本发明专利技术涉及荧光标记引物分型领域，尤其是一种MAOAμ‑VNTR荧光标记自动分型方法，其方法步骤为：样本及DNA提取；PCR扩增；3130型遗传分析仪进行毛细管电泳；GeneMapper IDv3.2软件进行VNTR分型。本发明专利技术的有益效果是：建立的MAOAμ‑VNTR多态性荧光标记自动分型方法分型效率高，全自动毛细管电泳能更准确的进行MAOAμ‑VNTR基因分型，且具有样品处理简单、自动化程度高、检测时间短等优势,结果准确可靠，操作简便，在针对MAOAμ‑VNTR多态性的相关研究中具有良好的应用前景。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及荧光标记引物分型领域，尤其是一种MAOAμ-VNTR荧光标记自动分型方法。
技术介绍
目前国内外学者关于MAOAμ-VNTR多态性研究多集中在酒精依赖、精神分裂症、抑郁症、暴力攻击行为等方面，探讨两者的相关性，阐明其发生的遗传机制，为疾病或者暴力预防与控制，风险预测以及针对酒精依赖、暴力攻击行为的相关药物设计提供理论基础，具有重要社会经济意义。但是目前针对MAOAμ-VNTR多态性的研究报道中，大多采用PCR扩增结合琼脂糖凝胶电泳，基因分型依赖人工判读，准确性依赖个体经验，存在一定的误差；而且电泳时间长。因此，对于上述问题有必要提出一种MAOAμ-VNTR荧光标记自动分型方法。
技术实现思路
本专利技术目的是克服了现有技术中的不足，提供一种MAOAμ-VNTR荧光标记自动分型方法。为了解决上述技术问题，本专利技术是通过以下技术方案实现：一种MAOAμ-VNTR荧光标记自动分型方法，其方法步骤为：(1)样本及DNA提取；(2)PCR扩增；(4)3130型遗传分析仪进行毛细管电泳；(4)GeneMapper IDv3.2软件进行VNTR分型。优选地，所述样本及DNA提取还包括720份云南汉族无关个体的指尖血,一部分取自于本实验室日常检案,另一部分取自红河州看守所羁押人员，使用FTA卡或中速滤纸采集,用chelex-100法进行DNA提取。优选地，所述PCR扩增包括用BIO-RAD T100TM梯度PCR仪优化选择PCR反应条件,最终确定扩增反应体积为10μL,内含1～10ngDNA模板,PCR混合物(天根)5μL,0.8μmol/L PCR引物,正向引物:5'-ACAGCCTGACCGTGGAGAAG-3'，反向引物:5'-GAACGGACGCTCCATTCGGA-3'，且正向引物5'端用FAM荧光标记；所述扩增反应的循环参数为:95℃5min预变性,94℃30s,60℃30s,72℃40s,循环30次,最后延伸为72℃5min。优选地，所述3130型遗传分析仪进行毛细管电泳包括取Hi-Di甲酰胺1000μL加入1.5mlEP管，再加入GS-500LIZ分子量标记60μL，反复混匀，每孔加两者的混合物9μL。加样后打开3130型遗传分析仪，将样品板放入仪器内的托盘内。优选地，其使用方法为(1)点击打开3130Foundation Data Collection3.0软件；(2)在Plate manager窗口编写样品表；(3)然后切换到Run Scheduler的plate view窗口，找到待电泳的样品表并与放样品的样品盘链接：(4)点击上方的三角形进行电泳。优选地，所述GeneMapper IDv3.2软件进行VNTR分型包括新建Panel、新建GeneMapper Manager、新建Size Standards和点击打开GeneMapper IDv3.2软件。优选地，所述新建Panel其使用方法为点击Tools在下拉菜单中选中Panel Manager,在跳出的窗口的File下拉菜单中点击New Kit，编辑、分析方法名如MAOA,选中MAOA，新建New Marker编辑片段名、大小区域。优选地，所述新建GeneMapper Manager其使用方法为点击Tools在下拉菜单中选中GeneMapper Manager,在跳出的窗口中点击analysis method点击New命名如MAOA，选中编好的Panel,点OK。优选地，所述新建Size Standards其使用方法为点击Tools在下拉菜单中选中GeneMapper Manager,在跳出的窗口中点击Size Standards点击New命名如MAOA-liz,根据PP试剂盒的LIZ进行编写，点击OK。优选地，所述点击打开GeneMapper IDv3.2软件进一步包括在跳出的窗口的File下拉菜单中点击Add Samples to Project,在新跳出的窗口中找到待分析的文件名并点击，这时左下角Add to List按钮变蓝，点击，Samples To Add栏出现待分析的文件名，点击右下角变蓝的Add按钮，待分析的样品就出现在新跳出的窗口中；在Panel列选择所应用的扩增系统，在Size Standard列选择所应用的电泳程序，在Analysis Method列选择分析的条件，然后点击分析，得到数字化的VNTR基因分型。本专利技术的有益效果是：建立的MAOAμ-VNTR多态性荧光标记自动分型方法分型效率高，全自动毛细管电泳能更准确的进行MAOAμ-VNTR基因分型，且具有样品处理简单、自动化程度高、检测时间短等优势,结果准确可靠，操作简便，在针对MAOAμ-VNTR多态性的相关研究中具有良好的应用前景。以下将结合附图对本专利技术的构思、具体结构及产生的技术效果作进一步说明，以充分地了解本专利技术的目的、特征和效果。附图说明图1是本专利技术的方法流程示意图；图2是本专利技术GeneMapper IDv3.2软件进行VNTR分型使用流程图。具体实施方式以下结合附图对本专利技术的实施例进行详细说明，但是本专利技术可以有权利要求限定和覆盖的多种不同方式实施。如图1所示,一种MAOAμ-VNTR荧光标记自动分型方法，其方法步骤为：(1)样本及DNA提取；(2)PCR扩增；(4)3130型遗传分析仪进行毛细管电泳；(4)GeneMapper IDv3.2软件进行VNTR分型。进一步的，所述样本及DNA提取还包括720份云南汉族无关个体的指尖血,一部分取自于本实验室日常检案,另一部分取自红河州看守所羁押人员，使用FTA卡或中速滤纸采集,用chelex-100法进行DNA提取。进一步的，所述PCR扩增包括用BIO-RAD T100TM梯度PCR仪优化选择PCR反应条件,最终确定扩增反应体积为10μL,内含1～10ngDNA模板,PCR混合物(天根)5μL,0.8μmol/L PCR引物,正向引物:5'-ACAGCCTGACCGTGGAGAAG-3'，反向引物:5'-GAACGGACGCTCCATTCGGA-3'，且正向引物5'端用FAM荧光标记；所述扩增反应的循环参数为:95℃5min预变性,94℃30s,60℃30s,72℃40s,循环30次,最后延伸为72℃5min。进一步的，所述3130型遗传分析仪进行毛细管电泳包括取Hi-Di甲酰胺1000μL加入1.5mlEP管，再加入GS-500LIZ分子量标记60μL，反复混匀，每孔加两者的混合物9μL。加样后打开3130型遗传分析仪，将样品板放入仪器内的托盘内。进一步的，其使用方法为(1)点击打开3130Foundation Data Col lection3.0软件；(2)在Plate manager窗口编写样品表；(3)然后切换到Run Scheduler的plate view窗口，找到待电泳的样品表并与放样品的样品盘链接：(4)点击上方的三角形进行电泳。实施案例一，所述GeneMapper IDv3.2软件进行VNTR分型包括新建Panel、新建GeneMapper Manager、新建Size Standards和点击打开GeneMapper IDv3.2软件。所述新建Panel其使用方法为点击T本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种MAOAμ‑VNTR荧光标记自动分型方法，其特征在于：其方法步骤为：(1)样本及DNA提取；(2)PCR扩增；(4)3130型遗传分析仪进行毛细管电泳；(4)GeneMapper IDv3.2软件进行VNTR分型。
【技术特征摘要】
1.一种MAOAμ-VNTR荧光标记自动分型方法，其特征在于：其方法步骤为：(1)样本及DNA提取；(2)PCR扩增；(4)3130型遗传分析仪进行毛细管电泳；(4)GeneMapper IDv3.2软件进行VNTR分型。2.如权利要求1所述的一种MAOAμ-VNTR荧光标记自动分型方法，其特征在于：所述样本及DNA提取还包括720份云南汉族无关个体的指尖血,一部分取自于本实验室日常检案,另一部分取自红河州看守所羁押人员，使用FTA卡或中速滤纸采集,用chelex-100法进行DNA提取。3.如权利要求1所述的一种MAOAμ-VNTR荧光标记自动分型方法，其特征在于：所述PCR扩增包括用BIO-RAD T100TM梯度PCR仪优化选择PCR反应条件,最终确定扩增反应体积为10μL,内含1～10ngDNA模板,PCR混合物(天根)5μL,0.8μmol/L PCR引物,正向引物:5'-ACAGCCTGACCGTGGAGAAG-3'，反向引物:5'-GAACGGACGCTCCATTCGGA-3'，且正向引物5'端用FAM荧光标记；所述扩增反应的循环参数为:95℃5min预变性,94℃30s,60℃30s,72℃40s,循环30次,最后延伸为72℃5min。4.如权利要求1所述的一种MAOAμ-VNTR荧光标记自动分型方法，其特征在于：所述3130型遗传分析仪进行毛细管电泳包括取Hi-Di甲酰胺1000μL加入1.5mlEP管，再加入GS-500LIZ分子量标记60μL，反复混匀，每孔加两者的混合物9μL。加样后打开3130型遗传分析仪，将样品板放入仪器内的托盘内。5.如权利要求4所述的一种MAOAμ-VNTR荧光标记自动分型方法，其特征在于：其使用方法为(1)点击打开3130Foundation Data Collection3.0软件；(2)在Plate manager窗口编写样品表；(3)然后切换到Run Scheduler的plate view窗口，找到待电泳的样品表并与放样品的样品盘链接：(4)点击上方的三角形进行电泳。6.如权利要求1所述的一种MAOAμ...
【专利技术属性】
技术研发人员：聂胜洁，聂爱婷，胡利平，顾涛，张秀峰，张素仙，胡万芹，杜雷，饶旼，王美芬，
申请(专利权)人：昆明医科大学，
类型：发明
国别省市：云南;53
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