一种水产养殖动物的细菌疫苗制备方法技术

技术编号:618728 阅读:270 留言:0更新日期:2012-04-11 18:40
一种水产养殖动物的细菌疫苗制备方法,将发酵培养的疫苗菌液经离心处理除去培养液加入5-20倍菌体体积的0.85%的生量盐水洗涤沉淀,除去上清液再用高盐溶液洗涤沉淀,混均后放入菌塑料袋置于静水压仪中加压处理,处理后取出菌液再施行一次离心去盐和静压处理,取出后包装或经真空冻干成粉剂再经包装而成,涉及多种病原细菌,可广泛应用于鱼或海豚等哺乳动物,方法简便,经济实用,便于推广。(*该技术在2022年保护过期,可自由使用*)

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及。
技术介绍
细菌性病害是危害水产养殖动物的一类主要疾病,每年给世界各国水产养殖业造成巨大的经济损失,如何有效的防治细菌性病害是水产病害研究者急待解决的课题。受人体和家畜(禽)免疫防治的启示,人们将水产养殖的动物的某些病原菌用化学或物理的方法进行灭活或者减毒,制成疫苗后接种到动物体内,发现疫苗同样可以刺激水产养殖动物(鱼、鳖等)产生免疫保护力,防止某些病原对水产动物的感染,最终达到防治的目的。迄今为止,人们在制作细菌疫苗时采用多种灭活方法,包括使用福尔马林、苯酚、氯仿等试剂进行化学灭活和经加热、紫外线照射等进行物理灭活,但是使用化学药剂不仅存在药物污染和残留,而且会破坏保护性抗原的分子结构,降低疫苗的免疫原性,从而影响使用效果。而加热,紫外线处理方法存在耗能大,并且也存在对保护性抗原的破坏等问题。
技术实现思路
本专利技术的目的是克服已有技术的不足,提供,以减少由于化学药物处理、加热或紫外照射引起的疫苗免疫原性降低的缺点,提高疫苗的免疫保护率。 本专利技术是通过渗透压和外部高压相结合将疫苗菌进行灭活制备水产养殖细菌性疫苗的方法。将发酵培养的疫苗菌液经离心处理除去培养液加入5-20倍菌体体积的0.85%的生量盐水洗涤沉淀,除去上清液后用高浓度盐溶液洗涤沉淀,混均后放入菌塑料袋置于静水压仪中加压处理,处理后取出菌液,再进行一次离心、去盐和高静水压处量,取出后包装或经真空冻干成粉剂再经包装而成,本方法涉及多种病原细菌,可广泛应用于鱼类或海豚等水生动物,方法简便,经济实用,便于推广。 制备的疫苗可通过注射、口服、浸泡和喷雾等各种途径对水产养殖动物进行免疫。 本专利技术的具体方法是将发酵培养的疫苗用菌液经离心,除去培养液后加入5~20倍菌体体积的0.85%的NaCl生理盐水悬浮洗涤沉淀;再经离心,除去上清液,加入5~20倍菌体体积的5~10%的NaCl水溶液冲洗沉淀,混匀后放置于无菌的高强度的塑料袋或带盖密封性好的软质的容器中,容器的容量以300~1000ml为宜,排净里面的空气,将其放入中小型静水压仪的超高压腔中高压处理,处理后取出菌液再经离心。而后用5~20倍体积蒸馏水悬浮冲洗混匀菌体,再将菌液倒如无菌的高强度的塑料袋或带盖密封性好的软质的容器中,排净空气,再放入中小型静水压仪的超高压腔中进行高压处理。处理完毕后取出,可直接包装以用于水产养殖动物的免疫治疗或经真空冻干成粉剂再经包装,用于水产养殖动物的免疫防治。上述离心的工艺取离心力为3000~7000rpm,离心时间为15~30min;静水压处理取压力100MP~250MP,处理时间为30~60min。 具体实施方式 下面以一个最佳实施例,即海水鱼类弧菌疫苗的制备进一步说明本专利技术。 取海水养殖的鲈鱼、牙鲆的病原菌鳗弧菌和哈维氏弧菌发酵液,5000rpm离心30min,收集活菌体,加入10倍体积的0.85%的NaCl生理盐水悬浮混匀沉淀,再经5000rpm离心,30min,除去上清液,加入10倍菌体体积的8%的NaCl水溶液冲洗沉淀,混匀后放置于无菌的高强度的塑料袋或带盖密封性好的软质的容器中,容器的容量以650ml为宜,排净里面的空气,将其放入中小型静水压仪的超高压腔中,操作压力为225MP,处理时间为45min。处理后取出菌液经5000rpm离心30min,之后用10倍体积蒸馏水悬浮冲洗混匀菌体,再将菌液倒如入无菌的高强度的塑料袋或带盖密封性好的软质的容器中,排净空气,放入中小型静水压仪的超高压腔中,压力200MP,处理时间为60min,制成相应的疫苗。应用时只要将灭活处理的菌液对30克左右的鲈鱼和牙鲆鱼进行腹腔注射107~108CFU剂量,免疫50天后检测免疫鱼血清的相应抗体效价,其中对鳗弧菌的免疫效价达27~28。对哈维氏弧菌的免疫效价可达26~27。在免疫后60天对免疫后的鱼用鳗弧菌和哈维氏弧菌攻毒,免疫保护率在70%~93%之间。 该专利技术应用于除虾、贝类以外的高等水生动物如,鱼、龟鳖类以及海豚、海豹等大哺乳类动物,由于该方法是通过对活菌体进行高渗和高压处理相结合灭活的环保高效的疫苗制备方法,涉及水生动物的多种病原菌,如多种病原弧菌、气单胞菌、爱德华氏菌、耶尔森菌、发光杆菌、巴斯德菌、屈挠杆菌和链球菌等,适用范围广,因此本专利技术是应用于水产养殖动物的细菌性病害疫苗制备的一种经济实用的优良方法,便于推广使用,本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种水产养殖动物的细菌疫苗制备方法,将发酵培养的疫苗用菌液经离心,除去培养液后加入5~20倍菌体体积的0.85%的NaCl生理盐水悬浮洗涤沉淀;再经离心,除去上清液,加入5~20倍菌体体积的5~10%的NaCl水溶液冲洗沉淀,混匀后放置于无菌的高强度的塑料袋或带盖密封性好的软质的容器中,容器的容量以300~1000ml为宜,排净里面的空气,将其放入中小型静水压仪的超高压腔中高压处理,处理后取出菌液再经离心。而后用5~20倍体积蒸馏水悬浮冲洗混匀菌体,再将菌液倒如无菌的高强度的塑料袋或带盖密封性好的软质的容器中,排净空气,再放入中小型静水压仪的超高压腔中进行高压处理。处理完毕后取出,可直接包装以用于水产养殖动物的免疫治疗或经真空冻干成粉剂再经包装而成。

【技术特征摘要】
1.一种水产养殖动物的细菌疫苗制备方法,将发酵培养的疫苗用菌液经离心,除去培养液后加入5~20倍菌体体积的0.85%的NaCl生理盐水悬浮洗涤沉淀;再经离心,除去上清液,加入5~20倍菌体体积的5~10%的NaCl水溶液冲洗沉淀,混匀后放置于无菌的高强度的塑料袋或带盖密封性好的软质的容器中,容器的容量以300~1000ml为宜,排净里面的空气,将其放入中小型静水压仪的超高压腔中高压处理,处理后取出菌液再经离心,而后用5~20倍体积蒸馏水悬浮冲洗混匀菌体,再将菌液倒如无菌的高强度的塑料袋或带盖密封性好的软质的容器中,排净空气,再放入中小型静水压仪的超高压腔中进行高压处理,处理完毕后取出,可直接包装以用于水产养殖动物的免疫治疗或经真空冻干成粉剂再经包装而成,上述离心的工艺取离心力为3000~7000rpm,离心时间为15~30mi...

【专利技术属性】
技术研发人员:陈刚包振民
申请(专利权)人:青岛海洋大学
类型:发明
国别省市:95[中国|青岛]

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