一种枯草芽孢杆菌、菌剂、菌剂的制备方法和菌剂的应用技术

本发明专利技术公开了一种枯草芽孢杆菌、菌剂、菌剂的制备方法和菌剂的应用，该菌为枯草芽孢杆菌JQ-001，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏时间：2015年11月9日，保藏登记号为CGMCCNo.11632；经种子活化、种子培养、发酵培养后可制得液体菌剂或固体菌剂；本发明专利技术进一步提供了所述枯草芽孢杆菌的菌剂制备方法，以及在制备防治水稻稻瘟病和马铃薯疮痂病药物中的应用。该菌剂具有很高的生物活性，其生产具备周期短、成本低的特点，同时该菌剂环境相容性好，在防治水稻稻瘟病和马铃薯疮痂病方面效果显著，对人畜无毒害作用，使用方便。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术设及微生物
，具体设及一种枯草芽抱杆菌、菌剂、菌剂的制备方法 和菌剂的应用。
技术介绍
稻攝病是水稻重要病害之一，在世界各稻区均有发生，其中W叶部、节部发生为 多，发生后可造成不同程度减产，严重时减产40 % -50 %，造成惨重损失。该病由稻梨抱菌引 起，病菌W分生抱子和菌丝体在稻草和稻谷上越冬，翌年产生分生抱子借风雨传播到稻株 上，萌发侵入寄主向邻近细胞扩展发病，形成中屯、病株。病部形成的分生抱子，借风雨传播 进行再侵染，播种带菌种子可引起苗攝。在自然条件下，稻攝菌只侵染水稻，因此对水稻的 生产威胁极大。 目前对于该病的防治主要是用70%甲基托布津可湿性粉剂500倍液、50%多菌灵 可湿性粉剂250倍液、25%使百克乳油2000倍液、强氯精可湿性粉剂500倍液、10%浸种灵乳 油2500倍液、25 %施保克乳油3000-4000倍液药剂浸种48-72小时处理或者是在发病时喷施 30 %克攝散乳油500倍液、50 %消菌灵水溶性粉剂500倍液、40 %克百菌悬浮剂500倍液、 25 %咪鲜胺乳油1500倍液、40 %稻攝灵可湿性粉400倍液、50 %四氯苯献可湿性粉剂400倍 液、50 %多菌灵可湿性粉剂500-600倍液、70 %甲基托布津可湿性粉剂1000倍液、75 %Ξ环 挫可湿性粉剂2000倍液、20 %稻曲克敌可湿性粉剂1500倍液、20 %毒菌锡胶悬剂400倍液等 化学药剂。长期使用化学杀菌剂，导致病菌抗药性增强，只有加大用药剂量W及缩短喷药时 间间隔来控制病害，不仅增加了生产成本也导致农药残留量越来越多大。大量使用化学药 剂，容易造成±壤污染，酸碱失调，养分含量降低，±壤板结，严重影响作物的产量。因此采 用生物防治来控制水稻稻攝病是农业发展的必然趋势。而采用括抗微生物防治病害是代替 化学药剂的一种安全、无毒、有效的新方法。括抗微生物不仅可W抑制病原菌的生长，还能 增大±壤中微生物的数量，促进植物生长，对改善生态系统，保持生物多样性，维护生态平 衡有着重要的作用。 疮挪病被视为马铃馨生产中的世界性病害，在我国许多马铃馨主产区普遍存在， 连作地、偏碱地及栽培管理不当的情况下发生程度更为严重。近年来，疮挪病在我国很多马 铃馨生产地区相继发生，其中黑龙江、内蒙古、河北、山东、山西、陕西、贵州、甘肃、四川、湖 南、湖北、云南等多个省区的马铃馨主产区均有关于该病的报道，基本覆盖了东北、华北、西 北和西南。并且在气候干旱、±壤偏碱性、连作重巷严重的地区发病率较高。[000引马铃馨疮挪病病菌主要为害块茎，从皮孔侵入，发病初期在块茎表皮产生褐色斑 点，W后逐渐扩大，侵染点周围的组织坏死，块茎表面变粗糖，质地木栓化。同时依据病原菌 种类的不同，在成熟的馨块上常表现为凸起或凹陷的表面病斑，严重时病斑连片，馨块的品 质降低。同时，由于表皮组织被破坏后，易被其他病原菌侵染，造成块茎腐烂，严重影响马铃 馨的外观，降低其品质和胆藏周期。利用生物防治±传病害是一种行之有效的防治措施，是植物保护中必不可少的组 成部分。特别是利用自然界中原本存在的植物根际有益微生物对祀标病原微生物的括抗作 用，来控制病原微生物的危害，具有较小的环境风险，是一种环境友好的防治技术。随着人 们对食品安全、生态安全重视，生物防治是实现现代化农业可持续发展的重要策略之一。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种新的枯草芽抱杆菌。 本专利技术的另一目的在于提供所述枯草芽抱杆菌菌剂及制备方法， 本专利技术还有一目的在于提供利用所述枯草芽抱杆菌菌剂在制备防治植物病害药 物中的应用。 本专利技术的目的是通过W下技术方案实现的： 一种枯草芽抱杆菌，其特征在于:枯草芽抱杆菌(Bacillus subtilis)JQ-001，保 藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中屯、，保藏单位地址:北京市朝阳区北辰 西路1号院，保藏时间：2015年11月9日，保藏登记号为CGMCC No.11632。 本专利技术的枯草芽抱杆菌(Bacillus subtilis)JQ-001从黑龙江建Ξ江农场连作5 年W上水稻根基±壤中分离、纯化W及筛选步骤获得的，采用形态特征、生理生化实验、分 子生物学鉴定法W及leSrDNA同源序列比对分析最终确定上述保藏编号的菌株为枯草芽抱 杆菌(Bacillus subtilis)。 -种枯草芽抱杆菌菌剂，是枯草芽抱杆菌JQ-001经种子活化、种子培养、发酵培养 后制成的菌剂;该菌剂包括液体菌剂和固体菌剂。 W枯草芽抱杆菌为活性成分的菌剂的制作方法，具体步骤如下：[001引a.菌种活化:将低溫保存的枯草芽抱杆菌JQ-001菌株接种于固体培养基上，于35- 38°C培养34-3化;挑取单菌落转接到斜面培养基上，于35-38Γ培养16-24h，用无菌水洗下 培养基表面菌体作为接种液； b. -级种子液制备：按照5%-10%的接种量向种子培养基中接入步骤a制备的接 种液，转速200-26化pm，溫度35-38°C，摇床培养16-24h，作为一级种子液； C.二级种子液制备:按照0.5%-3%的接种量向种子培养基中接入步骤b制备的一 级种子液，通气量为0.4-1.5vvm，揽拌速度为180-260rpm，培养时间为18-24h，作为二级种 子液；[001引种子培养基的组成成分及其重量百分比为:葡萄糖蛋白腺酵 母粉0.6%-1%、牛肉膏0.5%-0.7%、氯化钢0.5%、其余为水； d.发酵培养:按照5%-10%的接种量向发酵培养基中接入步骤C制备的二级种子 液，通气量为0.4-1.5vvm，揽拌速度为180-260巧m，培养时间为24-30h，得到发酵液； 发酵培养基的组成成分及其重量百分比为:葡萄糖3%-5%、蛋白腺0.5%-1.5%、 酵母粉0.03%-0.08%、蛋白腺0.1%-0.3%、豆巧粉0.5%-1.5%、硫酸儀0.01%-0.05%、 硫酸儘0.01 % -0.05 %，其余为水； e.将上述发酵液通过水洗和分子筛浓缩，得到枯草芽抱杆菌液体菌剂。 f.将上述发酵液喷雾干燥:进口溫度150-200°C，出口溫度50-90°C，加入喷雾载体 可溶性淀粉，得到枯草芽抱杆菌粉剂菌剂。 g.将W下原料按重量百分比混合均匀：枯草芽抱杆菌粉剂20-30%;白炭黑10- 15% ;娃藻±: 10-20% ;十二烷基横酸钢1-10 % ;糞横酸盐D-1002 2-10% ;膨润±10-20 %， 润湿剂W-2001 2-10%。然后利用气流粉碎机粉碎至400目W上，控制水分含量^ 5%。得到 枯草芽抱杆菌可湿性粉剂菌剂。 进一步的，本专利技术还提供W上枯草芽抱杆菌菌剂在制备防治水稻稻攝病和马铃馨 疮挪病药物中的应用。 本专利技术具有W下有益效果： 由本专利技术枯草芽抱杆菌制得的菌剂喷洒到作物叶面上，能够定植在作物表面，占 领病原菌生态位，抑制病原菌生长，对水稻稻攝病病原菌抑制率达到91.3% W上;喷施到地 面上通过渗透，同样可W抑制病原菌生长，其对马铃馨疮挪病病原菌抑制率达到89% W上； 并能促进作物生长，增加作物产量，维护生态平衡。并且其液体菌剂的生产具有周期短，活 性高、成本低的特点，利于工业化生产，而制备成固体菌剂，特别是制本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种枯草芽孢杆菌，其特征在于：枯草芽孢杆菌JQ‑001，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏单位地址：北京市朝阳区北辰西路1号院，保藏时间：2015年11月9日，保藏登记号为CGMCC No.11632。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：史盼盼，李元鑫，郭婧，贾振宇，
申请(专利权)人：山东京青农业科技有限公司，
类型：发明
国别省市：山东;37