The invention belongs to the technical field of medicine, and provides a method for separating and purifying the reduced glutathione degradation product F, as well as the use of the contrast substance in the detection of the related substances of reduced glutathione. The water soluble glutathione, first using MCI GEL self column loading initial separation, and then prepared for liquid chromatography second isolated and purified by high pressure system, purity testing of SM-C18 column high performance liquid chromatography, obtained high purity F glutathione degradation products. The high purity glutathione degradation product F prepared by the invention can be used as an impurity reference substance and is used for checking the related substances of reduced glutathione.
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于医药
,具体涉及还原型谷胱甘肽降解产物F的分离纯化方法,即(2S)-2-氨基-4-[1-(羧甲基)氨甲酰基-(2R)-2-亚磺酰乙基氨甲酰基]丁酸的分离纯化方法,以及其在还原型谷胱甘肽有关物质检测中作为杂质对照品的用途。
技术介绍
还原型谷胱甘肽为自然界广泛存在的含有巯基(-SH)的三肽,化学名为N-(N-L-γ-谷氨酰基-L-半胱氨酰基)甘氨酸,结构式如下:还原型谷胱甘肽通过生物发酵技术所得,属于含有巯基(-SH)的三肽化合物,其在自然界中亦广泛存在,主要存在于细胞质中,在多种细胞生化功能中起作用。还原型谷胱甘肽是甘油醛磷酸脱氢酶的辅基,又是乙二醛酶及磷酸丙糖脱氢酶的辅酶,参与体内三羧酸循环及糖代谢。它能激活体内SH酶等,促进碳水化合物、脂肪及蛋白质的代谢。还原型谷胱甘肽还可通过巯基与体内的自由基结合,促进易代谢的低毒化合物的形成,因此对部分外源性毒性物质具有减毒作用。还原型谷胱甘肽的水溶性好,可口服,也可肌肉注射或静脉滴注给药,因其具有疗效确切、副作用小的特点而被国内外广泛应用于临床。近年来,还原型谷胱甘肽制剂有关的不良反应亦有报道,主要不良反应表现为:偶见脸色苍白,血压下降,脉搏异常等类过敏症状,应停药;偶见皮疹等过敏症状,应停药;偶有食欲不振、恶心、呕吐、胃痛等消化道症状,注射局部轻度疼痛,停药后消失。还原型谷胱甘肽引起不良反应的机制尚不明确,医护人员和药品生产经营企业应关注还原型谷胱甘肽相关制剂的不良反应,探究其不良反应发生机制,提高药物质量,保证用药安全。药品中的杂质按化学类别和性质一般分为三类:有机杂质、无机杂质及残留溶 ...
【技术保护点】
一种还原型谷胱甘肽降解产物F的分离纯化方法,包括以下步骤:(1)溶解:取还原型谷胱甘肽,加水溶解制成每1ml约含400mg的溶液;(2)第一次分离纯化:将步骤(1)所得溶液以中压色谱分离凝胶为固定相的自装层析柱进行初步分离,柱床直径为4~6cm,高度为60~100cm,平均粒径为70~150μm,洗脱剂为纯化水;以键合阴、阳离子配体的多模式色谱柱检测洗脱流分,流动相为三氟乙酸水溶液,紫外检测器在线检测,检测波长为200~210nm,根据检测结果合并洗脱流分;(3)第二次分离纯化:将步骤(2)所得洗脱流分采用高压制备液相色谱进行第二次洗脱分离,动态轴向压缩柱的填料为十八烷基硅烷键合硅胶微球,流动相为三氟乙酸水溶液,根据在线色谱图收集含有降解产物F的洗脱流分,合并洗脱流分;(4)冷冻干燥:用冻干法处理步骤(3)所得洗脱流分,即得降解产物F。
【技术特征摘要】
1.一种还原型谷胱甘肽降解产物F的分离纯化方法,包括以下步骤:(1)溶解:取还原型谷胱甘肽,加水溶解制成每1ml约含400mg的溶液;(2)第一次分离纯化:将步骤(1)所得溶液以中压色谱分离凝胶为固定相的自装层析柱进行初步分离,柱床直径为4~6cm,高度为60~100cm,平均粒径为70~150μm,洗脱剂为纯化水;以键合阴、阳离子配体的多模式色谱柱检测洗脱流分,流动相为三氟乙酸水溶液,紫外检测器在线检测,检测波长为200~210nm,根据检测结果合并洗脱流分;(3)第二次分离纯化:将步骤(2)所得洗脱流分采用高压制备液相色谱进行第二次洗脱分离,动态轴向压缩柱的填料为十八烷基硅烷键合硅胶微球,流动相为三氟乙酸水溶液,根据在线色谱图收集含有降解产物F的洗脱流分,合并洗脱流分;(4)冷冻干燥:用冻干法处理步...
【专利技术属性】
技术研发人员:陈佳江,钟家庆,吴佳,李睿,李雪,
申请(专利权)人:重庆药友制药有限责任公司,
类型:发明
国别省市:重庆;50
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