本发明专利技术涉及微生态制剂技术领域，具体涉及一株改善水产养殖环境的沼泽红假单胞菌。本发明专利技术所涉及的沼泽红假单胞菌的保藏号为CGMCC No.9136。使用本发明专利技术CGMCC No.9136的微生态制剂，在降解养殖环境中的亚硝酸盐方面有良好效果，在24小时之内亚硝酸盐含量可被降解98％。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于微生态应用
，具体涉及一株沼泽红假单胞菌的微生态制剂以及在水产养殖中的应用。
技术介绍
在养殖业中，水体的清、富、美是衡量养殖环境优劣的重要指标。清，要使水体保持自然清澈；富，指水体中含有丰富的藻类及浮游动物，以此为水产类动物提供充足的饵料；美即指水体环境与水产动物形成生态平衡。而目前由于池塘的高密度养殖，养殖动物粪便及残饵不断堆积，有害微生物和藻类大量繁殖，水体严重缺氧，导致鱼虾浮头、偷死的现象十分严重，在这样的情况下大量抗生素的使用又会造成养殖动物抗生素含量超标，进而影响人类的身体健康。因此，利用生物修复的方法使养殖水体达到自然、和谐的状态迫在眉睫。光合细菌(Photosynthetic bacteria，简称PSB)是地球上最早出现具有原始光能合成体系的原核生物，是一大类在厌氧条件下进行不放氧光合作用的细菌的总称，为革兰氏阴性菌，广泛存在于地球生物圈的各处。光合细菌菌体无毒，蛋白质含量高达60％，含B族维生素、辅酶Q和类胡萝卜素。因其特有的固氮、吸氢、固碳、利用硫化物等的新陈代谢方式在很多方面具有重要的实用和经济价值。在水产养殖业中光合细菌不仅可用于净化水质，还因其营养价值高，可作为饵料添加剂，在防治鱼虾疾病、促进生长、提高孵化率等方面均表现出良好的性能。目前市场上充斥着各色各样的光合细菌制剂，以液态和粉状存在的居多，根据实验室对市场上多种产品的分析，其质量不尽人意，主要表现为液体菌剂颜色不鲜艳，菌体稳定性差，活菌数较少，甚至有的未发现有光合细菌存在，市场的迫切需求与目前市面上光合
细菌产品质量参差不齐的混乱状态为我们提供了大好的机遇，因此，研制出优良的光合细菌制剂意义重大。
技术实现思路
本专利技术提供一种光合细菌菌剂及其应用。本专利技术的目的是通过以下技术方式方案实现的：本专利技术提供一株沼泽红假单胞菌(Rhodopseudomonaspalustris)新菌株，其保藏号为CGMCC No.9136。本专利技术的沼泽红假单胞菌(Rhodopseudomonaspalustris)的分离鉴定过程如下：1.配制光合细菌培养基富集培养基(/L)：NaHCO32g，酵母粉1g，K2HPO4·3H2O 0.2g，NH4Cl 1g，NaAc·3H2O 0.3g，MgSO4·7H2O 0.2g，NaCl 0.2g，Na2S2O3·5H2O 1g，pH7.0，121℃高压灭菌20min。分离培养基在富集培养基基础上添加琼脂，最终质量分为1.5％，121℃高压灭菌20min。2.富集：将采集来的泥水样品放于已加有富集培养基的带螺口的厌氧管中，其中厌氧管盛有15mL培养基及10mL池塘水+底泥，每个覆盖2-3cm石蜡油。光照强度1000lx～2000lx，30℃厌氧培养。3.分离纯化富集一周后，从培养基变红的厌氧管中取出1mL液体，取稀释度为10-3、10-4，10-5的液体100μL涂板，10天左右观察到有红色菌落长出；挑出红色菌落平板画线至纯。4.鉴定挑取单菌落进行16S rRNA菌落PCR，送Invitrogen测序，序列如SEQ ID No.1所示。测得序列在NCBI上进行Blast比对，初步鉴定为沼泽红假单胞菌Rhodopseudomonas palustris，与沼泽红假单胞菌
R.palustrisATCC 17003的16S rRNA基因相似性距离为100％。该菌生长缓慢，5天可出现单菌落，大小0.5mm～1mm；厌氧状态下为暗红色菌落，革兰氏染色为阴性短杆状，固体平板培养为短杆状(图1)。将分离到沼泽红假单胞菌Rhodopseudomonas palustris保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，简称CGMCC，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所，保藏日期为2014年5月8日，保藏编号分别为：CGMCC No.9136。本专利技术还提供了包含该沼泽红假单胞菌的微生态制剂。该制剂由沼泽红假单胞菌Rhodopseudomonas palustris CGMCC No.9136发酵而成。本专利技术还提供所述微生态制剂的制备方法，其包括如下步骤：沼泽红假单胞菌CGMCC No.9136种子液以体积比1-10％的接种量接种到发酵液中，光照培养2-5天。本专利技术中的光合细菌菌剂对水体亚硝酸盐含量有很明显的降解效果，即使在黑暗条件下，也有很好的降解效果。使用本专利技术CGMCC No.9136的微生态制剂，在24小时之内亚硝酸盐含量可被降解98％，无同行类产品能达到此效果。附图说明图1沼泽红假单胞菌(Rhodopseudomonaspalustris)的菌落图。图2亚酸钠含量标准曲线图。图3两种条件下光合细菌对亚硝酸盐的降解效果。左边为无光条件下CGMCC No.9136对亚硝酸盐的降解，右边为光照条件下CGMCC No.9136对亚硝酸盐的降解。图4所示为自然光照下对虾养殖池亚硝降解效果对比。具体实施方式以下实施例用于说明本专利技术，但不用来限制本专利技术的范围。实施例1沼泽红假单胞菌菌液制备1.沼泽红假单胞菌扩大培养基的配方(/L)：CaCl20.1g，KH2PO40.5g，NH4Cl 1g，MgCl2·6H2O 0.5g，NaCl 1g，NaAc·3H2O 1g，二水合丁二酸钠1g，酵母粉0.3g，蛋白胨0.3g2.扩大培养基培养步骤(1)按照培养基配方称取各个组分，用水溶解，将培养基分装至5L已用酒精消毒的PET塑料桶中，每桶4.5L，接种沼泽红假单胞菌CGMCC No.9136500mL，封盖。置于纸箱中白炽灯光照培养4天，可以作为下一步大规模培养的种子液。(3)称量1吨培养液所需要的各个成分，先用少量自来水完全溶解，再与剩下的自来水充分混合于大桶中，接种10桶光合细菌种子液，混匀后分装于5L透明PET塑料桶中封盖。光照培养5天，待培养至红棕色，即得到高纯度的光合细菌菌液。实施例2沼泽红假单胞菌CGMCC No.9136对亚硝酸盐的降解能力测试1.实验方法(1)做亚硝酸盐标准曲线：配制不同浓度的亚硝酸盐溶液，置于酶标仪下测量OD550，做成盐浓度与OD550的对应性标准曲线。(2)降亚硝实验用的培养基：配制3°盐水分装于150mL小三角瓶中，50mL/瓶，每瓶加入0.05g池塘底泥。121℃，高压蒸汽灭菌20min。(3)设置黑暗条件和光照条件，每个条件下设置实验组和对照组，每株菌3个重复，实验组加入光合细菌种子液50μL，分别放置于黑暗和光照条件下，30℃放置培养。(4)每24小时测量一次亚硝酸盐含量，具体方法为：在超净工作台内取1mL液体于1.5mL的离心管中，12,000rpm离心2分钟，吸取上清200μL于96孔板中，先后加入格利斯试剂Ⅰ、Ⅱ各20μL，静
置5min使其完全反应，然后置于酶标仪下测量OD550。(5)根据标准曲线计算实验组和对照组的亚硝酸盐浓度，测量2天，记录实验数据并分析。2.实验结果(1)亚硝含量与OD550标准曲线制作如图2所示为亚硝含量标准曲线图，得到的线性相关系数为0.998，表明此次制做的标准曲线反应的亚硝酸钠浓度与OD550有很强的相关性。(2)如图3所示，黑暗和光照条件下所述泽红假单胞菌CGM本文档来自技高网...
【技术保护点】
一株沼泽红假单胞菌(Rhodopseudomonas palustris)新菌株，其保藏号为CGMCC No.9136。
【技术特征摘要】
1.一株沼泽红假单胞菌(Rhodopseudomonas palustris)新菌株，其保藏号为CGMCC No.9136。2.含有权利要求1所述菌株的光合细菌微生态制剂，其为沼泽红假单胞菌CGMC...
【专利技术属性】
技术研发人员：汪攀，王蕊，李亚，刘婷，何增国，朱传忠，郑慧，
申请(专利权)人：北京大北农科技集团股份有限公司，福建大北农水产科技有限公司，天津昌农科技有限责任公司，
类型：发明
国别省市：北京;11
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