【技术实现步骤摘要】
201610322740
【技术保护点】
一种微生物酶转化法生产L‑4‑羟基异亮氨酸的方法，其特征在于：包括以下步骤：（1）、将可诱导生产L‑4‑羟基异亮氨酸的大肠杆菌重组菌接入装有种子罐培养基的种子罐中，在温度33℃‑37℃，ph 6.5‑7.5，溶氧控制在25%以上的条件下培养至菌液的OD600值为12‑16：得到成熟的可诱导生产L‑4‑羟基异亮氨酸的大肠杆菌重组菌；所述可诱导生产L‑4‑羟基异亮氨酸的大肠杆菌重组菌的构建方法为，克隆出其基因序列如SEQ NO.1所示的基因；将该基因构建入质粒pET28a，得到重组质粒，将重组质粒后导入大肠杆菌BL21，即得到可诱导生产L‑4‑羟基异亮氨酸的大肠杆菌重组菌；（2）、将成熟的可诱导生产L‑4‑羟基异亮氨酸的大肠杆菌重组菌接入装有发酵罐培养基的发酵罐中，进行液体深层通风发酵培养；培养过程中，培养5h时向发酵培养基中一次性投入终浓度为0.1‑0.3mmol/L的IPTG进行诱导，溶氧控制在30‑50%，pH6.5‑7.0，底糖耗尽后，流加质量浓度为10‑80%的甘油水溶液做为碳源，发酵过程温度两阶控制，加入IPTG诱导前控制温度在34‑36℃，待进行诱导表达后，调整温度到30‑3...
【技术特征摘要】
1.一种微生物酶转化法生产L-4-羟基异亮氨酸的方法，其特征在于：包括以下步骤：
（1）、将可诱导生产L-4-羟基异亮氨酸的大肠杆菌重组菌接入装有种子罐培养基的种
子罐中，在温度33℃-37℃，ph6.5-7.5，溶氧控制在25%以上的条件下培养至菌液的OD600
值为12-16：得到成熟的可诱导生产L-4-羟基异亮氨酸的大肠杆菌重组菌；
所述可诱导生产L-4-羟基异亮氨酸的大肠杆菌重组菌的构建方法为，克隆出其基因序
列如SEQNO.1所示的基因；将该基因构建入质粒pET28a，得到重组质粒，将重组质粒后导入
大肠杆菌BL21，即得到可诱导生产L-4-羟基异亮氨酸的大肠杆菌重组菌；
（2）、将成熟的可诱导生产L-4-羟基异亮氨酸的大肠杆菌重组菌接入装有发酵罐培养
基的发酵罐中，进行液体深层通风发酵培养；培养过程中，培养5h时向发酵培养基中一次性
投入终浓度为0.1-0.3mmol/L的IPTG进行诱导，溶氧控制在30-50%，pH6.5-7.0，底糖耗尽
后，流加质量浓度为10-80%的甘油水溶液做为碳源，发酵过程温度两阶控制，加入IPTG诱导
前控制温度在34-36℃，待进行诱导表达后，调整温度到30-32℃进行培养；
（3）、发酵结束后，通过蝶式离心机低温收集菌体，并使用磷酸盐缓冲液对菌体进行洗
涤，除去菌体表面杂质，然后以纯水配制催化体系：a-酮戊二酸30-35g/L、异亮氨酸26-
30g/L、硫酸亚铁0.5-4g/L、硫酸镁0.1-1g/L、抗坏血酸0.01-0.2g/L，向催化体系内加入洗
涤后的菌体，强制通风催化，维持pH为6.0-6.5，催化温度为28-32℃，得到催化液；所述菌体
的加入量为：每100ml催化体系加入0.3g菌体；
（4）、催化液先经过陶瓷膜过滤除菌，再过2-4Kd分子量的超滤膜，并经活性炭脱色，采
用122弱酸性阳离子交换树脂除盐后，流出液上732阳离子交换树脂吸附并用氨水洗脱，蒸
发浓缩得...
【专利技术属性】
技术研发人员：曹华杰，刘帅，李静，岳贵龙，张孟涛，
申请(专利权)人：河南巨龙生物工程股份有限公司，
类型：发明
国别省市：河南;41
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