柳兰有效部位及其制备方法和应用技术

柳兰有效部位及其制备方法和应用，属于植物提取物技术领域。选自柳兰乙酸乙酯部位、柳兰正丁醇部位中的一种或两种按任意质量比的混合物。将柳兰全草粉碎，加入体积百分比浓度65%~95%乙醇溶液提取，将所得提取液浓缩、干燥，得浸膏；将浸膏加蒸馏水分散，得浸膏分散液，然后依次采用石油醚、乙酸乙酯和正丁醇作为溶剂萃取浸膏分散液，分别挥去溶剂后得到柳兰乙酸乙酯部位、柳兰正丁醇部位。柳兰有效部位在制备抗HBV病毒、抗甲型H1N1病毒药物方面的应用，具有较好的抗乙型肝炎和抗甲型流感病毒的效果。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及柳兰有效部位及其制备方法和应用，属于植物提取物

技术介绍
柳兰（EpilobiumangustifoliumL.）为柳叶菜科（Onagraceae）柳兰属多年生粗壮草本植物，是藏医传统药用植物。其主要生于海拔2800~4250米的山坡林缘、林下及河谷湿草地。分布在我国西南、西北、华北至东北。北温带广布，北美洲、欧洲至日本、小亚细亚至喜马拉雅等地也有。柳兰全草味苦，无毒，有消肿利水，下乳，润肠之功能。主治乳汁不足，气虚浮肿。格尔•格桑扎西在《实用藏药名库》记载其具有清热利胆、止泻、杀虫功能。乙型肝炎病毒（HBV）感染是一种严重影响公共卫生与人体健康的全球性流行性疾病,尽管乙肝防治已有很大提高,但仍缺乏高效的药物与手段。乙肝是影响我国国计民生的重大传染性疾病，迄今为止尚无特异有效的治疗手段。2009年墨西哥与美国先后出现甲型H1N1型流感，并在很短时间内席卷全球，世界卫生组织（WHO）将此次全球流感大流行的预警级别提高到5级.目前研究表明甲型H1N1流感病毒是人流感病毒、北美州禽流感病毒，以及北美洲、欧洲和亚洲猪流感病毒的混合体，其易感人群的年龄段主要在20～45岁，且人群间传染性强，临床表面除一般流感症状外，表现出特异的呼吸道和消化道疾病症状，病死率高于一般流感。甲型H1N1型流感是影响我国国计民生的重大传染性疾病，迄今为止尚无特异有效的治疗手段。申请人在研究中发现：目前制备抗乙型肝炎病毒（简称HBV病毒）药物和制备抗甲型流感病毒（简称甲型H1N1病毒）药物的原料较为匮乏、且药效不理想。柳兰植物主要含有多酚类、黄酮、三萜酸、鞣质化合物等多种化学成分，本领域中柳兰主要功效为清热利胆、消肿利水、下乳、润肠，但目前还没有抗乙型肝炎、抗甲型流感方面的相关研究。
技术实现思路
本专利技术要解决的技术问题是：克服现有技术的不足，提供柳兰有效部位及其制备方法和应用，该柳兰有效部位能具有明显的HBV病毒、甲型H1N1病毒表面抗原亲和作用，能用于制备抗HBV病毒药物、抗甲型H1N1病毒药物。本专利技术解决其技术问题所采用的技术方案是：该柳兰有效部位，其特征在于：选自柳兰乙酸乙酯部位、柳兰正丁醇部位中的一种或两种按任意质量比的混合物。该柳兰有效部位，其特征在于：选自柳兰正丁醇部位。该柳兰有效部位的制备方法，其特征在于，包括下述步骤：将柳兰全草粉碎，加入体积百分比浓度65%~95%乙醇溶液提取，将所得提取液浓缩、干燥，得浸膏；将浸膏加蒸馏水分散，得浸膏分散液，然后依次采用石油醚、乙酸乙酯和正丁醇作为溶剂萃取浸膏分散液，取所得乙酸乙酯萃取液和正丁醇萃取液，分别挥去溶剂，得到柳兰乙酸乙酯部位、柳兰正丁醇部位。所述的提取为超声波辅助回流提取；超声波辅助回流提取的具体操作为：将粉碎后的柳兰全草加入体积百分比浓度65%~95%乙醇溶液超声波提取0.5~3小时，过滤，滤渣加入体积百分比浓度65%~95%乙醇溶液回流提取2~3次，合并提取液，即得。该柳兰有效部位的应用，其特征在于：在制备抗HBV病毒药物方面的应用。该柳兰有效部位的应用，其特征在于：在制备抗甲型H1N1病毒药物方面的应用。所述药物是通过柳兰乙酸乙酯部位、柳兰正丁醇部位中的一种或两种按任意质量比的混合物与药用辅料混合，制成的口服制剂或注制射剂或注制射剂。所述的注射制剂为脂质体注射剂、纳米粒注射剂或微球注射剂。所述的口服制剂为散剂、片剂、颗粒剂、胶囊剂或溶液剂。申请人对于本专利技术的说明如下：现有技术中，柳兰常规功效为具有利水渗湿、活血调经，未见其有抗病毒功效的相关报道。申请人通过大量研究发现：柳兰有效部位还具有抗HBV病毒和抗甲型H1N1病毒的作用，但是其功效不明显，也不能确定其具体的有效部位。因此通过怎样的溶剂、采用怎样制备方法，才能获得抗HBV病毒和抗甲型H1N1病毒活性效果最好的有效部位，是必须要解决的问题。申请人通过研究，最终发现：采用本专利技术制备方法，所得的柳兰乙酸乙酯部位和柳兰正丁醇部位有较强的抗HBV病毒和抗甲型H1N1病毒效果。制备方法中，加入体积百分比浓度65%~95%乙醇溶液提取可以只采用回流提取。优选采用超声波辅助回流提取，具有较高的收率和提取效率。超声波辅助回流提取的具体操作为：超声波提取后，过滤获得超声波提取液和滤渣，向滤渣中加体积百分比浓度65%~95%乙醇水溶液回流提取，合并超声波提取液和回流提取液。进一步的说明，回流提取的具体操作为：向回流加热装置中直接加入粉碎后的药材或加入超声波提取后的滤渣，加入乙醇水溶液，加热提取，放冷过滤得一次提取液和滤渣；再向滤渣中加入乙醇水溶液，加热、进行第二次回流提取，放冷过滤得二次提取液和滤渣（以上为回流提取2次）；合并多次提取液，即得回流提取液。优选的，每次回流提取0.5~2小时；每次回流提取时所加乙醇溶液没过药材表面1cm~2cm。回流提取的温度为乙醇回流提取的常规温度，需高于乙醇的沸点，优选为80℃~100℃。并且，申请人分别针对HBV病毒、甲型H1N1病毒的特点，通过系统的评价柳兰的体外抗病毒活性和靶点，并从中寻找具有抗病毒活性的有效部位。建立成熟Hep2.2.15-乙肝病毒细胞培养体系，可用于快速的体外抗病毒活性筛选。此外，采用表面等离子共振SPR（BIAcore）技术探讨提取物与病毒蛋白的体外结合亲和力，并结合相关分子生物学实验初步确定作用靶点。该技术简便高效、应用成熟，课题组已通过表达纯化或其他途径获得十多种病毒相关的靶点蛋白。以上技术的应用将为作用机制明确的抗病毒药物开发提供可能。申请人分别研究了柳兰乙酸乙酯部位和柳兰正丁醇部位对HBV病毒（即乙肝病毒）体表抗原（即HBsAg）的亲和能力，进一步发现其中柳兰正丁醇部位抗HBV病毒和抗甲型H1N1病毒的效果最优。另外，本专利技术回流提取所用的乙醇溶液是由乙醇和溶剂水组成。制备方法中，浸膏为粗提取物，采用不同的溶剂萃取浸膏分散液，指的是依次将石油醚加入浸膏分散液萃取分离获得石油醚萃取液、将乙酸乙酯加入浸膏分散液萃取分离获得乙酸乙酯萃取液、将正丁醇加入浸膏分散液萃取分离获得正丁醇萃取液；取乙酸乙酯萃取液和正丁醇萃取液分别挥发去除溶剂后，所得即选自柳兰乙酸乙酯部位和柳兰正丁醇部位；将萃取后剩余的浸膏分散液（溶剂为水），挥发去除溶剂即得柳兰水相萃取部位。水相萃取部位也可以称作水相萃取物，水相萃取部位易溶于水。其中，柳兰乙酸乙酯部位含有生物碱、黄酮类化合物；柳兰正丁醇部位含有苷类和酚类化合物；柳兰水相萃取部位含有多糖和有机酸类化合物（以上为各部位中的主要成分）。挥去溶剂即挥发去除溶剂。挥去溶剂可以采用常压加热使溶剂（石油醚、乙酸乙酯和正丁醇）挥发。优选的，挥去溶剂采用减压浓缩，该方法效率高，并且能避免热敏性成分因高温丧失药性。优选的，抗HBV病毒和抗甲型H1N1病毒药物的剂型为口服制剂或注射制剂，是由于申请人发现口服制剂和注射制剂为最佳给药途径。此处，所述口服制剂为经肠胃道给药制剂，优选的，口服制剂为缓释型或控释型口服制剂。另外，本专利技术中的抗HBV病毒和抗甲型H1N1病毒药物也可以为非肠胃给药的其他口服剂，如呼吸道给药制剂（喷雾剂、气雾剂、粉雾剂）；皮肤给药制剂（外用溶液剂、洗剂、搽剂、软膏剂、硬膏剂、糊剂、贴剂）；膜给药制剂（滴眼剂、滴鼻剂、眼本文档来自技高网...

【技术保护点】
柳兰有效部位，其特征在于：选自柳兰乙酸乙酯部位、柳兰正丁醇部位中的一种或两种按任意质量比的混合物。

【技术特征摘要】
1.柳兰有效部位，其特征在于：选自柳兰乙酸乙酯部位、柳兰正丁醇部位中的一种或两种按任意质量比的混合物。2.权利要求1所述的柳兰有效部位的制备方法，其特征在于，包括下述步骤：将柳兰全草粉碎，加入体积百分比浓度65%~95%乙醇溶液提取，将所得提取液浓缩、干燥，得浸膏；将浸膏加蒸馏水分散，得浸膏分散液，然后依次采用石油醚、乙酸乙酯和正丁醇作为溶剂萃取浸膏分散液，取所得乙酸乙酯萃取液和正丁醇萃取液，分别挥去溶剂，得到柳兰乙酸乙酯部位、柳兰正丁醇部位。3.根据权利要求2所述的柳兰有效部位的制备方法，其特征在于：所述的提取为超声波辅助回流提取；超声波辅助回流提取的具体操作为：将粉碎后的柳兰全草加入体积百分比浓度65%~95%乙醇溶液超声波提取0.5~3小时，过滤，滤渣...

【专利技术属性】
技术研发人员：林鹏程，胡秦，曾擎屹，
申请(专利权)人：青海民族大学，
类型：发明
国别省市：青海;63