一种杜仲生物发酵复合菌饲料添加剂的制备方法技术

一种杜仲生物发酵复合菌饲料添加剂的制备方法，其是以枯草芽孢杆菌、地衣芽孢菌和粪肠球菌三种益生菌分别配制成三种液体发酵液，并根据益生菌不同的生化特征，采取错峰接种发酵的程序，依次接种于以杜仲叶、构树叶、苹果渣和麸皮四种天然可再生植物资源为原料的固体培养基中，一次性完成固体发酵的复合饲料添加剂。同时超前将人用药品G、M、P的生产和质量规范贯穿于产品生产的全过程，防止生产环境和设备对产品造成污染，使三种益生菌和四种天然可再生植物资源的营养成分和生物功效，得到充分的释放和互利互补。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于饲料领域，特别是涉及一种杜仲生物发酵复合菌饲料添加剂的制备方法。
技术介绍
在现代化养殖中，饲料添加剂的使用十分广泛。现有的饲料添加 剂绝大部分含有化学合成药物、抗生素、激素等，这类添加剂虽然具有预防疾病、促进生长等作用，但长期使用副作用大，如产生抗药性、降低动物疾病防治效果，而且会在肉、蛋、奶及环境中产生药物残留，影响人体健康。由于中草药副作用小、 不易产生有害残留，中草药饲料添加剂的研究开发已成热点。一般来说，现有的中草药饲料添加剂中中草药种类较多，配制相对繁琐，而且由于中草药未经处理，有效成份不易被吸收。杜仲为传统中草药，其药用和保健价值已被广泛认识，在饲料中添加杜仲已 有记载，但由于现有技术中的杜仲叶未经提纯和灭菌处理，畜禽难以充分吸收杜仲叶中 地有效成份，其对畜禽的抗病、治疗作用难以充分体现。饲料添加剂抗生素的危害日益显现，受到社会的广泛关注，寻求一种替代品和替代技术，既能保证畜牧业的生产效益不受影响，又能达到食品安全的标准是极需研究的课题。这方面当前研究的聚焦点，一是被广为利用的微生态制剂及其代谢产物。二是从我国丰富的中药材宝库中挖掘潜力。本专利技术是在以上研究多项专利技术专利的基础上，结合实际应用方面存在的利弊，为使生产成本更低，实际应用效果更佳，可操作性更强，加以改进后产生的一种新型杜仲生物发酵复合菌饲料添加剂。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种杜仲生物发酵复合菌饲料添加剂的制备方法。基于上述目的，本专利技术采取如下技术方案：一种杜仲生物发酵复合菌饲料添加剂的制备方法，包括如下步骤：（1）制备固体培养基，固体培养基由下述质量百分含量的物质组成：杜仲叶40目粗粉30-40%，构树叶40目粗粉20-30%，苹果渣40目粗粉15-20%，麸皮5-10%，碳酸钙1-2%，纯净水3-8%；所得固体培养基 pH为7.0-7.2，118℃-121℃蒸汽灭菌25-30min，冷却至37℃-40℃；（2）在固体培养基上接种四级枯草芽孢杆菌的发酵液，在37-40℃发酵8-10h后，接种四级地衣牙孢杆菌的发酵液，在37-40℃发酵8-10h后，接种四级粪肠球菌的发酵液，在37-40℃发酵18-24h，全程固体发酵时间控制在42-48h，三种菌发酵液的接种总量均为固体培养基体积的10%-15%且三种菌发酵液的接种量相同；（3）将发酵好的物料转入沸腾干燥间，控制沸腾干燥温度40℃-44℃，待物料水分≤7%时，即可取样送检，检验合格后按规定分装和包装。其中，四级枯草芽孢杆菌的发酵液液体培养基配方和发酵工艺参数为：蛋白胨1-3%，牛肉膏0.3-0.5%，氯化钠0.3-0.5%，硫酸铵0.03-0.05%，以上原料均为质量百分比，每10L培养液需添加杜仲叶提取液115~125mL，培养液调pH为6.8-7.0，按照体积百分比5-10%进行接种，37℃-40℃培养，培养时间为一、二级培养22-24h，三级培养16-18h，四级培养20-24h；四级地衣牙孢杆菌的发酵液液体培养基配方和发酵工艺参数为：蛋白胨1-3%，牛肉膏0.1-0.5%，氯化钠0.1-0.5%，以上原料均为质量百分比，每10L培养液需添加杜仲叶提取液115~125mL，调pH7.0-7.2，按照体积百分比5-10%进行接种，37℃-40℃培养，培养时间为一、二级培养22-24h，三级培养16-18h，四级培养24-28h；四级粪肠球菌的发酵液液体培养基配方和发酵工艺参数为：蛋白胨2-4%，牛肉膏0.1-0.5%，氯化钠0.1-0.5%，一、二级培养用乳糖2-5%，三、四级培养用葡萄糖2-4%，三、四级培养用碳酸钙0.5-1.5%，以上原料均为质量百分比，每10L培养液需添加杜仲叶提取液115~125mL，调pH7.0-7.2，按照体积百分比5-10%进行接种，37℃-40℃培养，培养时间为一、二级培养22-24h，三、四级培养16-18h；其中，所述杜仲叶提取液的制备方法为：将合格的杜仲新鲜干叶称取500克，先加水500ml浸润1小时，再加2500ml水进行第一次浸泡提取1小时，浸润和浸泡温度均为60-80℃，分离浸泡提取液，对分离出来的杜仲叶再加2000ml水进行第二次浸泡提取，浸泡温度60-80℃，浸泡时间1小时，合并两次浸泡提取液即得。进一步地，四级枯草芽孢杆菌的发酵液的制备方法如下：1）培养基的制备：按照上述配方称取相应原料，混合均匀后加水进行定容，并分别置于15×150mm试管（一级培养用）、250ml三角瓶（二级培养用）、3000ml圆底烧瓶（三级培养用）中，培养基的装入量分别9ml、175ml、1000ml，控制灭菌温度118~121℃，灭菌时间25~30min，灭菌后分别冷却至室温置于冰箱冷藏备用或直接供接、转种使用；2）液体菌种制备：取生产用枯草芽孢杆菌斜面菌种1支，按无菌操作要求接种一级试管，经37℃-40℃恒温培养22-24小时，一级试管菌种成熟后转种二级三角瓶，同样经37℃-40℃恒温培养22-24小时，二级三角瓶菌种成熟后转种三级圆底烧瓶、三级圆底烧瓶菌种经37℃-40℃恒温培养16-18小时成熟后采用火焰接种法转种四级30L不锈钢种子罐；在9L液体培养基中保持培养发酵温度37~40℃，间隔1小时搅拌5-10分钟，培养发酵时间20-24小时，四级30L不锈钢种子罐菌种成熟后接种于前述灭菌后的固体培养基中。四级地衣芽孢杆菌的发酵液的制备方法如下：1）培养基的制备：按照上述配方称取相应原料，混合均匀后加水进行定容，并分别置于15×150mm试管（一级培养用）、250ml三角瓶（二级培养用）、3000ml圆底烧瓶（三级培养用）中，培养基的装入量分别9ml、175ml、1000ml，控制灭菌温度118~121℃，灭菌时间25~30min，灭菌后分别冷却至室温置于冰箱冷藏备用或直接供接、转种使用；2）液体菌种制备：取生产用地衣芽孢杆菌斜面菌种1支，按无菌操作要求接种一级试管，经37℃-40℃恒温培养22-24小时，一级试管菌种成熟后转种二级三角瓶，同样经37℃-40℃恒温培养22-24小时，二级三角瓶菌种成熟后转种三级圆底烧瓶、三级圆底烧瓶菌种经37℃-40℃恒温培养16-18小时成熟后采用火焰接种法转种四级30L不锈钢种子罐；在9L液体培养基中保持培养发酵温度37~40℃，培养发酵时间24~28小时，四级30L不锈钢种子罐菌种成熟后接种于前述灭菌后的固体培养基中。四级粪肠球菌的发酵液的制备方法如下：1）培养基的制备：按照上述配方称取相应原料，混合均匀后加水进行定容，并分别置于15×150mm试管（一级培养用）、250ml三角瓶（二级培养用）、3000ml圆底烧瓶（三级培养用）中，培养基的装入量分别9ml、175ml、1000ml，控制灭菌温度118~121℃，灭菌时间25~30min，灭菌后分别冷却至室温置于冰箱冷藏备用或直接供接、转种；2）液体菌种制备：取生产用地衣芽孢杆菌斜面菌种1支，按无菌操作要求接种一级试管，经37℃-40℃恒温培养22-24小时，一级试管菌种成熟后转种二级三角瓶，同样经37℃-40℃恒温培养22-24小时，二级三角瓶菌种成熟后转种三级圆底烧瓶、三级圆底烧瓶菌种经37℃-40℃恒温培养16-18本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种杜仲生物发酵复合菌饲料添加剂的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：（1）制备固体培养基，固体培养基由下述质量百分含量的物质组成：杜仲叶40目粗粉30‑40%，构树叶40目粗粉20‑30%，苹果渣40目粗粉15‑20%，麸皮5‑10%，碳酸钙1‑2%，纯净水3‑8%；所得固体培养基 pH为7.0‑7.2，118℃‑121℃蒸汽灭菌25‑30min，冷却至37℃‑40℃；（2）在固体培养基上接种四级枯草芽孢杆菌的发酵液，在37‑40℃发酵8‑10h后，接种四级地衣牙孢杆菌的发酵液，在37‑40℃发酵8‑10h后，接种四级粪肠球菌的发酵液，在37‑40℃发酵18‑24h，全程固体发酵时间控制在42‑48h，三种菌发酵液的接种总量均为固体培养基体积的10%‑15%且三种菌发酵液的接种量相同；（3）将发酵好的物料转入沸腾干燥间，控制沸腾干燥温度40℃‑44℃，待物料水分≤7%时，即可取样送检，检验合格后按规定分装和包装。

【技术特征摘要】
1.一种杜仲生物发酵复合菌饲料添加剂的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：（1）制备固体培养基，固体培养基由下述质量百分含量的物质组成：杜仲叶40目粗粉30-40%，构树叶40目粗粉20-30%，苹果渣40目粗粉15-20%，麸皮5-10%，碳酸钙1-2%，纯净水3-8%；所得固体培养基 pH为7.0-7.2，118℃-121℃蒸汽灭菌25-30min，冷却至37℃-40℃；（2）在固体培养基上接种四级枯草芽孢杆菌的发酵液，在37-40℃发酵8-10h后，接种四级地衣牙孢杆菌的发酵液，在37-40℃发酵8-10h后，接种四级粪肠球菌的发酵液，在37-40℃发酵18-24h，全程固体发酵时间控制在42-48h，三种菌发酵液的接种总量均为固体培养基体积的10%-15%且三种菌发酵液的接种量相同；（3）将发酵好的物料转入沸腾干燥间，控制沸腾干燥温度40℃-44℃，待物料水分≤7%时，即可取样送检，检验合格后按规定分装和包装。2.根据权利要求1所述的杜仲生物发酵复合菌饲料添加剂的制备方法，其特征在于，四级枯草芽孢杆菌的发酵液液体培养基配方和发酵工艺参数为：蛋白胨1-3%，牛肉膏0.3-0.5%，氯化钠0.3-0.5%，硫酸铵0.03-0.05%，以上原料均为质量百分比，每10L培养液需添加杜仲叶提取液115~125mL，培养液调pH为6.8-7.0，按照体积百分比5-10%进行接种，37℃-40℃培养，培养时间为一、二级培养22-24h，三级培养16-18h，四级培养20-24h；四级地衣牙孢杆菌的发酵液液体培养基配方和发酵工艺参数为：蛋白胨1-3%，牛肉膏0.1-0.5%，氯化钠0.1-0.5%，以上原料均为质量百分比，每10L培养液需添加杜仲叶提取液115~125mL，调pH7.0-7.2，按照体积百分比5-10%进行接种，37℃-40℃培养，培养时间为一、二级培养22-24h，三级培养16-18h，四级培养24-28h；四级粪肠球菌的发酵液液体培养基配方和发酵工艺参数为：蛋白胨2-4%，牛肉膏0.1-0.5%，氯化钠0.1-0.5%，一、二级培养用乳糖2-5%，三、四级培养用葡萄糖2-4%，三、四级培养用碳酸钙0.5-1.5%，以上原料均为质量百分比，每10L培养液需添加杜仲叶提取液115~125mL，调pH7.0-7.2，按照体积百分比5-10%进行接种，37℃-40℃培养，培养时间为一、二级培养22-24h，三、四级培养16-18h；其中，所述杜仲叶提取液的制备方法为：将合格的杜仲新鲜干叶称取500克，先加水500ml浸润1小时，再加2500ml水进行第一次浸泡提取1小时，浸润和浸泡温度均为60-80℃，分离浸泡提取液，对分离出来的杜仲叶再加2000ml水进行第二次浸泡提取，浸泡温度60-80℃，浸泡时间1小时，合并两次浸泡提取液即得。3.根据权利要求2所述的杜仲生物发酵复合菌饲料添加剂的制备方法，其特征在于，四级枯草芽孢杆菌的发酵液的制备方法如下：1）培养基的制备：按照上述配方称取相应原料，混合均匀后加水进行定容，并...

【专利技术属性】
技术研发人员：孔向军，邹吉祥，苏印泉，孔艳华，王淑霞，王正泽，马权辉，陈合强，
申请(专利权)人：灵宝市帅华牧业有限责任公司，
类型：发明
国别省市：河南;41