本发明专利技术公开了一种以菌糠提取液为原料制备金针菇液体菌种的方法，包括以下步骤：制备菌糠提取液、配制摇瓶培养基、接种、菌球形态及菌丝含量测定、酶活力测试、发酵罐扩培、制作栽培瓶；其中，摇瓶培养基的配方为：一级白砂糖36g、140目豆粕粉5.8g、KH2PO4分析纯1.24g、MgSO4·7H2O分析纯1.28g、菌糠提取液2000mL。本发明专利技术以金针菇采收之后剩余的菌糠为原料制备了金针菇液体菌种，通过本发明专利技术制备的液体菌种具有菌丝活力强、浓密，生物转化率高、生产周期短的优点，不仅有效提高了企业的经济利润，而且减轻了菌糠肆意堆积造成的资源浪费及环境污染问题。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种液体菌种的制备方法，尤其涉及一种以菌糠提取液为原料制备金针菇液体菌种的方法。
技术介绍
金针菇(Flammulinavelutipes)，学名毛柄金钱菌，又称毛柄小火菇、朴菇、冬菇、冻菌、金菇、智力菇等。金针菇营养丰富，它的氨基酸含量高于一般菇类，尤其是赖氨酸的含量非常高，具有促进儿童智力发育的功能。研究表明，金针菇还具有很好的抗癌作用。因此，金针菇不仅是一种美味食品，又是很好的保健品，近年来更是倍受人们青睐，其产量逐年上升。通过液体菌种培养金针菇的方法具有生产周期短、菌龄一致、萌发快、出菇齐、活力强、污染率低的优点，因此金针菇的现代化工业生产多以液体菌种栽培模式为主，从而将传统的固体菌种栽培模式逐渐取代。但目前国内金针菇液体菌种的制备方法较为单一，培养基配方成分均从市场购买，不仅价格昂贵并且组分单一，这在一定程度上限制了金针菇液体菌株的活力提升空间；此外，培养基配方的单一性限制了对金针菇生产过程中产生的废弃物的重新利用，造成了极大的资源浪费与环境压力。
技术实现思路
为了解决上述技术所存在的不足之处，本专利技术提供了一种以菌糠提取液为原料制备金针菇液体菌种的方法。为了解决以上技术问题，本专利技术采用的技术方案是：一种以菌糠提取液为原料制备金针菇液体菌种的方法，包括以下步骤：A、制备菌糠提取液：富集金针菇采收后剩余的菌糠，按照料水比1：25进行配制，室温下静止24h，然后用八层纱布或过滤装置过滤，滤液即为菌糠提取液；B、配制摇瓶培养基：摇瓶培养基的配方为：一级白砂糖36g、140目豆粕粉5.8g、KH2PO4分析纯1.24g、MgSO4·7H2O分析纯1.28g、菌糠提取液2000mL；调pH至6.0～6.9后，将上述培养基分装至含转子的三角烧瓶中；用棉塞塞紧三角烧瓶瓶口，并用铝箔纸包紧瓶口，121℃下高压灭菌30～60min；灭菌结束后，冷却至室温；C、接种：在无菌环境下，用接种环钩取金针菇母种菌块8～10块，转接到冷却后的摇瓶培养基中，20～25℃条件下摇瓶培养7天，摇床转速150r/min；D、菌球形态及菌丝含量测定：摇瓶培养结束后，首先观察培养瓶内菌球形态及液体澄清度，然后用pH计测试菌液的pH，判断菌种的生长状况；再随机抽取三个摇瓶菌种，放在磁力搅拌器上将菌种搅碎，用注射器吸取10g菌液于已知质量的离心管中，配平后离心弃上清液，通过称量沉淀和离心管的质量，计算出菌丝的平均含量，并与常规方法制备的菌种菌丝含量相对比；E、酶活力测试：随机抽取九个摇瓶菌种，平均分成三组；首先制备粗酶液并绘制葡萄糖标准曲线；将三组摇瓶菌种在磁力搅拌器上搅拌破碎分别取5mL破碎后的菌液于10mL离心管内,3500r/min离心10min,取上清液做为粗酶液；得到的三组粗酶液分别进行羧甲基纤维素酶酶活、半纤维素酶酶活、漆酶酶活的测试，并与常规方法制备的粗酶液酶活进行对比；F、发酵罐扩培：按照以下配方进行发酵培养基的配制：一级白砂糖12595g、140目豆粕粉2025g、KH2PO4分析纯429g、MgSO4·7H2O分析纯443g、菌糠提取液700L；调pH至6.0～6.9后高压灭菌；将发酵罐内的发酵培养基冷却至室温，接种步骤C中摇瓶培养结束后的菌液；20～25℃条件下发酵培养7天，通气量0.1MP；G、制作栽培瓶：称取玉米芯、米糠、麸皮、棉籽壳、大豆皮、啤酒糟、甜菜渣，将上述原材料搅拌混合25min，然后边加菌糠提取液边继续搅拌40～50min，调制成含水量为65％±1、pH为6.3～6.9的混合材料；在栽培瓶中种入上述混合材料，使每瓶标重为1020±20g；采用五孔打眼法，使料面平整距离栽培瓶瓶口2.0cm，121℃高压灭菌80～100min，冷却至室温，最后接种步骤F扩培后的发酵液菌种。葡萄糖标准曲线的绘制方法如下：Ⅰ、精确称取无水葡萄糖250.0mg，溶于蒸馏水中并定容至250mL，得到1.0mg/mL的葡萄糖标准溶液；将葡萄糖标准溶液分别稀释至0mg/mL、0.2mg/mL、0.4mg/mL、0.6mg/mL、0.8mg/mL、1.0mg/mL；Ⅱ、通过DNS法测定上述不同浓度的葡萄糖溶液在540nm波长处的吸光度值，绘制葡萄糖标准曲线，得出回归方程。羧甲基纤维素酶酶活的测试方法为：在20ml具塞试管中加入0.5％的羧甲基纤维素钠1.5mL，再加入稀释10倍的粗酶液0.5mL，于50℃恒温水浴锅中水浴30min，取出后立即加入DNS试剂3mL，然后放入100℃热水浴中5min，取出冷却至室温后用蒸馏水定容至20mL，混匀；用分光光度计在540nm处测定OD值，以煮沸15min灭活酶液为对照，计算酶活力。半纤维素酶酶活的测试方法为：在20mL具塞试管中加入0.5％的小麦秸秆半纤维素溶液1.5mL；小麦秸秆半纤维素溶液用pH为4.8，浓度为0.1mol/L的醋酸盐缓冲液配制；再加入稀释10倍的粗酶液0.5mL，50℃恒温水浴锅中水浴30min，取出后立即加入DNS试剂3mL，然后放入100℃热水浴中5min，取出冷却至室温后用蒸馏水定容至20mL，混匀；用分光光度计在540nm处测定OD值，以煮沸15min灭活酶液为对照，计算酶活力。漆酶酶活的测试方法为：在20mL具塞试管中加入0.5mL80mmol/L的愈创木酚，加入0.1mol/L、pH为4.8的醋酸缓冲液3mL，加入粗酶液0.1mL，于28℃下反应30min，之后用分光光度计在490nm波长处测定OD值，以煮沸15min的灭活酶液作为对照，计算酶活。本专利技术以金针菇采收之后剩余的菌糠为原料制备了金针菇液体菌种，通过本专利技术制备的液体菌种具有菌丝活力强、浓密，生物转化率高、生产周期短的优点，不仅有效提高了企业的经济利润，而且减轻了菌糠肆意堆积造成的资源浪费及环境污染问题。说明书附图图1为本专利技术的整体流程图。图2为葡萄糖标准曲线图。具体实施方式下面结合附图和具体实施方式对本专利技术作进一步详细的说明。如图1所示，本专利技术包括以下步骤：A、制备菌糠提取液：富集金针菇采收之后剩余的菌糠，按照料水比1：25进行配制，配制完成后室温下静止24h，然后用八层纱布或过滤装置过滤，过滤后的滤液即为菌糠提取液；B、配制摇瓶培养基：摇瓶培养基的配方为：一级白砂糖36g、140目豆粕粉5.8g、KH2PO4分析纯1.24g、MgSO4·7H2O分析纯1.28g、菌糠提取液2000mL；调p本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种以菌糠提取液为原料制备金针菇液体菌种的方法，其特征在于：所述方法包括以下步骤：A、制备菌糠提取液：富集金针菇采收之后剩余的菌糠，按照料水比1：25进行配制，配制完成后室温下静止24h，然后用八层纱布或过滤装置过滤，过滤后的滤液即为菌糠提取液；B、配制摇瓶培养基：摇瓶培养基的配方为：一级白砂糖36g、 140目豆粕粉5.8g、KH2PO4分析纯1.24g、 MgSO4·7H2O分析纯1.28g、菌糠提取液2000mL；调pH至6.0～6.9后，将上述培养基分装至含转子的三角烧瓶中；用棉塞塞紧三角烧瓶瓶口，并用铝箔纸包紧瓶口，121℃下高压灭菌30～60min；灭菌结束后，冷却至室温；C、接种：在无菌环境下，用接种环钩取金针菇母种菌块8～10块，转接到冷却后的摇瓶培养基中，20～25℃条件下摇瓶培养7天，摇床转速150r/min；D、菌球形态及菌丝含量测定：摇瓶培养结束后，首先观察培养瓶内菌球形态及液体澄清度，然后用pH计测试菌液的pH，判断菌种的生长状况；再随机抽取三个摇瓶菌种，放在磁力搅拌器上将菌种搅碎，用注射器吸取10g菌液于已知质量的离心管中，配平后离心弃上清液，通过称量沉淀和离心管的质量，计算出菌丝的平均含量，并与常规方法制备的菌种菌丝含量相对比；E、酶活力测试：随机抽取九个摇瓶菌种，平均分成三组；首先制备粗酶液并绘制葡萄糖标准曲线；将三组摇瓶菌种在磁力搅拌器上搅拌破碎，分别取5mL破碎后的菌液于10mL离心管内,3500r/min离心10min,取上清液做为粗酶液；得到的三组粗酶液分别进行羧甲基纤维素酶酶活、半纤维素酶酶活、漆酶酶活的测试，并与常规方法制备的粗酶液酶活进行对比；F、发酵罐扩培：按照以下配方进行发酵培养基的配制：一级白砂糖12595g、 140目豆粕粉2025g、KH2PO4分析纯429g、 MgSO4·7H2O分析纯443g、菌糠提取液700L；调pH至6.0～6.9后高压灭菌；将发酵罐内的发酵培养基冷却至室温，接种步骤C中摇瓶培养结束后的菌液；20～25℃条件下发酵培养7天，通气量0.1MP；G、制作栽培瓶：称取玉米芯、米糠、麸皮、棉籽壳、大豆皮、啤酒糟、甜菜渣，将上述原材料搅拌混合25min，然后边加菌糠提取液边继续搅拌40～50min，调制成含水量为65％±1、pH为6.3～6.9的混合材料；在栽培瓶中种入上述混合材料，使每瓶标重为1020±20g；采用五孔打眼法，使料面平整距离栽培瓶瓶口2.0cm，121℃高压灭菌80～100min，冷却至室温，最后接种步骤F扩培后的发酵液菌种。...
【技术特征摘要】
1.一种以菌糠提取液为原料制备金针菇液体菌种的方法，其特征在于：所述方法包括
以下步骤：
A、制备菌糠提取液：富集金针菇采收之后剩余的菌糠，按照料水比1：25进行配制，配制
完成后室温下静止24h，然后用八层纱布或过滤装置过滤，过滤后的滤液即为菌糠提取液；
B、配制摇瓶培养基：摇瓶培养基的配方为：
一级白砂糖36g、140目豆粕粉5.8g、
KH2PO4分析纯1.24g、MgSO4·7H2O分析纯1.28g、
菌糠提取液2000mL；
调pH至6.0～6.9后，将上述培养基分装至含转子的三角烧瓶中；用棉塞塞紧三角烧瓶
瓶口，并用铝箔纸包紧瓶口，121℃下高压灭菌30～60min；灭菌结束后，冷却至室温；
C、接种：在无菌环境下，用接种环钩取金针菇母种菌块8～10块，转接到冷却后的摇瓶
培养基中，20～25℃条件下摇瓶培养7天，摇床转速150r/min；
D、菌球形态及菌丝含量测定：摇瓶培养结束后，首先观察培养瓶内菌球形态及液体澄
清度，然后用pH计测试菌液的pH，判断菌种的生长状况；再随机抽取三个摇瓶菌种，放在磁
力搅拌器上将菌种搅碎，用注射器吸取10g菌液于已知质量的离心管中，配平后离心弃上清
液，通过称量沉淀和离心管的质量，计算出菌丝的平均含量，并与常规方法制备的菌种菌丝
含量相对比；
E、酶活力测试：随机抽取九个摇瓶菌种，平均分成三组；首先制备粗酶液并绘制葡萄糖
标准曲线；将三组摇瓶菌种在磁力搅拌器上搅拌破碎，分别取5mL破碎后的菌液于10mL离心
管内,3500r/min离心10min,取上清液做为粗酶液；得到的三组粗酶液分别进行羧甲基纤维
素酶酶活、半纤维素酶酶活、漆酶酶活的测试，并与常规方法制备的粗酶液酶活进行对比；
F、发酵罐扩培：按照以下配方进行发酵培养基的配制：
一级白砂糖12595g、140目豆粕粉2025g、
KH2PO4分析纯429g、MgSO4·7H2O分析纯443g、
菌糠提取液700L；
调pH至6.0～6.9后高压灭菌；将发酵罐内的发酵培养基冷却至室温，接种步骤C中摇瓶
培养结束后的菌液；20～25℃条件下发酵培养7天，通气量0.1MP；
G、制作栽培瓶：称取玉米芯、米糠、麸皮、棉籽壳、大豆皮、啤酒糟、甜菜渣，将上述原材
料搅拌混合25min，然后边加菌糠提取液边继续搅拌40～50min，调制成含水量为65％±1、
pH为6.3～6.9的混合材料；在栽...
【专利技术属性】
技术研发人员：安雪，
申请(专利权)人：沈阳德宝嘉泓农业科技有限公司，
类型：发明
国别省市：辽宁;21
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