利用水溶性InP/ZnS QDs探针检测辣根过氧化酶浓度的方法技术

本发明专利技术公开了一种利用水溶性InP/ZnS QDs探针检测辣根过氧化酶浓度的方法，包括：步骤一、配制不同浓度的含水溶性InP/ZnS QDs的辣根过氧化酶的标准溶液，检测标准溶液的荧光强度，得到标准溶液的荧光光谱图，建立辣根过氧化酶浓度为零的标准溶液的荧光强度与所有标准溶液的荧光强度的差值与辣根过氧化酶浓度间的线性关系；步骤二、配制含水溶性InP/ZnSQDs的辣根过氧化酶的样品溶液，检测样品溶液的荧光强度，通过线性关系确定样品溶液中辣根过氧化酶的浓度。本发明专利技术以水溶性InP/ZnS QDs为探针，利用辣根过氧化酶猝灭水溶性InP/ZnS QDs荧光的特性，对辣根过氧化酶浓度进行检测，检测过程简单方便，灵敏度高、检测限低，可实现实辣根过氧化酶浓度的在线原位快速灵敏检测。

【技术实现步骤摘要】


本专利技术涉及一种检测辣根过氧化酶浓度的方法，尤其涉及一种利用水溶性InP/ZnSQDs探针检测辣根过氧化酶浓度的方法。

技术介绍

辣根过氧化物酶是一种糖蛋白，其名称的由来是因为在辣根中该酶的含量很高，它是目前使用最广泛的一种标记酶，用来标记抗体或其它蛋白质，既能用于定位检测，也能用于定量测定。辣根过氧化物酶广泛用于工、农、医、环保等领域，可用该酶配制的血糖、甘油三脂、胆固醇等生化诊断试剂盒及酶免ELISA测定中的酶标抗体能性。
近年来，随着量子点合成技术不断进步以及量子点在生命科学、太阳能电池、光学器件等领域应用的深入，其毒性对环境产生的影响受到越来越多人的关注。因此，传统的IIB-VI量子点如CdTe、CdSe等，虽然其技术发展已经比较成熟，但含有Cd这一有毒元素的内在缺点，将极大地限制其未来的应用。与之相比，III-V量子点具有较低的毒性，其中InP量子点尤为突出(不含有Cd、Hg、As、Se等有毒元素)，其光谱范围覆盖可见及近红外区(500-850nm)，并且具有相对较小的粒子尺寸，这些特点都是传统的CdSe等II-VI量子点所不具备的。优异的生物相容性以及光学性能使得InP/ZnS量子点更加适合应用在生物分析等领域。

技术实现思路

本专利技术的一个目的是提供一种水溶性InP/ZnSQDs探针检测辣根过氧化酶的新方法，该方法操作简单、检测快速且灵敏度高，能进行溶液中辣根过氧化酶的高灵敏识别。
本专利技术还有一个目的是研究水溶性InP/ZnSQDs在辣根过氧化酶浓度检测中的新应用。/>本专利技术提供的技术方案为：
一种利用水溶性InP/ZnSQDs探针检测辣根过氧化酶浓度的方法，包括：
步骤一、配制不同浓度的含水溶性InP/ZnSQDs的辣根过氧化酶的标准溶液，检测所述标准溶液的荧光强度，得到所述标准溶液的荧光光谱图，建立辣根过氧化酶浓度为零的标准溶液的荧光强度与所有标准溶液的荧光强度的差值与辣根过氧化酶浓度间的线性关系；
步骤二、配制含水溶性InP/ZnSQDs的辣根过氧化酶的样品溶液，检测所述样品溶液的荧光强度，通过所述线性关系确定所述样品溶液中辣根过氧化酶的浓度。
优选的是，所述的利用水溶性InP/ZnSQDs探针检测辣根过氧化酶浓度的方法中，所述步骤一中配制所述标准溶液的方法为：
配制不同浓度的辣根过氧化酶的原溶液，取不同体积的原溶液，并向其中分别添加相同体积的水溶性InP/ZnSQDs及不同体积的缓冲溶液至混合液的体积相等，即得等体积不同浓度的标准溶液。
优选的是，所述的利用水溶性InP/ZnSQDs探针检测辣根过氧化酶浓度的方法中，所述步骤二中配制所述样品溶液的方法为：
向未知辣根过氧化酶溶液中加入一定量的水溶性InP/ZnSQDs，使得与所述标准溶液中水溶性InP/ZnSQDs的浓度相同，加入与配制所述标准溶液相同种类的缓冲溶液至与所述标准溶液的体积相等，即得所述样品溶液。
优选的是，所述的利用水溶性InP/ZnSQDs探针检测辣根过氧化酶浓度的方法中，所述步骤二中确定所述样品溶液中辣根过氧化酶的浓度的方法为：
将辣根过氧化酶浓度为零的标准溶液的荧光强度与所述样品溶液的荧光强度的差值带入所述线性关系中，即得所述样品溶液中辣根过氧化酶的浓度。
优选的是，所述的利用水溶性InP/ZnSQDs探针检测辣根过氧化酶浓度的方法中，所述缓冲溶液为pH值为7.5的磷酸盐缓冲溶液。
优选的是，所述的利用水溶性InP/ZnSQDs探针检测辣根过氧化酶浓度的方法中，检测所述标准溶液和所述样品溶液荧光强度的激发波长均为388nm。
优选的是，所述的利用水溶性InP/ZnSQDs探针检测辣根过氧化酶浓度的方法中，所述标准溶液和所述样品溶液的体积均为3mL。
优选的是，所述的利用水溶性InP/ZnSQDs探针检测辣根过氧化酶浓度的方法中，所述标准溶液和所述样品溶液中水溶性InP/ZnSQDs的浓度均为23.04nM。
本专利技术至少包括以下有益效果：
本专利技术将水溶性InP/ZnSQDs作为探针，利用辣根过氧化酶猝灭水溶性InP/ZnSQDs荧光的特性，对辣根过氧化酶浓度进行检测，检测过程简单方便，灵敏度高、检测限低，可实现实际样品中辣根过氧化酶浓度的在线原位快速灵敏检测。
本专利技术的其它优点、目标和特征将部分通过下面的说明体现，部分还将通过对本专利技术的研究和实践而为本领域的技术人员所理解。
附图说明
图1为本专利技术不同浓度的辣根过氧化酶的标准溶液中水溶性InP/ZnSQDs探针与辣根过氧化酶反应后，在激发波长为388nm时得到的荧光光谱图；
图2为本专利技术辣根过氧化酶浓度为零的标准溶液的荧光强度与不同浓度辣根过氧化酶标准溶液的荧光强度的差值与辣根过氧化酶浓度之间的线性关系曲线。
具体实施方式
下面结合实施例对本专利技术做进一步的详细说明，以令本领域技术人员参照说明书文字能够据以实施。
实施例1
一、建立线性关系
配制不同浓度的辣根过氧化酶的原溶液，并向其中分别添加相同体积的水溶性InP/ZnSQDs，即水溶性磷化铟/硫化锌量子点，然后用磷酸盐缓冲溶液稀释到3mL，配制一系列等体积不同浓度的辣根过氧化酶的标准溶液，几种标准溶液中辣根过氧化酶的浓度不同，水溶性InP/ZnSQDs的浓度相同，其中，标准溶液中辣根过氧化酶的浓度依次为0、7×10-9mol/L、1.5×10-8mol/L、2.5×10-8mol/L、3×10-8mol/L、6×10-8mol/L、1×10-7mol/L、2×10-7mol/L和4×10-7mol/L，其编号分别为a、b、c、d、e、f、g、h和i，标准溶液中水溶性InP/ZnSQDs的浓度为23.04nM；
不同浓度的辣根过氧化酶的标准溶液中水溶性InP/ZnSQDs探针与辣根过氧化酶反应后，用荧光分光光度计在388nm的激发波长下，分别检测上述标准溶液的荧光强度，得到如图1所示的荧光光谱图，从荧光光谱图上读出不同浓度的辣根过氧化酶的标准溶液所对应的荧光强度值。
以荧光光谱图中辣根过氧化酶浓度为零的标准溶液的荧光强度与不同浓度的辣根过氧化酶标准溶液的荧光强度的差值为纵坐标，以标准溶液中辣根过氧化酶的浓度为横坐标，绘制如图2所示的标准曲线，从而得出辣根过氧化酶浓度为零的标准溶液的荧光强度与不同浓度辣根过氧化酶标准溶液的荧光强度的差值与辣根过氧化酶浓度之间的线性关系，线性方程Y＝0.01+8.13X，R2＝0.999，对辣根过氧化酶的检测限可达到2×10-10mol/L，以此线性关系检测样品溶液中辣根过氧化酶的浓度。
二、样品溶液中辣根过氧化酶浓度的测定
另取一定体积的辣根过氧化酶的原溶液，并向其中加入一定体积的水溶性InP/ZnSQDs，然后用磷酸盐缓冲溶液稀释到3mL，得到样品溶液，其中，样品溶液中水溶性InP/ZnSQDs的浓度为23.04nM。用荧光分光光度计在388nm的激发波长下，检测样品溶液的荧光强度，将辣根过氧化酶浓度为零的标准溶液的荧光强度与样品溶液的荧光强度的差值带入线性方程中，计算得到样品溶液中辣根过氧化酶的浓度。
实施例2
一本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种利用水溶性InP/ZnS QDs探针检测辣根过氧化酶浓度的方法，其特征在于，包括：步骤一、配制不同浓度的含水溶性InP/ZnS QDs的辣根过氧化酶的标准溶液，检测所述标准溶液的荧光强度，得到所述标准溶液的荧光光谱图，建立辣根过氧化酶浓度为零的标准溶液的荧光强度与所有标准溶液的荧光强度的差值与辣根过氧化酶浓度间的线性关系；步骤二、配制含水溶性InP/ZnS QDs的辣根过氧化酶的样品溶液，检测所述样品溶液的荧光强度，通过所述线性关系确定所述样品溶液中辣根过氧化酶的浓度。

【技术特征摘要】
1.一种利用水溶性InP/ZnSQDs探针检测辣根过氧化酶浓度的方法，其
特征在于，包括：
步骤一、配制不同浓度的含水溶性InP/ZnSQDs的辣根过氧化酶的标准
溶液，检测所述标准溶液的荧光强度，得到所述标准溶液的荧光光谱图，建
立辣根过氧化酶浓度为零的标准溶液的荧光强度与所有标准溶液的荧光强度
的差值与辣根过氧化酶浓度间的线性关系；
步骤二、配制含水溶性InP/ZnSQDs的辣根过氧化酶的样品溶液，检测
所述样品溶液的荧光强度，通过所述线性关系确定所述样品溶液中辣根过氧
化酶的浓度。
2.如权利要求1所述的利用水溶性InP/ZnSQDs探针检测辣根过氧化酶
浓度的方法，其特征在于，所述步骤一中配制所述标准溶液的方法为：
配制不同浓度的辣根过氧化酶的原溶液，取不同体积的原溶液，并向其
中分别添加相同体积的水溶性InP/ZnSQDs及不同体积的缓冲溶液至混合液
的体积相等，即得等体积不同浓度的标准溶液。
3.如权利要求2所述的利用水溶性InP/ZnSQDs探针检测辣根过氧化酶
浓度的方法，其特征在于，所述步骤二中配制所述样品溶液的方法为：
向未知辣根过氧化酶溶液中加入一定量的水溶性InP/ZnSQDs，使得与所
述标准溶液中水溶性InP/...

【专利技术属性】
技术研发人员：黄珊，肖琦，王鲁敏，黄初升，苏炜，崔建国，
申请(专利权)人：广西师范学院，
类型：发明
国别省市：广西;45