一种iTRAQ技术筛选心肌梗死疾病表达蛋白的方法技术

本发明专利技术公开了一种iTRAQ技术筛选心肌梗死疾病表达蛋白的方法，通过同位素标记相对和绝对定量蛋白质组学技术筛选早期心肌梗死疾病患病人群血清中差异表达的蛋白质，通过对两组标记后的血清样品的质谱结果进行单样本T检验分析，找到6个高表达的蛋白，1个为正常组中高表达，5个为早期心肌梗死疾病组中高表达。其中，在疾病组中Leucine‑rich alpha‑2‑glycoprotein蛋白覆盖度和唯一肽段数最高，通过肽段数据的分析证实其肽段也存在显著差异，经过基因本体功能注释分析发现此蛋白可能与血栓形成等过程相关。本发明专利技术方法具有分辨率高、通量大、速度快等优势，为此类疾病蛋白标志物的筛选开辟了一条新的途径。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及生物检测
，具体是一种同位素标记相对和绝对定量蛋白质组学技术筛选心肌梗死疾病表达蛋白的方法。
技术介绍
心肌梗死(myocardial infarction MI)即心肌缺血性坏死，为在冠状动脉病变的基础之上，发生冠状动脉血供急剧减少或中断使得心肌严重而持久的缺血导致心肌坏死。此疾病具有发病急，不易察觉，病残病死率高等特点。目前心肌梗死患者呈现快速上升趋势，估计每年有250万例心肌梗死的发生，然而只有5％的患者得到及时合理的救治。因此开发出一种早期快速的诊断试剂对疾病的早期防治和降低疾病病发率，减少疾病的病残病死率有着最重要意义。现代临床诊断心肌梗死疾病主要通过肌钙蛋白(CTnI)、肌酸激酶同工酶(CKMB)、肌红蛋白(Myo)等生化标志物并结合心电图和影像学等证据。但这些生化标志物仅在病发时才能表现出异常，而在疾病早期并无明显变化。因此，寻找新的早期诊断标志物可以提前对此疾病进行防治，减少此类疾病的发生和发展。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种iTRAQ技术筛选心肌梗死疾病表达蛋白的方法，以解决上述
技术介绍
中提出的问题。本专利技术首次通过同位素标记相对和本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种iTRAQ技术筛选心肌梗死疾病表达蛋白的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)取正常组与心肌梗死疾病组血清，组内随机合并，将合并后样品使用去人血清高丰度柱依次去除各组高丰度蛋白质，低丰度蛋白质组分超滤浓缩后，进行蛋白质定量，将制备好的蛋白质样品进行分装，‑80℃保存备用；(2)取2组8个蛋白质样本各取250μg，各组加入等体积的蛋白质裂解液，沸水浴4～6min，冷却至室温；加入200μL尿素缓冲液混匀，转入10kd超滤离心管，离心14～16min；加入200μL尿素缓冲液离心14～16min，弃滤液；加入100μL碘乙酰胺缓冲液，600rpm振荡1min，避光室温25～35min，离心9～...

【技术特征摘要】
1.一种iTRAQ技术筛选心肌梗死疾病表达蛋白的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)取正常组与心肌梗死疾病组血清，组内随机合并，将合并后样品使用去人血清高丰度柱依次去除各组高丰度蛋白质，低丰度蛋白质组分超滤浓缩后，进行蛋白质定量，将制备好的蛋白质样品进行分装，-80℃保存备用；(2)取2组8个蛋白质样本各取250μg，各组加入等体积的蛋白质裂解液，沸水浴4～6min，冷却至室温；加入200μL尿素缓冲液混匀，转入10kd超滤离心管，离心14～16min；加入200μL尿素缓冲液离心14～16min，弃滤液；加入100μL碘乙酰胺缓冲液，600rpm振荡1min，避光室温25～35min，离心9～11min；加入100μL尿素缓冲液，离心9～11min重复2次；加入100μL标记缓冲液，离心9～11min，重复2次；加入40μL胰蛋白酶缓冲液，600rpm振荡1min，37℃16～18h；换新收集管，离心9～11min，取滤液，OD280肽段定量；(3)取等量的肽段进行同位素标记，标记方案如下：正常组1-113，正常组2-114，正常组3-115，正常组4-116，疾病组1-117，疾病组2-118，疾病组3-119，疾病组4-121；(4)分别取所有标记样品合并，合并样品进行离子交换色谱柱分级，收集穿流及洗脱，根据离子交换色谱柱色谱图合并，冻干后C18脱盐柱脱盐；(5)样品采用纳升流速高效液相系统进行分离，上样量为5μL，缓冲液：A液为0.1％甲酸水溶液，B液为0.1％甲酸乙腈水溶液，...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈薇，阮宏强，王健，孙晓斌，
申请(专利权)人：上海中科新生命生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：上海;31