本发明专利技术公开了一种桑黄子实体抗癌活性多糖PBPP及其制备方法。将桑黄子实体粉用超声波辅助热水提取出粗多糖，经乙醇沉淀后，用DEAE离子交换层析分离出酸性多糖组分，然后依次用丙烯葡聚糖凝胶S‑100、S‑200和S‑400层析纯化，收集洗脱峰对应的洗脱液，减压浓缩，冷冻真空干燥获得所述产物。本发明专利技术多糖PBPP及其方法，纯度均一，对正常细胞的生长无不良影响，对人宫颈癌细胞HELA和人胃癌细胞SGC‑7901的生长均有明显抑制作用，可用于抗癌产品的开发。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及了一种多糖的制备方法，尤其是涉及了一种桑黄子实体抗癌活性多糖PBPP及其制备方法。
技术介绍
多糖(polysaccharide)是由10个以上单糖通过糖苷键连接聚合而成的高分子碳水化合物，分别作为结构成分、储藏养分、特殊的活性成分，在自然界广泛分布。天然活性多糖由于其独特的药理作用和较小的毒副作用，展现出广阔的研究和应用前景。
桑黄(Phellinusbaumii)是一种具有多种药理作用的真菌子实体，因寄生于桑树而得名。中医认为桑黄能利五脏、软坚、排毒、止血等，现代医药学研究发现桑黄具有抗癌、抗炎症、抗氧化、降血糖、免疫调节、抗血管生成、护肝等多种药理作用，但其药用机理尚不清楚，这阻碍了其药用价值的进一步提高。分离纯化桑黄抗癌活性成分，对于推进桑黄药用新产品开发及其价值提升等，均具有积极意义。
技术实现思路
为了解决
技术介绍
中存在的问题，本专利技术的目的在于提供一种桑黄子实体抗癌活性多糖PBPP及其制备方法，采用回流提取、DEAE-Sepharose离子交换层析柱分离和SephacrylS-100、S-200、S-400层析柱纯化制备获得桑黄子实体抗癌活性多糖PBPP。
为了达到上述目的，本专利技术采用的技术方案如下：
1)选取生长于桑树上的桑黄子实体，自然晾干后，切片，于45℃烘箱中烘干至恒重，高速粉碎机粉碎后过80-100目筛，得到桑黄子实体粉；
2)采用超声波辅助热水法从桑黄子实体粉末中提取出粗多糖。
3)将粗多糖用乙醇进行沉淀。
4)通过DEAE-Sepharose离子交换层析柱洗脱分离，得到酸性多糖组分。
5)依次通过SephacrylS-100层析柱、SephacrylS-200层析柱和SephacrylS-400层析柱纯化洗脱后，收集洗脱峰的洗脱液，得到多糖组分取名为PBPP。
所述步骤2)采用超声波辅助热水法从桑黄子实体粉末中提取出粗多糖的具体方法为：
2.1)将烘干的桑黄子实体粉末按料液质量体积比为0.04g/mL加入双蒸水，超声波处理35min后，于100℃下提取4.35h后抽滤，获得残渣和滤液。
2.2)残渣再重复上述步骤2.1)一次，再次获得残渣和滤液。
2.3)合并步骤2.1)和步骤2.2)得到的滤液，在45℃下减压浓缩至原体积的1/4，得到从桑黄子实体中提取出粗多糖液。
所述步骤3)用乙醇进行沉淀的具体方法为：往粗多糖液中加入无水乙醇，边加边搅拌，至乙醇质量浓度达到80％，置4℃冰箱过夜，10000rpm离心10min，获得乙醇沉淀后的多糖。
所述步骤4)通过DEAE-Sepharose离子交换层析柱洗脱分离的具体方法为：将乙醇沉淀后的多糖用双蒸水溶解配制成10mg/mL溶液，10000rpm离心10min，取上清液，过0.22μm滤膜，上DEAE-Sepharose离子交换层析柱，用0.1MNaCl溶液以2.5-3.5mL/min流速洗脱，洗脱时采用自动部分收集器收集，再用苯酚-硫酸法检测，收集有显色反应的洗脱峰的洗脱液，于45℃下减压浓缩，-80℃下真空冷冻干燥，得到酸性多糖组分。
所述步骤5)通过SephacrylS-100层析柱纯化的具体方法为：将酸性多糖组分用双蒸水溶解配制成5mg/mL溶液，过0.22μm滤膜，上SephacrylS-100层析柱，用双蒸水以0.5-0.7mL/min流速洗脱，洗脱时用自动部分收集器收集，再用苯酚-硫酸法检测，收集有显色反应的洗脱峰的洗脱液，于45℃下减压浓缩成浓度为5mg/mL的多糖溶液。
所述步骤5)通过SephacrylS-200层析柱纯化的具体方法为：将所述通过SephacrylS-100层析柱纯化后的多糖溶液，上SephacrylS-200层析柱，用双蒸水以0.3-0.5mL/min流速洗脱，洗脱时用自动部分收集器收集，再用苯酚-硫酸法检测，收集有显色反应的洗脱峰的洗脱液，于45℃下减压浓缩成浓度为5mg/mL的多糖溶液。
所述步骤5)通过SephacrylS-400层析柱分离纯化的具体方法为：将所述通过SephacrylS-200层析柱纯化后的多糖溶液，上SephacrylS-400层析柱，用双蒸水以0.3-0.5mL/min流速洗脱，洗脱时用自动部分收集器收集，再用苯酚-硫酸法检测，收集有显色反应的洗脱峰的洗脱液，于45℃下减压浓缩，-80℃下真空冷冻干燥，得到高纯度的多糖组分，取名为PBPP。
所述的减压均通过减压泵进行减压。
进一步地，本专利技术各个实施例实验制备获得的多糖组分PBPP采用高效液相色谱系统和折光检测器检测，检测结果纯度高。
本专利技术具有的有益效果是：
本专利技术制备的桑黄子实体抗癌活性多糖PBPP，纯度高，对人宫颈癌细胞HELA和人胃癌细胞SGC-7901的增殖均表现出显著的抑制作用，对正常细胞人胚胎肾细胞HEK293和小鼠巨噬细胞RAW264.7增殖均无抑制作用，可用于抗癌产品的开发，这对于提升桑黄子实体的应用价值很有帮助。
表格说明
表1是PBPP对癌细胞增殖的影响。
表2是PBPP对正常细胞增殖的影响。
具体实施方式
下面结合实施例对本专利技术作进一步说明。
本专利技术的以下各个实施例均采用以下方式先获得桑黄子实体粉末：
选取生长于桑树上的多年桑黄子实体，自然晾干后，切片，于45℃烘箱中烘干至恒重，高速粉碎机粉碎后过80-100目筛，得到桑黄子实体粉末。
实施例1：
取过80目筛的按上述方法获得的桑黄子实体粉末，按料液质量体积比为0.04g/mL加入双蒸水，超声波处理35min后，于100℃下提取4.35h后抽滤，重复1次，合并两次抽滤得到的滤液，在45℃下减压浓缩至原体积的1/4，提取出粗多糖；
往粗多糖液中加入无水乙醇，边加边搅拌，至乙醇浓度达到80％，置4℃冰箱过夜，10000rpm离心10min，得到沉淀多糖。
将沉淀多糖用双蒸水溶解配制成10mg/mL溶液，10000rpm离心10min，取上清液，过0.22μm滤膜，上DEAE-Sepharose离子交换层析柱，用0.1MNaCl溶液以3.0mL/min流速洗脱，洗脱时采用自动部分收集器收集，再用苯酚-硫酸法检测，收集有显色反应的洗脱峰的洗脱液，于45℃下减压浓缩，-80℃下真空冷冻干燥，得到酸性多糖组分。
将酸性多糖组分用双蒸水溶解配制成5mg/mL溶液，过0.22μm滤膜，上SephacrylS-100层析柱，用双蒸水以0.5mL/min流速洗脱，洗脱时用自动部分收集器收集，再用苯酚-硫酸法检测，收集有显色反应的洗脱峰的洗脱液，于45℃下减压浓缩成浓度为5mg/mL的多糖溶液。
将通过SephacrylS-100层析柱纯化后得到的多糖溶液，上SephacrylS-200层析柱，用双蒸水以0.4mL/min流速洗脱，洗脱时用自动部分收集器收集，再用苯酚-硫酸法检测，收集有显色反应的洗脱峰的洗脱液，于45℃下减压浓缩成浓度为5mg/mL的多糖溶液。
将通过SephacrylS-200层析柱纯化后得到的多糖溶液，上SephacrylS-400层析柱，用双蒸水以0.3mL/min流速洗脱，洗脱时用自动部分收集器本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种桑黄子实体抗癌活性多糖PBPP及其制备方法，其特征在于：1)选取生长于桑树上的桑黄子实体，自然晾干后，切片，于45℃烘箱中烘干至恒重，粉碎机粉碎后过80‑100目筛，得到桑黄子实体粉；2)采用超声波辅助热水法从桑黄子实体粉末中提取出粗多糖；3)将粗多糖用乙醇进行沉淀；4)通过DEAE‑Sepharose离子交换层析柱洗脱分离，得到酸性多糖组分；5)依次通过Sephacryl S‑100层析柱、Sephacryl S‑200层析柱和Sephacryl S‑400层析柱纯化洗脱后，收集洗脱峰的洗脱液，得到多糖组分取名为PBPP。
【技术特征摘要】
1.一种桑黄子实体抗癌活性多糖PBPP及其制备方法，其特征在于：
1)选取生长于桑树上的桑黄子实体，自然晾干后，切片，于45℃烘箱中烘干至恒重，粉碎机粉碎后过80-100目筛，得到桑黄子实体粉；
2)采用超声波辅助热水法从桑黄子实体粉末中提取出粗多糖；
3)将粗多糖用乙醇进行沉淀；
4)通过DEAE-Sepharose离子交换层析柱洗脱分离，得到酸性多糖组分；
5)依次通过SephacrylS-100层析柱、SephacrylS-200层析柱和SephacrylS-400层析柱纯化洗脱后，收集洗脱峰的洗脱液，得到多糖组分取名为PBPP。
2.根据权利要求1所述的一种桑黄子实体抗癌活性多糖PBPP及其制备方法，其特征在于：所述步骤2)采用超声波辅助热水法从桑黄子实体粉末中提取出粗多糖的具体方法为：
2.1)将烘干的桑黄子实体粉末按料液质量体积比为0.04g/mL加入双蒸水，超声波处理35min后，于100温度℃下提取4.35h后抽滤，获得残渣和滤液；
2.2)残渣再重复上述步骤2.1)一次，再次获得残渣和滤液；
2.3)合并步骤2.1)和步骤2.2)得到的滤液，在45℃下减压浓缩至原体积的1/4，得到粗多糖液。
3.根据权利要求1所述的一种桑黄子实体抗癌活性多糖PBPP及其制备方法，其特征在于：所述步骤3)用乙醇进行沉淀的具体方法为：往粗多糖液中加入无水乙醇，边加边搅拌，至乙醇质量浓度达到80％，置4℃冰箱过夜，10000rpm离心10min，获得乙醇沉淀后的多糖。
4.根据权利要求1所述的一种桑黄子实体抗癌活性多糖PBPP及其制备方法，其特征在于：所述步骤4)通过DEAE-Sepharose离子交换层析柱洗脱分离的具体方法为：将乙醇沉淀后的多糖用双蒸水溶解配制成10mg/mL溶液，10000rpm离心10min，取上清液，过0.22μm滤膜，上DEAE-Sepharose离子交换层析柱，用0.1M的...
【专利技术属性】
技术研发人员：时连根，曾鹏，
申请(专利权)人：浙江大学，
类型：发明
国别省市：浙江;33
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。