高异黄酮芳酸及芳酸酯类衍生物、其制备方法和医药用途技术

本发明专利技术涉及药物化学领域，涉及高异黄酮芳酸及芳酸酯类衍生物、其制备方法和医药用途，具体涉及一类通式为(I)的高异黄酮芳酸及芳酸酯类衍生物、它们的制备方法、含有这些化合物的药物组合物以及它们的医药用途，特别是作为预防或治疗高脂血症、肥胖症或II型糖尿病的药物的用途。

【技术实现步骤摘要】

：本专利技术涉及药物化学领域、具体涉及高异黄酮类衍生物。本专利技术还公开了它们的制备方法和药理活性、含有这些化合物的药用组合物以及它们的医药用途特别是作为预防或治疗高脂血症、肥胖症、II型糖尿病药物的用途。
技术介绍
：血脂异常是指血浆中的总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)和低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)异常增多，高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)过低。LDL可被氧化成oxLDL，过多的oxLDL在巨噬细胞内堆积，使巨噬细胞变成泡沫细胞，同时引起血管内皮细胞凋亡和炎性反应，共同促进动脉粥样硬化斑块形成，诱发心血管疾病。由于心血管病发病率位居全球前列，调血脂药物的研究一直受到高度重视。肥胖症是一种最常见的慢性内分泌代谢疾病，在当今世界人群中发病率呈逐年上升趋势，已成为全球性的公共健康难题。肥胖症能引发许多健康问题，不仅会增大高脂血症、高血压、冠心病、II型糖尿病的发病率和死亡率，还易引起呼吸系统并发症、骨关节炎症以及精神方面的疾病。各种实验结果显示适度的体重减轻(5-10％)可明显降低糖尿病、肿瘤和心血管系统的危险系数。刺芒柄花素，亦称作鹰嘴豆芽素B(BiochaninB)，是一种异黄酮类植物雌激素，广泛分布于红车轴草、甘草、葛根、降香檀、紫穗槐等豆科植物中，以红车轴草中含量最高。刺芒柄花素具有抗菌、抗肿瘤、降血脂、抗心律不齐、改善雌激素水平等多种生理活性。刺芒柄花素可以与哺乳动物及人类的雌激素受体(ER)相结合并将其激活，在体内具有双向调节作用，即：当体内雌激素水平较高时发挥抗雌激素活性，而体内雌激素水平较低时具有拟雌激素作用。动物实验中发现，刺芒柄花素油酸酯(OF)可显著降低饮食诱导的肥胖大鼠体重和脂肪含量。同时发现，OF可降低血浆中总胆固醇和游离脂肪酸(FFA)的含量，对TG和LDL-C也有一定的降低作用，并且其可明显升高血浆中HDL-C含量，说明其具有有益的调血脂活性。另外，实验发现，OF也可降低肥胖小鼠血浆中葡萄糖和胰岛素的含量，提高胰岛素敏感指数(ISI)，说明其可改善高脂饮食诱导的胰岛素抵抗。3T3-L1细胞试验显示，OF可明显抑制前脂肪细胞的增殖和脂肪细胞分化过程中的脂肪蓄积，同时也可促进脂肪细胞的脂解作用。
技术实现思路
：本专利技术公开了通式I的一类高异黄酮芳酸及芳酸酯类衍生物，经初步生物活性研究显示，本专利技术化合物对3T3-L1细胞的增殖均有抑制活性，且化合物XP-B4超过阳性药吡格列酮和阿托伐他汀钙。本专利技术化合物具有潜在的治疗高脂血症、肥胖症、II型糖尿病药物的用途。其中R1代表H、OH、OCH3、OCH2CH3、SCH3、NHCH3、N(CH3)2、NO2、卤素、CF3或C(O)CH3。R2代表OH、NH2、单取代或多取代烷基氨基、苯胺、杂环胺、羧酸、磺酸、羧酸酯、磺酸酯、酰胺、磺酰胺。n代表0、1、2、3、4、5、6。其中R1优选代表H、Cl、OCH3。其中R2优选代表甲酸、甲酸酯。其中n优选代表0、1、2。本专利技术化合物结构如下：下面药理实验及实施例中化合物的代号等同于此处的代号所对应的化合物结构。本专利技术通式的化合物可以由以下方法制备：(a)pyridine，piperidine，reflux，2h；(b)H2，10％Pd/C，rt，12h；(c)BF3/Et2O，80℃，7h；(d)Triethoxymethane，morpholine，DMF，120℃，4h；(e)H2SO4，CH3OH，rt，2h；(f)K2CO3，KI，DMF，80℃，5h；(g)K2CO3，KI，DMF，80℃，8h；(h)HCl，dioxane，100℃，12h.下面是本专利技术的部分化合物的药理活性检测：我们对合成的目标化合物进行了初步生物活性筛选，测试了化合物对前脂肪细胞增殖的影响。药理实验在南京医科大学附属脑科医院肖红老师实验室完成。1实验材料吡格列酮，阿托伐他汀钙购自南京生利德生物技术有限公司；T0901317购自上海浩然生物技术有限公司；青霉素，小牛血清(FBS)购自GibcoBRLofInvitrogenCorporation(Carlsbad，CA)；胰蛋白酶，四甲基偶氮唑盐(MTT)购自Sigama(St.Louis，MO)；其他试剂均为国产分析纯。2实验方法2.1细胞培养3T3-L1细胞分别用DMEM培养基(含10％小牛血清、100U/mL的青霉素和100μg/mL的链霉素)于5％CO2、37℃孵育箱中培养。待细胞长至汇合度为80％左右时传代。传代细胞时，倒掉旧培养基，PBS(磷酸盐缓冲液)洗两次。加入少量0.25％胰蛋白酶，铺平瓶底，37℃下消化约1-2min，倒置显微镜下观察到细胞变圆，倒掉胰酶，加入新鲜培养基，吹打混匀，植入新的培养瓶中，继续培养。细胞计数，取少量细胞混悬液与0.4％台盼蓝溶液等体积混合，用吸管吹打混匀，取少许混合液滴入计数板与盖玻片的上方空隙中，注意不要产生气泡，于100倍低倍显微镜下观察，死细胞可被台盼蓝染色，而活细胞不会，移动计数板至看到计数方格，数出四个大格的未染色细胞数，记录包括压右线和上线的细胞，左线和下线不计，细胞数/mL＝四大格细胞总数/4×104。冻存细胞时，收获对数生长期细胞(收集细胞前24h换液)，冻存液(5％DMSO、95％DMEM)重悬细胞，调细胞密度为5×106～1×107个/mL，分装入无菌冻存管中，每管加1.5mL细胞悬液，做好标记和记录，冻存管在4℃放置20min，-20℃放置20min，在-70℃超低温冰箱过夜后移入液氮容器中。细胞复苏，从液氮容器中取出冻存管，迅速放入盛有40℃水的烧杯中，不时摇动，使之尽快融化，用酒精棉球消毒冻存管表面，吸出细胞悬液，移入离心管中，补加细胞培养液至10mL，继续培养。2.2细胞增殖实验将3T3-L1细胞接种于96孔细胞培养板中。常规培养1天后，换成含1×10-4mol/L的目标化合物和OF的DMEM培养液，对照组为含0.1％(V/V)的DMSO的培养液，每组设3复孔，处理2天。弃去孔中培养液，每孔加20μLMTT液(5mg/mL)，37℃培养4h，弃孔中液体，每孔加入150μLDMSO，充分振摇，立即在酶联免疫检测仪上测定吸光度(Opticaldensity，OD)，测定波长为570nm。抑制率按下式计算：3实验结果化合物及阳性药对3T3-L1细胞增殖的影响如下：4结果讨论本专利技术化合物的活性结果可以看出，本课题合成的化合物(100μM)对3T3-L1细胞均有抑制活性。本专利技术化合物用于调血脂、降低心血管疾病的作用机制、作用强度和作用时间还需要在进一步的研究中阐明。本专利技术进一步涉及通式的化合物与药学上可接受的载体组成的药用组合物。本专利技术化合物可以单独或与一种或一种以上的药学上可以接受的载体组合制成制剂以供给药。可以用口服剂型给药，如普通片剂和胶囊、缓释片剂和胶囊、控释片剂和胶囊、滴丸、可分散粉末本文档来自技高网...

【技术保护点】
下列通式I的化合物：其中R1代表H、OH、OCH3、OCH2CH3、SCH3、NHCH3、N(CH3)2、NO2、卤素、CF3或C(O)CH3。R2代表OH、NH2、单取代或多取代烷基氨基、苯胺、杂环胺、羧酸、磺酸、羧酸酯、磺酸酯、酰胺、磺酰胺。n代表0、1、2、3、4、5、6。

【技术特征摘要】
1.下列通式I的化合物：
其中R1代表H、OH、OCH3、OCH2CH3、SCH3、NHCH3、N(CH3)2、NO2、卤素、CF3或C(O)CH3。
R2代表OH、NH2、单取代或多取代烷基氨基、苯胺、杂环胺、羧酸、磺酸、羧酸酯、磺酸酯、酰胺、
磺酰胺。
n代表0、1、2、3、4、5、6。
2.根据权利要求1所述的化合物其药学上可接受的盐或...

【专利技术属性】
技术研发人员：向华，徐佩，钱周阳，陈德英，陈明琪，尤启冬，
申请(专利权)人：中国药科大学，
类型：发明
国别省市：江苏;32