ddPCR技术监测肺癌患者对酪氨酸激酶抑制剂继发耐药的方法技术

本发明专利技术提供了一ddPCR技术监测肺癌患者对酪氨酸激酶抑制剂继发耐药的方法，及其在监控酪氨酸激酶抑制剂治疗肺癌过程中的应用。本发明专利技术首先对肺癌患者外周血浆进行DNA抽提，再利用ddPCR技术检测其中EGFR的耐药突变位点T790M的突变情况，并以此判定该患者是否产生耐药。

【技术实现步骤摘要】
201510017009

【技术保护点】
一种对EGFR基因耐药突变位点进行检测的方法，其特征在于，包括步骤：(1)提供一检测样本，所述的检测样本是血浆样本、血清样本或血液样品；(2)对所述的检测样本进行DNA抽提处理，从而获得含抽提DNA的DNA抽提物，其中对于每2毫升的检测样本而言，所述DNA抽提物是体积为20‑100微升且DNA浓度大于30ng/微升的提取液；(3)以步骤(2)所得到的DNA提取物为模板，进行微滴式数字PCR(ddPCR)，从而获得含所述的耐药突变位点的扩增产物；和(4)对所述扩增产物进行分析，从而得出EGFR基因耐药突变位点的突变形式和/或比例。

【技术特征摘要】
1.一种对EGFR基因耐药突变位点进行检测的方法，其特征在于，包括步骤：(1)提供一检测样本，所述的检测样本是血浆样本、血清样本或血液样品；(2)对所述的检测样本进行DNA抽提处理，从而获得含抽提DNA的DNA抽提物，其中对于每2毫升的检测样本而言，所述DNA抽提物是体积为20-100微升且DNA浓度大于30ng/微升的提取液；(3)以步骤(2)所得到的DNA提取物为模板，进行微滴式数字PCR(ddPCR)，从而获得含所述的耐药突变位点的扩增产物；和(4)对所述扩增产物进行分析，从而得出EGFR基因耐药突变位点的突变形式和/或比例。2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，在ddPCR中，反应体系中含有PCR扩增引物对，以及用于检测突变位点的探针。3.如权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述的样本来自于肺癌患者。4.如权利要求1所述的检测方法，其特征在于，在所述步骤(2)中，所述的抽提处理包括步骤：(2a)将血浆/血清样本，用蛋白酶K进行消化处理，从而获得蛋白质被裂解的消化液；(2b)向所述消化液中加入RNA carrier，处理一段时间，从而获得经处理的混合液；(2c)对上一步骤经处理的混合液，用固相载体对DNA进行特异性吸附，从而获得吸附有DNA的固相载体；(2d)对上一步骤的吸附有DNA的固相载体，进行洗脱，从而获得含洗脱DNA的洗脱液，即为含抽提DNA的DNA抽提物。5.一种EGFR基因耐药突变位点检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括：(a)第一容器，以及位于所述容器内的用于特异性扩增含突变位点的特异引物对；(b)RNA carrier；(c)使用说明书(如插页)，其中，所述说明书记载了权利要求1所述的方法，其中，所述的突变位点包括EGFR T790M。6.如权利要求5所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括：(d)位于所述第一容器内或另一不同容器内的用于检测突变位点的探...

【专利技术属性】
技术研发人员：丁飞飞，许骋，吴云鸣，易静，张桢珍，楼敬伟，朱陵君，王剑鹏，方圆，蒋晓东，李军川，
申请(专利权)人：上海张江转化医学研发中心有限公司，上海宝藤生物医药科技股份有限公司，上海宝藤医学检验所有限公司，
类型：发明
国别省市：上海;31