过提取，获得富含
超长链高度不饱和脂肪酸的生物油。
2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的植物油全部或部分用地
沟油来替代。
3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的方法的步骤如下：
1)菌种纯化
将破囊壶菌在固体培养基平板上进行划线培养，培养温度为15-20℃；
2)活化培养
在步骤1)的培养基平板上选定的菌株区域添加植物油，将选定的菌株转移
到添加有植物油的培养液中，培养温度为15-20℃，震荡培养4-7天；
3)快速培养
将步骤2)的培养液静置后，吸取表面的培养液，将培养液接种到新鲜的液
体培养基中进行振荡培养；培养温度为15-30℃，液体培养基起始pH值范围为
4-8，培养时间为4-7天；
4)在步骤3)的液体培养基中添加食盐，使培养液盐度为45‰-70‰，继续
培养至菌体富含超长链高度不饱和脂肪酸...

【专利技术属性】
技术研发人员：盛哲良，严小军，陈雨豪，何山，吴康，朱鹏，骆其君，牟桐，
申请(专利权)人：宁波大学，
类型：发明
国别省市：浙江;33