一种豉香型白酒中氨基甲酸乙酯含量的检测方法技术

本发明专利技术公开了一种豉香型白酒中EC含量的检测方法，该方法包括样品的前处理步骤及LC‑MS检测步骤；所述样品的前处理步骤中按如下步骤制备样品：吸取1mL样品置于10mL容量瓶中，加入100μL1000μg/L的氨基甲酸丁酯内标，用蒸馏水定容至10mL，混匀，经0.22μm有机滤膜过滤，滤液供LC‑MS测定；所述LC‑MS检测步骤中采用液相色谱‑质谱仪对滤液进行氨基甲酸乙酯含量的测定。本发明专利技术公开的检测方法中样品经过蒸馏水稀释、微孔滤膜过滤后直接进样上机，简化了样品的前处理过程，提高了方法的回收率及检测结果的稳定性。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于分析化学领域，涉及白酒中微量成分的分析检测，具体公开了豉香型白酒中氨基甲酸乙酯的液相色谱-质谱检测方法，该检测方法可以省去样品前处理过程中有机溶液的使用，简化样品的前处理过程，提高检测结果的准确度和灵敏度。
技术介绍
氨基甲酸乙酯(简称EC)，是食品发酵和贮藏过程中产生的天然物质，广泛存在于发酵酒、酸乳酪、酱油等发酵制品中。氨基甲酸乙酯具有遗传毒性和致癌性，2007年，国际癌症研究机构(IARC)已正式将EC归类为2A类致癌物(即人类可能致癌物)。目前国内外关于EC检测的现有标准方法主要有AOAC Official Method 994.7、SN/T0285-2012(出入境检验检疫行业标准)、及GB5009.223-2014(食品安全国家标准)。按检测方法来分，主要有气相色谱质谱外标法、气相色谱质谱内标法和液相色谱荧光法。气相色谱质谱内标法相对气相色谱质谱外标法来说，方法的准确度和稳定性有所提高，但是气相色谱质谱法均存在前处理繁琐、耗时长、试剂损耗大等问题。液相色谱荧光法操作简单、快速，但是准确度和定量均不好。
技术实现思路
本专利技术公开了一种豉香型白酒中氨基甲酸乙酯含量的检测方法，该方法通过简化样品的前处理过程，可以快速、准确的对豉香型白酒中的微量氨基甲酸乙酯进行定量分析，降低了检测成本，节约了检测时间，提高了检测方法的回收率及检测结果的稳定性。本专利技术公开的豉香型白酒中氨基甲酸乙酯含量的检测方法包括以下步骤：(1)量取一定体积的白酒样品，加入一定浓度的内标物氨基甲酸丁酯，用蒸馏水定容，过滤膜。(2)取过滤后的样品直接进样上机(液相色谱-质谱仪)，选择质子化氨基甲酸乙酯分子离子89.9m/z、氨基甲酸丁酯分子离子118m/z为定量离子进行检测，经标准曲线计算后得到样品中氨基甲酸乙酯的含量。(3)液相色谱条件：色谱柱：Poroshell 120EC-C18，3.0×50mm，2.7-micron；流动相：A相为0.1％(v/v)乙酸水溶液，B相为乙腈；流速：0.25mL/min；梯度洗脱程序：0min，95％A，5％B；1min，90％A，10％B；2.5min，15％A，85％B；2.8min，95％A，5％B；(后运行时间：7.2min)柱温：40℃；进样量：10μL。(4)质谱条件：离子源：电喷雾离子源；扫描方式：正离子扫描；检测方式：多反应监测；毛细管电压：3100V；离子源温度：350℃；流速：10.8L/min；氨基甲酸乙酯定性离子：89.9m/z；62.2m/z；氨基甲酸丁酯定性离子：118m/z；62.2m/z。本专利技术相比现有技术有益的技术效果：(1)样品前处理简单，无需使用有机溶剂，污染小。以下为各种常用检测方法的前处理比对：气相色谱质谱外标法(SN/T 0285-2012)：样品经二氯甲烷提取、水浴浓缩后，用乙腈进行溶解，过后还需进行正己烷净化、PSA萃取；气相色谱质谱内标法(GB5009.223-2014)：样品经碱性硅藻土固相萃取后，进行脱水、氮吹浓缩，后用甲醇复溶解；液相色谱荧光法：样品需用占顿醇溶液-盐酸溶液进行衍化；本专利技术公开的检测方法：蒸馏水稀释，微孔滤膜过滤。(2)上机检测时间短，效率高。以下为各种常用检测方法的上样检测时间比对：气相色谱质谱外标法(SN/T 0285-2012)：51分钟；气相色谱质谱内标法(GB5009.223-2014)：40分钟；液相色谱荧光法：30分钟；本专利技术公开的检测方法：10分钟。(3)方法灵敏度高，检出限低。以下为各种常用检测方法的最低定量检出限比对：气相色谱质谱外标法(SN/T 0285-2012)：10μg/kg；气相色谱质谱内标法(GB5009.223-2014)：2.0μg/kg；液相色谱荧光法：5.0μg/L；本专利技术公开的检测方法：0.75μg/L。(4)方法稳定性及重复性较好。由于本专利技术公开的检测方法中，样品只需要用蒸馏水稀释定容，过滤膜，即可上机检测，降低了样品在萃取过程中的丢失及破坏，最大程度的保证了样品的完整性，提高了方法的回收率。方法前处理过程简单、易操作，也因此提高了方法的稳定性及重复性。以下结合说明书附图和具体实施方式对本专利技术的检测方法及检测效果进行详细说明。附图说明图1：EC浓度为1～50μg/L的标准曲线图；图2：浓度均为10μg/L的氨基甲酸乙酯、氨基甲酸丁酯标准品提取离子轮廓图；图3：样品中氨基甲酸乙酯提取离子轮廓图。具体实施方式1、标准溶液的制备氨基甲酸乙酯储备液(100μg/mL)：准确称取10mg氨基甲酸乙酯标准品，用甲醇溶解、定容至100mL，置于4℃冰箱中保存。氨基甲酸丁酯储备液(100μg/mL)：准确称取10mg氨基甲酸丁酯标准品，用甲醇溶解、定容至100mL，置于4℃冰箱中保存。氨基甲酸乙酯中间液(1000μg/L)：准确吸取氨基甲酸乙酯储备液(100μg/mL)1mL，用甲醇-水(1：9v/v)溶液定容至100mL，4℃冰箱中保存。氨基甲酸丁酯中间液(1000μg/L)：准确吸取氨基甲酸丁酯储备液(100μg/mL)1mL，用甲醇-水(1：9v/v)溶液定容至100mL，4℃冰箱中保存。标准曲线工作溶液：分别吸取氨基甲酸乙酯中间液(1000μg/L)10μL、20μL、50μL、100μL、200μL、500μL于6个10mL容量瓶中，再分别加入氨基甲酸丁酯中间液(1000μg/L)100μL，用蒸馏水定容至刻度，得到1μg/L、2μg/L、5μg/L、10μg/L、20μg/L、50μg/L，内标氨基甲酸丁酯为10μg/L的标准曲线工作溶液，现配现用。2、样品的前处理吸取1mL样品置于10mL容量瓶中，加入100μL 1000μg/L的氨基甲酸丁酯内标，用蒸馏水定容至10mL，混匀，经0.22μm有机滤膜过滤，滤液供LC-MS测定。3、液相色谱-质谱检测(1)液相色谱条件：色谱柱：Poroshell 120EC-C18，3.0×50mm，2.7-micron；流动相：A相为0.1％(v/v)乙酸水溶液，B相为乙腈；流速：0.25mL/min；梯度洗脱程序：0min，95％A，5％B；1min，90％A，10％B；2.5min，15％A，85％B；2.8min，95％A，5％B；(后运行时间：7.2min)柱温：40℃；进样量：10μL。(2)质谱条件：离子源：电喷雾离子源；扫描方式：正离子扫描；检测方式：多反应监测；毛细管电压：3100V；离子源温度：350℃；流速：10.8L/min；氨基甲酸乙酯定性离子：89.9m/z；62.2m/z；氨基甲酸丁酯定性离子：118m/z；62.2m/z；(3)标准曲线的制作将浓度为1μg/L、2μg/L、5μg/L、10μg/L、20μg/L、50μg/L的标准曲线工作溶液(内含10μg/L氨基甲酸丁酯的内标)进行液相色谱质谱法检测。以氨基甲酸乙酯浓度为横坐标、氨基甲酸乙酯的峰面积与氨基甲酸丁酯的峰面积之比为纵坐标，绘制如图1的标准曲线。对标准曲线进行线性回归分析，得到标准曲线的回归方程：y＝2.274555x-0.004084本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种豉香型白酒中氨基甲酸乙酯含量的检测方法，包括：样品的前处理步骤，量取一定体积的白酒样品，加入一定浓度的内标物氨基甲酸丁酯，用蒸馏水定容，过滤膜，滤液供LC‑MS测定；液相色谱‑质谱仪检测步骤，滤液直接进样上机，选择质子化氨基甲酸乙酯分子离子89.9m/z、氨基甲酸丁酯分子离子118m/z为定量离子进行检测，经标准曲线计算后得到样品中氨基甲酸乙酯的含量。

【技术特征摘要】
1.一种豉香型白酒中氨基甲酸乙酯含量的检测方法，包括：样品的前处理步骤，量取一定体积的白酒样品，加入一定浓度的内标物氨基甲酸丁酯，用蒸馏水定容，过滤膜，滤液供LC-MS测定；液相色谱-质谱仪检测步骤，滤液直接进样上机，选择质子化氨基甲酸乙酯分子离子89.9m/z、氨基甲酸丁酯分子离子118m/z为定量离子进行检测，经标准曲线计算后得到样品中氨基甲酸乙酯的含量。2.根据权利要求1所述的豉香型白酒中氨基甲酸乙酯含量的检测方法，其特征在于：所述样品的前处理步骤中按如下步骤制备样品：吸取1mL样品置于10mL容量瓶中，加入100μL1000μg/L的氨基甲酸丁酯内标，用蒸馏水定容至10mL，混匀，经0.22μm有机滤膜过滤。3.根据权利要求1所述的豉香型白酒中氨基甲酸乙酯含量的检测方法，其特征在于：所述液相色谱-质谱仪检测步骤中，液相色谱条...

【专利技术属性】
技术研发人员：郭波，郑扬韵，孙心恒，
申请(专利权)人：广东石湾酒厂集团有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44