同时检测多种混合感染病毒的方法技术

技术编号:1752227 阅读:369 留言:0更新日期:2012-04-11 18:40
本发明专利技术公开了一种同时检测多种混合感染病毒的方法,包括以下步骤:1)获取待检测病毒的核酸序列,再分别在每种病毒的保守区内设计紧密相连的两条寡核苷酸鉴别探针;2)设计通用引物以及完全互补的Zip  Code和cZipCode;3)将上游探针和下游探针与待检样品靶标核酸一起进行连接酶检测反应,得连接产物;4)用互补上游通用引物和下游通用引物扩增并标记连接产物,纯化后与通用基因芯片在50℃杂交2小时;5)杂交后用芯片扫描仪扫描,经软件分析获得杂交信号强度,从而得知混合感染病毒情况。使用本发明专利技术的方法能对任何的不同科、属和种的病原物进行检测和鉴定。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及多种微生物的检测方法,尤其涉及一种用于寡核苷酸芯片检 测的新型多种混合感染猪病毒核酸扩增方法。技术背景随着养猪业的发展,猪传染病的发生和流行成为制约养猪生产的重要因 素。目前我国猪传染病流行的主要特征是多病原混合感染,繁殖障碍性传 染病和呼吸传染病普遍存在。而病毒性感染在猪繁殖障碍病和猪呼吸道疾病 的发生和流行中扮演着重要角色,因此建立相关病毒的有效检测手段,对制 定切实可行的疫病防治措施有重要的意义。目前,病毒核酸的检测用于猪病毒病诊断具有快速、敏感的特点,在病毒 的检测中越来越受到重视。但这些方法一次试验只能检测样品中一种病毒,尽管人们采用多重RT-PCR/PCR的方法可以对几种病原生物进行检测,但是由 于PCR方法本身的局限性,目前报道的多重PCR最多只能针对10个靶标,不可 能实现对病原生物高通量的检测,在遇到混合感染和样品数量较多时,显得 力不从心,不能在短时间内提供检测结果。因此有必要建立一种同步检测和 鉴别诊断功能的快速、灵敏、高效的诊断方法。基因芯片(gene chip)技术在1991年的《科学》(Science)杂志上被首次 提出,是20世纪90本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种同时检测多种混合感染病毒的方法,其特征在于包括以下步骤:    1)、获取待检测病毒的核酸序列,利用相应软件对每种病毒的各个株系的核酸序列进行序列比对,从而获得每种病毒的保守区;再分别在每种病毒的保守区内设计紧密相连的两条寡核苷酸鉴别探针,即上游鉴别探针和下游鉴别探针,所述上游鉴别探针和下游鉴别探针是一对首尾相连并与各自的靶序列互补的寡聚核苷酸;    2)、设计通用引物以及完全互补的Zip  Code和cZip  Code,所述通用引物由上游通用引物和下游通用引物组成:    所述Zip  Code和通用引物均是根据大小和空间结构设计的彼此相互之间以及与靶序列均无同源性且不形成稳定空间结...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员:姜永厚徐辉商晗武竺锡武赵灵燕陈伟杰丁先锋
申请(专利权)人:浙江理工大学浙江省畜牧兽医局
类型:发明
国别省市:86[中国|杭州]

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