【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种检测试剂盒，尤其涉及一种GPC3检测的试剂盒。
技术介绍
磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3(glypican-3，GPC3)是一种硫酸肝素类蛋白多糖，由蛋白质、脂质和糖三者共价连接的复杂糖复合物。GPC3在胚胎及胎儿期组织器官的形成和发育阶段扮演着重要角色，主要起负性调控作用，防止组织器官生长过大并在整体上调节身体大小；肝实质细胞在整个胎儿期均有明显表达，在成人肝脏不表达，而肝癌发生早期即可被再激活而高表达，在良性肝病(肝炎，脂肪肝)、肝硬化和肝胆管癌中GPC3不表达或呈低表达，因此血清中可溶性GPC3可作为原发性肝癌的特异性标志物，在肝癌的鉴别诊断中发挥作用。
目前所用检测GPC3的化学发光分析法主要是酶催化化学发光分析法，其是以酶标记待检物特异性结合物，形成待检物和酶的复合物，然后以酶再作用于发光底物，在信号试剂作用下发光，用发光信号测定仪进行发光测定。由于酶催化化学发光分析法受到酶和发光底物的限制导致其背景发光增强、测量成本高等，从而限制了这一方法的灵敏度和它的应用。因此需要一种能够快速、准确、成本低的检测GPC3的试剂盒来满足检测的需求。
技术实现思路
为了有效的解决上述提出的技术问题，本专利技术提供了一种磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3的定量分析试剂盒及其制备方法。
一种磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3的定量分析试剂盒
(1)GPC3标准品，所述GPC3为磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3；
(2)吖啶酯标记的磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3抗体溶液；
(3)偶联有磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3抗体的...
【技术保护点】
一种磷脂酰肌醇蛋白聚糖‑3的定量分析试剂盒，包括如下：(1)GPC3标准品；(2)吖啶酯标记的磷脂酰肌醇蛋白聚糖‑3抗体溶液；(3)偶联有磷脂酰肌醇蛋白聚糖‑3抗体的纳米磁微球溶液。
【技术特征摘要】
1.一种磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3的定量分析试剂盒，包括如下：
(1)GPC3标准品；
(2)吖啶酯标记的磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3抗体溶液；
(3)偶联有磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3抗体的纳米磁微球溶液。
2.根据权利要求1所述的磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3的定量分析试剂盒，
其特征在于：所述GPC3标准品为溶液状态，浓度分别为：0ng/mL、
0.5ng/mL、2.0ng/mL、5.0ng/mL、20.0ng/mL、100.0ng/mL。
3.根据权利要求1所述的磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3的定量分析试剂盒，
其特征在于：所述试剂盒还包括发光液，所述发光液为H2O2溶液。
4.根据权利要求1所述的磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3的定量分析试剂盒，
其特征在于：所述偶联有磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3抗体纳米磁微球溶液
中的纳米磁微球为直径为3μm、表面带羧基的超顺磁性的纳米磁微
球。
5.一种磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3的定量分析试剂盒的制备方法，包括
如下步骤：
(1)GPC3标准品的制备：用标准品缓冲液将GPC3配制成阶梯浓度
的GPC3溶液，所述标准品缓冲液包括质量比为1～5％BSA、0.5～
1.0％NaCl、0.05～0.1％TritonX-100或Tween20、0.05～0.1％
ProClin300和余量的磷酸缓冲液；所述磷酸缓冲液浓度为0.1～0.2
mol/L；
(2)吖啶酯标记的磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3抗体溶液的制备：
a、取GPC3抗体溶于，pH为6.8～7.3浓度为0.2mol/L的磷酸缓冲
\t液中，至终浓度为2～8mg/L；
b、向步骤a处理后的GPC3抗体溶液加入吖啶酯至吖啶酯终浓度为
0.1～0.5mg/L，避光静置8～16小时，收集标记有吖啶酯的GPC3抗
体溶液；
(3)偶联有磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3抗体的纳米磁微球溶液的制备：
A、取GPC3抗体溶于，pH为4.5～5.5浓度为0.2mol/L的MES溶
液中，至终浓度为2～8mg/L；
B、取1重量份纳米磁微球，加入1～4重量份的偶联剂一和2～5重
量份偶联剂二，置于磁微球混合器旋转20～40分钟，除去上清；再
加入连接缓冲液洗涤纳米磁微球，除去上清；所述偶联剂一包括质量
比为1～2％NHS和余量的pH为4.5～5.5浓度为0.2mol/L的MES；
所述偶联剂二包括质量比为1～2％EDC和余量的pH为4.5～5.5浓
度为0.2mol/L的MES；所述连接缓冲液为pH为4.5～5.5的0.2mol/L
MES溶液；
C、将A步骤处理后的GPC3抗体溶液和B步骤处理后的纳米磁微球
按质量比1:25～100混匀形成GPC3抗体纳米磁微球混合液，放置磁
微球...
【专利技术属性】
技术研发人员：梁敏瑶，
申请(专利权)人：广州科方生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44
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